【摘要】：目的:建立一種快速、靈敏的檢測脆性X智障基因(Fragile X mental retardation,FMR1)、X染色體失活基因(X chromosome inactivation,XIST)甲基化的實(shí)驗(yàn)方法。方法:用亞硫酸氫鈉和對苯二酚對基因組DNA進(jìn)行脫氨基修飾。以修飾后的DNA為模板,用兩對不同的引物:1對甲基化特異性引物和1對非甲基化特異性引物擴(kuò)增FMR1基因(CGG)n重復(fù)序列區(qū)、FMR1和XIST基因的啟動子區(qū)。PCR產(chǎn)物進(jìn)一步克隆、測序。結(jié)果:以亞硫酸氫鈉和對苯二酚脫氨基修飾后的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)期目的基因片段大小相符合,無非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。測序結(jié)果表明,FMR1、XIST基因中CpG島的非甲基化的堿基C轉(zhuǎn)變?yōu)閴A基U,而CpG島中被甲基化的堿基C不改變。結(jié)論:成功地建立了檢測FMR1、XIST甲基化的實(shí)驗(yàn)方法,為實(shí)驗(yàn)室診斷脆性X綜合征提供了新的方法。
【圖文】：

M:DNAmarker:1:AmPlfiieationofCGGBPIeDNA圖1CGGBPIcDNA瓊脂糖凝膠電泳分析FiglAgoarsegelelertoPhoersisofCPRrfamgentofCGGBPIeDNAM:DNAmarker;1:RecombinantPlas們。idwiht刀比的Hl和助”l;2:PRSTEAwihtB“優(yōu)Hl和仰”1圖2重組質(zhì)粒pRSETA/CGGBPI的刀公功HI和助”I雙酶切鑒定FiZgReeombinnatPlasmidRPSET^C/GGBPIidentifiedwhtiBmaHI和勒”Idigestion
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R749.99

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陳雨亭,B.Bardoni,余珉,朱寧,吳冠蕓,J.L.Mandel,沈巖;FMRP與TDG蛋白的相互作用[J];科學(xué)通報(bào);1999年18期

2 樓蓉,梅品超,貢金英,朱寧,寇朝輝,吳冠蕓,沈巖;脆性X智力低下蛋白與NDK/Nm23-H2的相互作用[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2001年06期

，

本文編號：2680831