【摘要】：目的：檢測(cè)海洛因依賴大鼠中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(Vental tegment area, VTA)-伏隔核(Nucleu accumbens,NAc)突觸的可塑性及其NMDA受體介導(dǎo)的多巴胺神經(jīng)元膜電流的變化。 方法：SD雄性大鼠80只(180-220g),隨機(jī)分成對(duì)照組、海洛因依賴組(以下稱依賴組)、海洛因戒斷組(以下稱戒斷組)。按劑量遞增原則,皮下注射海洛因,2次/d(9：00am,16：00pm),連續(xù)9d(首日劑量3 mg/kg,逐日遞增海洛因3 mg/kg),第10d用納絡(luò)酮催促戒斷,確定海洛因成癮模型的建立。對(duì)照組按同樣方式注射等量生理鹽水。海洛因依賴模型建立后,依賴組繼續(xù)給海洛因維持量(27mg/kg·d)。按大鼠腦立體定位圖譜(Paxinos Watson,第3版)分別刺激VTA、NAc,并分別在NAc和VTA引導(dǎo)群體峰電位(Population spike, PS)(刺激參數(shù)：5V,200HZ,波寬300μs)。用TH免疫組織化學(xué)方法標(biāo)記多巴胺(Dopamine, DA)神經(jīng)元,并用腦片膜片鉗技術(shù)記錄由NMDA受體特異性激動(dòng)劑(0.1μM,1μM和10μM)介導(dǎo)的VTA的DA神經(jīng)元膜電流變化。 結(jié)果：1.建立的海洛因依賴模型組大鼠催促戒斷癥狀的評(píng)分符合成癮模型評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。 2.海洛因依賴組分別高頻刺激VTA和NAc,并分別在NAc和VTA引導(dǎo)LTP,其LTP的PS低于對(duì)照組和戒斷組(P0.05)。3.海洛因依賴組VTA區(qū)NMDA受體介導(dǎo)的DA神經(jīng)元膜電流減小(P0.05)。4.海洛因依賴組VTA的DA神經(jīng)元TH免疫反應(yīng)表達(dá)上調(diào)(P0.05)。 結(jié)論：1.對(duì)照組、依賴組和戒斷組VTA區(qū)在高頻刺激后,在NAc能引導(dǎo)LTP,且依賴組LTP的PS小于對(duì)照組和戒斷組。2.海洛因依賴組VTA的DA神經(jīng)元TH免疫反應(yīng)增強(qiáng)。3.海洛因依賴組NMDA受體介導(dǎo)的VTA區(qū)神經(jīng)元膜電流減小。
【圖文】：

圖 1vTA和NAc腦區(qū)的定位 Fig1ThelocationofVTAandNAe 1.4.3LTP參數(shù)計(jì)算方法采用咫的幅值 (PSalnPlitude)這個(gè)參段分別指PS的上升支和下降支幅度，PS幅度

②細(xì)胞封接在20一30℃室溫下進(jìn)行。灌流槽置于倒置顯微鏡載物臺(tái)上，選擇表面光滑、突起完整、折光性強(qiáng)的典型細(xì)胞作為研究對(duì)象進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)。拉制玻璃微電極、充灌適量的電極內(nèi)液后，通過電極夾持器與放大器的探頭相連(圖3)。在倒置顯微鏡下先將選好的細(xì)胞移至視野的中間，再用定向推進(jìn)器將電極尖端調(diào)至胞體的正上方，然后使用微操縱器讓電極尖端緩慢靠近胞體。利用特定的測(cè)試方波判斷細(xì)胞的封接狀態(tài)(圖4)。當(dāng)電極尖端接觸細(xì)胞表面時(shí)，記錄得到的測(cè)試方波會(huì)因封接阻抗增大而產(chǎn)生相應(yīng)的變化。此時(shí)再給予短暫的負(fù)壓吸引，電極與胞膜之間的電阻會(huì)迅速增大至吉?dú)W姆(10”Q)水平以上，膜與電極之間形成在機(jī)械和電學(xué)上都十分穩(wěn)固的緊密封閉。此時(shí)的電極與細(xì)胞膜形成了“貼附式膜片”(cell一 attachedpatch)，在此基礎(chǔ)上再給予負(fù)壓吸破電極尖端的細(xì)胞膜，使細(xì)胞內(nèi)液與電極內(nèi)液相通，，形成“全細(xì)胞膜片” (wholecellpatch)，這時(shí)的一記錄方式就是全細(xì)胞一記錄。我們選擇貼附式電阻達(dá)10G歐姆以上
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R749.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張開鎬;藥物依賴性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法(一)[J];中國(guó)藥物依賴性雜志;1999年01期

2 葉曉明,王新華,李家樂,石學(xué)銀;嗎啡依賴和戒斷大鼠某些腦核團(tuán)中β-內(nèi)啡肽含量的變化[J];中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志;1999年04期

本文編號(hào)：2659047