【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)是最常見的神經退行性病變,以進行性記憶和認知功能障礙為主要臨床癥狀。AD的特征性病理變化之一是細胞內神經原纖維纏結(neurofibrillary tangles,NFTs)的形成,NFT的主要成分是異常高度磷酸化的微管相關蛋白tau。AD的病因尚不明確,臨床上99%的AD為散發(fā)性,提示AD的發(fā)生和環(huán)境因素密切相關。幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是革蘭氏陰性螺旋桿菌,在人群中感染率高,是胃炎和胃潰瘍的主要致病菌。近年臨床流行病學調查表明幽門螺桿菌感染與AD相關;我們前期研究也表明幽門螺桿菌濾液可誘導體內外AD樣tau蛋白過度磷酸化,促進AD樣病變的形成。然而,其致病途徑和機制尚未闡明。在人群中幽門螺桿菌感染主要為經口感染,定植于胃部,我們猜測幽門螺桿菌長期胃內定植可能通過腸腦軸等途徑導致AD樣病變。同時我們也在探究幽門螺桿菌濾液中的何種成分參與誘導AD樣病變。一方面,幽門螺桿菌的主要致病因子是細胞毒素相關蛋白(cytotoxin associated protein,CagA)和尿素酶(urease,Ure)等,在實驗中我們通過免疫蛋白印跡檢測到幽門螺桿菌裂解液和濾液中均含有Ure,且幽門螺桿菌裂解液中蛋白含量更高,由此猜測幽門螺桿菌裂解液也能和濾液一樣誘導AD樣tau蛋白病變。另一方面,幽門螺桿菌能分泌外膜囊泡(Outer Membrane Vesicles,OMVs),OMVs中包含大量的細菌成分并參與傳遞致病因子誘導疾病,因此我們也探討了幽門螺桿菌OMVs是否參與誘導AD樣tau病變。【目的】1.研究幽門螺桿菌長期胃內定植對大鼠學習記憶以及tau蛋白磷酸化修飾的影響。2.研究幽門螺桿菌裂解液對tau蛋白磷酸化的影響。3.研究從幽門螺桿菌濾液中分離出的OMVs對tau蛋白磷酸化修飾的影響。【方法】1.篩選健康的、體重沒有明顯差異的雌性SD大鼠進行幽門螺桿菌菌液灌胃構建幽門螺桿菌長期胃內定植的動物模型。通過PCR和革蘭氏染色的方法檢測細菌的胃內定植情況。采用曠場試驗和水迷宮實驗檢測學習記憶。采用免疫印跡的方法檢測腦組織中tau蛋白不同位點磷酸化的水平。2.篩選健康的、體重沒有明顯差異的雄性SD大鼠進行腹腔注射幽門螺桿菌裂解液和濾液,提取腦組織蛋白采用免疫印跡的方法檢測腦組織中tau蛋白不同位點磷酸化的水平。3.從幽門螺桿菌濾液中分離純化OMVs,篩選健康的、體重沒有明顯差異的雌性SD大鼠,尾靜脈注射純化的OMVs,提取腦組織蛋白檢測tau相關位點的磷酸化水平�！窘Y果】1.幽門螺桿菌菌液灌胃組(H.pylori組)的胃組織勻漿可檢測出16S-rRNA和caga等幽門螺桿菌相關的基因,而對照組PBS灌胃組(Con組)未檢出。胃黏膜涂片革蘭氏染色,僅H.pylori組鏡下可檢測出紅色,短桿狀菌體。結果提示SD大鼠胃內幽門螺桿菌定植模型構建成功。2.Con組和H.pylori組大鼠進行曠場試驗及水迷宮實驗。曠場試驗中,兩組老鼠在運動能力方面無差異。水迷宮實驗中,在學習階段兩組的潛伏期無顯著差異,在檢測階段,兩組的穿越平臺次數(shù)和潛伏期無明顯差異。3.Con組和H.pylori組海馬組織和皮質組織勻漿檢測tau相關位點磷酸化水平變化。免疫蛋白印跡實驗中,海馬組織和皮質組織勻漿中H.pylori組tau在不同磷酸化位點如Thr205、Thr231、Ser396和Ser404的磷酸化水平較Con組無顯著差異。4.大鼠腹腔注射幽門螺桿菌裂解液或濾液,提取海馬組織蛋白,檢測tau蛋白相關位點的磷酸化水平,發(fā)現(xiàn)H.pylori裂解液組(H.pylori Lysate組)相對于Con組無明顯變化,H.pylori濾液組(H.pylori Filtrate組)相對于Con組顯著增加(P0.05)。5.幽門螺桿菌和大腸桿菌濾液大量含有細菌分泌的OMVs。尾靜脈注射OMVs后,幽門螺桿菌組SD大鼠海馬組織tau蛋白相較于Con組在Ser396和Ser404位點檢測到出現(xiàn)磷酸化修飾增加(P0.05),大腸桿菌組沒有出現(xiàn)顯著改變。【結論】1.SD大鼠胃內幽門螺桿長期定植動物模型未能出現(xiàn)腦內病變,不適于研究幽門螺桿菌感染與腦部疾病和之間的關系。2.UreB不是腹腔注射幽門螺桿菌濾液誘導tau樣病變的主要致病因子。3.幽門螺桿菌OMVs誘導腦內tau病變。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R749.16

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