發(fā)布時(shí)間：2020-05-18 22:30

【摘要】： 阿爾茨海默氏�。ˋlzheimer's Disease，AD）是與老年人記憶喪失有關(guān)的 神經(jīng)變性疾病，在老年人群中的發(fā)病率僅次于心腦血管疾病和癌癥。AD 的病因是多方面的，最主要有：（1）神經(jīng)細(xì)胞的損傷和老化；（2）遺傳易感性， 其中研究得較清楚的幾個(gè)與AD有關(guān)的基因有APP、PS-1、PS-2、ApoE 基因；（3）神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫。AD在發(fā)病中后期都出現(xiàn)氧化應(yīng)激（oxidative stress），這是AD重要和關(guān)鍵的病理生理過(guò)程。 褪黑素（melatonin，MT）的降低被認(rèn)為是AD發(fā)生的一個(gè)重要原因，可 以解釋AD病人海馬去甲腎上腺素、5-HT的降低及單胺氧化酶活性的增加。 MT對(duì)AD的治療作用成為近年的研究熱點(diǎn)，這是因?yàn)镸T具有以下特點(diǎn)： 1、容易通過(guò)血腦屏障。2、是目前所知最強(qiáng)效的自由基清除劑。3、是強(qiáng)效 親脂性抗氧化劑。4、能阻止β-淀粉樣蛋白的形成。 本實(shí)驗(yàn)采用原位雜交、RT-PCR、激光共聚焦、放免、電鏡和Morris 水迷宮行為學(xué)檢測(cè)等方法，觀察了MT受體Mel 1a和Mel 1b在正常成年 大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分布及MT限速酶AANAT在大鼠老化時(shí)的變化。在 前人基礎(chǔ)上建立了一種AD大鼠模型并在行為學(xué)、組織水平、蛋白水平、 分子水平、超微病理、基因水平和第二信使水平得到了進(jìn)一步證實(shí)。同時(shí) 探討了不同劑量的MT對(duì)模型大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)AD相關(guān)基因APP、PS-1、 PS-2表達(dá)和胞內(nèi)鈣的影響，主要結(jié)果如下： 一、MT受體和MT限速酶在正常大鼠中表達(dá)的時(shí)空特點(diǎn) 1、Mel 1a和Mel 1b受體在正常成年大鼠CNS的分布差異（原位雜交） （1）Mel 1a mRNA-positive細(xì)胞主要分布于海馬錐體細(xì)胞層和齒狀回、 額葉和頂葉大腦皮層、視上核、室旁核、視交叉上核、中松果體韁核、小 腦Purkinje細(xì)胞層和頂核、脊髓前角、丘腦紋狀體髓質(zhì)、丘腦外側(cè)核、外 側(cè)丘系、內(nèi)側(cè)丘系、面神經(jīng)核、巨細(xì)胞網(wǎng)狀核、三叉神經(jīng)核和紋狀皮質(zhì)等。 m Mel fo mRNA｛ositive細(xì)胞主要分布于小腦 Purkinie細(xì)胞層、頂核、 球狀核和栓狀核，海馬錐體細(xì)胞層和齒狀回、額葉、頂葉、頷葉和枕葉大 腦皮層，脊髓前角，視上核和交叉上核。 m Mel la mRNA中ositive細(xì)胞分布廣泛、含量豐富，而 Mel fo mRNA｛ositive細(xì)胞分布較為局限，但在海馬和大腦皮層這兩種受體表達(dá) 均非常豐富，提示該區(qū)可能是MT的兩個(gè)主要作用部位。 2、采用RTFCR的方法檢測(cè)了從胚胎期到老年期不同鼠齡大鼠中樞 AANAT的表達(dá)變化。發(fā)現(xiàn)胚胎 16天，大腦皮層額葉 AANAT有較高的表 達(dá)，生后1周組明顯降低，而出生后2周組AANAT表達(dá)達(dá)到峰值，生后 3周組明顯降低，和生后一月、三月組及18月齡老年組無(wú)明顯差異。