【摘要】：【研究背景與目的】慢性應(yīng)激誘導(dǎo)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞激活,使其產(chǎn)生大量的炎性介質(zhì),并介導(dǎo)抑郁癥的發(fā)生。小膠質(zhì)細(xì)胞極化的兩種表型經(jīng)典型M1和替代激活M2型對中樞神經(jīng)炎癥有重要的調(diào)節(jié)作用,并參與了抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。已有研究顯示Apelin-13具有抗抑郁的作用,但其具體的機制仍未闡明。本研究從小膠質(zhì)細(xì)胞極化的角度探討Apelin-13改善慢性應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠抑郁樣行為的可能機制�！痉椒ā砍赡晷坌許prague Dawley(SD)大鼠接受28天的慢性浸水束縛應(yīng)激。每只應(yīng)激組大鼠通過側(cè)腦室微量注射Apelin-13(2μg/2μl),連續(xù)注射7天。采用糖水偏好、強迫游泳和懸尾實驗檢測大鼠抑郁樣行為。采用Western blot檢測大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞M1型極化標(biāo)志物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)、促炎因子白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1beta,IL-1β)的蛋白表達(dá)以及小膠質(zhì)細(xì)胞M2型極化標(biāo)志物精氨酸酶1(Arginase 1,Arg1)、抗炎因子白細(xì)胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)和白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)的蛋白表達(dá)。采用免疫熒光雙標(biāo)檢測小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物離子鈣接頭蛋白抗原(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1,Iba-1)分別與小膠質(zhì)細(xì)胞極化標(biāo)志物Arg1和i NOS的免疫熒光共表達(dá)。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(2μg/m L)處理N9小膠質(zhì)細(xì)胞6 h,再用Apelin-13(0.1μM)處理24 h,Western blot檢測i NOS和Arg1的蛋白表達(dá)。【結(jié)果】慢性束縛浸水應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠抑郁樣行為的產(chǎn)生;與應(yīng)激組相比,Apelin-13組顯著抑制大鼠相對糖水消耗、體重增量、以及強迫游泳和懸尾不動時間;慢性束縛浸水應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞極化;與應(yīng)激組相比,Apelin-13抑制下調(diào)大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞i NOS、IL-1β和IL-6的蛋白表達(dá),而促進了大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞Arg1、IL-4和IL-10的蛋白表達(dá);Apelin-13抑制Iba-1與i NOS的共定位表達(dá),而促進Iba-1與Arg1的共定位表達(dá)。與空白對照組比較,N9小膠質(zhì)細(xì)胞LPS組Arg1的蛋白表達(dá)顯著降低,i NOS的蛋白表達(dá)顯著增加,而給予Apelin-13處理后,Arg1的蛋白表達(dá)顯著增加,而i NOS的蛋白表達(dá)明顯降低�！窘Y(jié)論】Apelin-13改善慢性應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠抑郁樣行為,其機制可能與調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化有關(guān)。
【圖文】：

曝光。2.10 實驗設(shè)計2.10.1 Apelin-13 對 CWIRS 誘導(dǎo)大鼠抑郁癥樣行為的影響大鼠在適應(yīng)環(huán)境后（3-5 天），隨機分為四組：無應(yīng)激生理鹽水組（Non stressed+ Vehicle 組），無應(yīng)激 Apelin 組（Non stressed + Apelin 組），應(yīng)激生理鹽水組（CWIRS + Vehicle 組）及應(yīng)激 Apelin 組（CWIRS +Apelin 組）。應(yīng)激組接受慢性浸水束縛應(yīng)激（CWIRS）4 周，無應(yīng)激組則不予應(yīng)激。應(yīng)激結(jié)束后，第二天所有實驗大鼠進行側(cè)腦室置管，手術(shù)后恢復(fù) 24 h。隨后連續(xù) 7 天四組均給予側(cè)腦室微注射生理鹽水（2 μL/只）或 Apelin-13 (3 μg/2μL/只)。給藥結(jié)束后，四組實驗大鼠均進行自發(fā)活動，強迫游泳，懸尾行為學(xué)檢測。

17圖 2 大鼠 CWIRS 與免疫熒光檢測流程圖2.10.3 Apelin-13 對 CWIRS 誘導(dǎo)大鼠海馬細(xì)胞因子表達(dá)的影響大鼠在適應(yīng)環(huán)境后（3-5 天），隨機分為四組：無應(yīng)激生理鹽水組（Non stressed+ Vehicle 組），無應(yīng)激 Apelin 組（Non stressed + Apelin 組），應(yīng)激生理鹽水組（CWIRS + Vehicle 組）及應(yīng)激 Apelin 組（CWIRS +Apelin 組）。應(yīng)激組接受慢性浸水束縛應(yīng)激（CWIRS）4 周，無應(yīng)激組則不予應(yīng)激。應(yīng)激結(jié)束后，第二天實驗大鼠進行側(cè)腦室置管，，手術(shù)后恢復(fù) 24 h。隨后連續(xù) 7 天四組均給予側(cè)腦室微注射生理鹽水（2 μL/只）或 Apelin-13 (2 μg/2μL/只)。大鼠給藥結(jié)束，待 24 h 后處死大鼠并取腦分離海馬。采用 Western blot 法分別檢測海馬內(nèi) M1 型標(biāo)志分子iNOS 的蛋白表達(dá)及其促炎因子 IL-6，IL-1β 的蛋白表達(dá)與 M2 型標(biāo)志分子 Arg1的蛋白表達(dá)及其抗炎因子 IL-4，IL-10 的蛋白表達(dá)。圖 3 大鼠 CWIRS 與 Western blot 檢測細(xì)胞因子流程圖2.10.4 Apelin-13 對 CWIRS 誘導(dǎo)大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞極化的影響大鼠在適應(yīng)環(huán)境后（3-5 天）
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R749.4

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本文編號：2666191