【摘要】：目的:生命早期是神經(jīng)元生長發(fā)育以及突觸形成的關(guān)鍵階段。生命早期應(yīng)激(Early life stress,ELS)會對個體的生理以及心理發(fā)育產(chǎn)生著不同程度的不良影響,參與著某些疾病或者行為易感因素的形成,從而誘導(dǎo)個體在成年期抑郁焦慮行為的增加。因此,我們通過建立生命早期應(yīng)激模型,比較在青春期和成年期通過艾司西酞普蘭和7,8-二羥基黃酮(7,8-DHF)干預(yù)觀察其對雄性小鼠抑郁焦慮樣行為及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的影響,來探討生命早期應(yīng)激致精神疾病發(fā)病的可能的生物學(xué)機制,以及早期干預(yù)是否可以延緩或防止相關(guān)疾病發(fā)病這一假說。研究方法:建立生命早期應(yīng)激模型,即母孕期應(yīng)激合并母嬰分離。將50只C57BL/6J孕鼠隨機分為應(yīng)激組和非應(yīng)激組。母孕期應(yīng)激:應(yīng)激組在懷孕期(GD)5-19天施加慢性溫和性刺激。該過程包括食物和水剝奪(12h)、空籠(12h)、濕籠(8h)、傾斜籠子45°(12h)、頻閃(12h)、群養(yǎng)(12h)、晝夜顛倒(24h)。母嬰分離:應(yīng)激組子代小鼠在出生后(PN)2-21天與母鼠進行分離,時間為上午8點-12點,合計4個小時。非應(yīng)激組孕鼠及其子代正常飼養(yǎng)。按照隨機且不同窩別的原則將應(yīng)激組和非應(yīng)激組子代雄鼠分別在青春期(PND30-50)和成年期(PND60-80)給予持續(xù)21天ES:10mg/kg/d;7,8-DHF:10mg/kg/d;等體積的生理鹽水腹腔注射。待小鼠成年后進行曠場實驗、高架十字迷宮、強迫游泳實驗來評價抑郁焦慮樣行為,使用免疫酶聯(lián)吸附試驗檢測小鼠海馬(HIP)、前額葉(PFC)、下丘腦區(qū)域的BDNF的表達。結(jié)果:1、曠場實驗的運動距離統(tǒng)計分析顯示,發(fā)現(xiàn)生命早期應(yīng)激(ELS)減少了小鼠的運動距離,說明經(jīng)歷了ELS的小鼠焦慮水平增加。而ES和7,8-DHF的干預(yù)可以使小鼠運動距離增加,緩解這種焦慮狀態(tài),且二者之間的療效沒有差別。2、曠場實驗的中心時間統(tǒng)計分析顯示,經(jīng)歷過生命早期應(yīng)激的小鼠出現(xiàn)在曠場中心停留時間縮短的焦慮樣行為,藥物干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)這種狀態(tài),ES和DHF都使得經(jīng)歷過生命早期應(yīng)激的小鼠停留在曠場中心區(qū)域時間增加,改善了其焦慮水平,且二者之間的療效沒有差別。在ES水平和DHF水平均發(fā)現(xiàn)在青春期進行了藥物干預(yù)的小鼠在曠場中心區(qū)域停留的時間要長于成年期組,說明在青春期藥物干預(yù)的效果較好。3、高架十字迷宮的開放臂時間統(tǒng)計分析顯示,ELS導(dǎo)致小鼠進入開放臂的停留時間減少,ES和DHF干預(yù)均可以增加小鼠在開放臂停留的時長,緩解小鼠的焦慮,且二者之間的療效沒有差別。4、強迫游泳的不動時間統(tǒng)計分析顯示,生命早期應(yīng)激使小鼠的不動時間增長,說明ELS導(dǎo)致小鼠抑郁,但藥物干預(yù)可以使不動時間增長逆轉(zhuǎn)這種不動狀態(tài),改善其抑郁行為,在ES水平和DHF水平均發(fā)現(xiàn)青春期的不動時長較成年期干預(yù)明顯縮短,說明干預(yù)效果要優(yōu)于成年期。5、海馬、前額葉、下丘腦的BDNF表達統(tǒng)計分析顯示,ELS使BDNF的表達水平變低,ES和DHF藥物干預(yù)可以提高ELS組BDNF的表達水平,不同時期的干預(yù)效果不同,青春期干預(yù)可以使腦內(nèi)的BDNF的表達量升高,說明在青春期干預(yù)的效果對BDNF表達量的影響優(yōu)于成年期。結(jié)論:生命早期應(yīng)激(ELS)導(dǎo)致子代雄性小鼠在成年期出現(xiàn)抑郁和焦慮樣行為,并且使海馬(HIP)、前額葉(PFC)、下丘腦這三個區(qū)域的BDNF表達水平下降。通過ES和7,8-DHF的干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)成年期小鼠出現(xiàn)抑郁和焦慮樣行為,并且改善BDNF的水平。青春期的干預(yù)效果優(yōu)于成年期的干預(yù)效果。
【圖文】：

3 結(jié) 果本實驗從 period（青春期和成年期）、model（生命早期應(yīng)激組和對照組）、drug（ES、DHF、NS）這三個因素入手對所有實驗數(shù)據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計分析。3.1 曠場試驗運動距離在 period 和 model 存在兩因素交互作用[F(1,84)=4.637,P=0.034]，青春期水平[F(2,84)=8.132,P=0.001]和成年期水平[F(2,84)=4.841,P=0.01]，ELS 減少了小鼠的運動距離，說明經(jīng)歷了 ELS 的小鼠焦慮水平增加。model 和 drug 存在兩因素交互效應(yīng)[F(2,84)=8.211,P=0.001]，在 ELS 狀態(tài)下進行 ES 干預(yù)[F(1,84)=4.766,P=0.032]和 DHF干預(yù)[F(1,84)=4.118,P=0.046]會增加小鼠的運動距離（distance），緩解這種焦慮狀態(tài)。但二者的療效對比沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

3.2 曠場試驗中心時間model、period、drug之間存在顯著的三因素交互作用[F(2,84)=12.522,P＜0.001]。在 NS 水平 period 和 model 存在交互作用[F(1,84)=4.986,P=0.028]，不管在青春期[F(1,84)=62.656,P＜0.001]還是成年期[F(1,84)=22.635,P＜0.001]model 具有簡單單獨效應(yīng)，表明經(jīng)歷過生命早期應(yīng)激的小鼠出現(xiàn)在曠場中心停留時間較短的焦慮行為。在 ELS 水平 period 和 drug 存在交互作用[F(2,84)=4.573,P=0.013]，，青春期水平[F(2,84)=28.886,P＜0.001]和成年期水平[F(2,84)=5.530,P=0.006]drug 均存在簡單單獨效應(yīng)，說明藥物干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)這種狀態(tài)，ES 和 DHF 都使得經(jīng)歷過生命早期應(yīng)激的小鼠停留在曠場中心區(qū)域時間增加，改善了其焦慮水平，不過二者之間（P＞0.05）療效沒有差異。在 ES 水平[F(1,84)=20.890,P＜0.001]和 DHF 水平[F(2,84)=18.845,P＜0.001]均發(fā)現(xiàn)在青春期進行了藥物干預(yù)的小鼠在曠場中心區(qū)域停留的時間要長于成年期組，說明在青春期藥物干預(yù)的效果較好。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.4

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