在海 馬，胚胎 16天，AANAT有較高的表達(dá)，生后 1周組降低，生后 2周組表達(dá) 達(dá)峰值，生后3周組AANAT表達(dá)明顯降低，和一月齡組、三月齡無(wú)明顯 差異，18月齡老年組海馬 AANAT表達(dá)基本消失，提示 AANAT表達(dá)的下降 可能是老化時(shí)MT水平下降的一個(gè)原因。 二、AD大鼠模型的制備及病理學(xué)改變 1、AD大鼠的制備，采用皮下間斷注射線粒體呼吸鏈抑制劑疊氮鈉， 連續(xù)四周，采用MOmS水迷宮對(duì)大鼠進(jìn)行空間記憶能力檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)大鼠潛 伏期延長(zhǎng)，提示AD大鼠出現(xiàn)記憶功能障礙。 2、電鏡觀察AD大鼠大腦皮層和海馬神經(jīng)元中超微結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)海馬和 額葉大腦皮層神經(jīng)元中出現(xiàn)脂褐素沉積和大量髓鞘樣改變，線粒體腫脹， 線粒體峭斷裂、減少。突觸密度降低，突觸內(nèi)突觸小泡數(shù)目減少，突觸間 隙增寬，突觸后致密物厚度降低戾觸下致密小體數(shù)目明顯減少，表明神經(jīng) 元出現(xiàn)氧化性損傷和老化改變，在超微病理水平證實(shí)該AD模型的可靠性。 3、AD大鼠海馬、大腦皮層A6在注射NaN3后四周較正常對(duì)照組明 顯升高，與AD密切相關(guān)的基因APP、PSJ、PS上也高于正常對(duì)照組，提示 NaN3除了造成神經(jīng)損傷外，也能導(dǎo)致AD相關(guān)基因的活躍表達(dá)。 4、AD大鼠模型在注射 NaN3一周組大鼠海馬 Mel 3受體表達(dá)上調(diào)， 在二周和三周組仍過(guò)度表達(dá)，在四周組達(dá)峰值，而 Mel受體表達(dá)無(wú)明顯 Vlll 變化，提示AD大鼠腦內(nèi)MT受體出現(xiàn)代償性高表達(dá)。 5、在加入 NaN。后 205，海馬腦片 CA區(qū)錐體細(xì)胞明顯升高，處于鈣 超載狀態(tài)；加入NaN。后200s，急性分離細(xì)胞胞漿內(nèi)的 KaD］i即開(kāi)始升高， 并在隨后的 10min中持續(xù)升高，，11 min時(shí)上升趨勢(shì)減緩，提示 NaN。致神經(jīng) 損傷的最早反應(yīng)可能是鈣超載而升高的鈣離子可能來(lái)自貯存鈣。 三、MT對(duì)AD大鼠模型記憶的影響及可能機(jī)制 1、MT能顯著降低AD大鼠在MOtriS水迷宮測(cè)試中的潛伏期，但小劑量 和大劑量MT的作用差異不明顯，表明MT可改善AD大鼠的空間記憶能力。 2、不同劑量的MT能阻斷AD大鼠大腦皮層和海馬中AO的升高，以 IMT、SMT和10MT的作用尤為明顯，同時(shí)MT也可使AD大鼠大腦皮 層和海馬中過(guò)度表達(dá)的 APP mRNA、PSd 和 PS上 有所下降， 但MT的作用并沒(méi)有量效關(guān)系，提示MT改善AD記憶功能的基礎(chǔ)可能是 通過(guò)抑制 CNS Ap的生成及 AD相關(guān)基因的過(guò)度表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 卜樂(lè)平;侯家驥;;大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)衰老的形態(tài)學(xué)研究—大腦頂葉皮質(zhì)神經(jīng)元的超微形態(tài)改變[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;1989年01期

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本文編號(hào)：2670405