【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)是最常見(jiàn)的神經(jīng)退行性病變,以進(jìn)行性記憶和認(rèn)知功能障礙為主要臨床癥狀。AD的特征性病理變化之一是細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFTs)的形成,NFT的主要成分是異常高度磷酸化的微管相關(guān)蛋白tau。AD的病因尚不明確,臨床上99%的AD為散發(fā)性,提示AD的發(fā)生和環(huán)境因素密切相關(guān)。幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是革蘭氏陰性螺旋桿菌,在人群中感染率高,是胃炎和胃潰瘍的主要致病菌。近年臨床流行病學(xué)調(diào)查表明幽門(mén)螺桿菌感染與AD相關(guān);我們前期研究也表明幽門(mén)螺桿菌濾液可誘導(dǎo)體內(nèi)外AD樣tau蛋白過(guò)度磷酸化,促進(jìn)AD樣病變的形成。然而,其致病途徑和機(jī)制尚未闡明。在人群中幽門(mén)螺桿菌感染主要為經(jīng)口感染,定植于胃部,我們猜測(cè)幽門(mén)螺桿菌長(zhǎng)期胃內(nèi)定植可能通過(guò)腸腦軸等途徑導(dǎo)致AD樣病變。同時(shí)我們也在探究幽門(mén)螺桿菌濾液中的何種成分參與誘導(dǎo)AD樣病變。一方面,幽門(mén)螺桿菌的主要致病因子是細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白(cytotoxin associated protein,CagA)和尿素酶(urease,Ure)等,在實(shí)驗(yàn)中我們通過(guò)免疫蛋白印跡檢測(cè)到幽門(mén)螺桿菌裂解液和濾液中均含有Ure,且幽門(mén)螺桿菌裂解液中蛋白含量更高,由此猜測(cè)幽門(mén)螺桿菌裂解液也能和濾液一樣誘導(dǎo)AD樣tau蛋白病變。另一方面,幽門(mén)螺桿菌能分泌外膜囊泡(Outer Membrane Vesicles,OMVs),OMVs中包含大量的細(xì)菌成分并參與傳遞致病因子誘導(dǎo)疾病,因此我們也探討了幽門(mén)螺桿菌OMVs是否參與誘導(dǎo)AD樣tau病變�！灸康摹�1.研究幽門(mén)螺桿菌長(zhǎng)期胃內(nèi)定植對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶以及tau蛋白磷酸化修飾的影響。2.研究幽門(mén)螺桿菌裂解液對(duì)tau蛋白磷酸化的影響。3.研究從幽門(mén)螺桿菌濾液中分離出的OMVs對(duì)tau蛋白磷酸化修飾的影響�！痉椒ā�1.篩選健康的、體重沒(méi)有明顯差異的雌性SD大鼠進(jìn)行幽門(mén)螺桿菌菌液灌胃構(gòu)建幽門(mén)螺桿菌長(zhǎng)期胃內(nèi)定植的動(dòng)物模型。通過(guò)PCR和革蘭氏染色的方法檢測(cè)細(xì)菌的胃內(nèi)定植情況。采用曠場(chǎng)試驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶。采用免疫印跡的方法檢測(cè)腦組織中tau蛋白不同位點(diǎn)磷酸化的水平。2.篩選健康的、體重沒(méi)有明顯差異的雄性SD大鼠進(jìn)行腹腔注射幽門(mén)螺桿菌裂解液和濾液,提取腦組織蛋白采用免疫印跡的方法檢測(cè)腦組織中tau蛋白不同位點(diǎn)磷酸化的水平。3.從幽門(mén)螺桿菌濾液中分離純化OMVs,篩選健康的、體重沒(méi)有明顯差異的雌性SD大鼠,尾靜脈注射純化的OMVs,提取腦組織蛋白檢測(cè)tau相關(guān)位點(diǎn)的磷酸化水平�！窘Y(jié)果】1.幽門(mén)螺桿菌菌液灌胃組(H.pylori組)的胃組織勻漿可檢測(cè)出16S-rRNA和caga等幽門(mén)螺桿菌相關(guān)的基因,而對(duì)照組PBS灌胃組(Con組)未檢出。胃黏膜涂片革蘭氏染色,僅H.pylori組鏡下可檢測(cè)出紅色,短桿狀菌體。結(jié)果提示SD大鼠胃內(nèi)幽門(mén)螺桿菌定植模型構(gòu)建成功。2.Con組和H.pylori組大鼠進(jìn)行曠場(chǎng)試驗(yàn)及水迷宮實(shí)驗(yàn)。曠場(chǎng)試驗(yàn)中,兩組老鼠在運(yùn)動(dòng)能力方面無(wú)差異。水迷宮實(shí)驗(yàn)中,在學(xué)習(xí)階段兩組的潛伏期無(wú)顯著差異,在檢測(cè)階段,兩組的穿越平臺(tái)次數(shù)和潛伏期無(wú)明顯差異。3.Con組和H.pylori組海馬組織和皮質(zhì)組織勻漿檢測(cè)tau相關(guān)位點(diǎn)磷酸化水平變化。免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)中,海馬組織和皮質(zhì)組織勻漿中H.pylori組tau在不同磷酸化位點(diǎn)如Thr205、Thr231、Ser396和Ser404的磷酸化水平較Con組無(wú)顯著差異。4.大鼠腹腔注射幽門(mén)螺桿菌裂解液或?yàn)V液,提取海馬組織蛋白,檢測(cè)tau蛋白相關(guān)位點(diǎn)的磷酸化水平,發(fā)現(xiàn)H.pylori裂解液組(H.pylori Lysate組)相對(duì)于Con組無(wú)明顯變化,H.pylori濾液組(H.pylori Filtrate組)相對(duì)于Con組顯著增加(P0.05)。5.幽門(mén)螺桿菌和大腸桿菌濾液大量含有細(xì)菌分泌的OMVs。尾靜脈注射OMVs后,幽門(mén)螺桿菌組SD大鼠海馬組織tau蛋白相較于Con組在Ser396和Ser404位點(diǎn)檢測(cè)到出現(xiàn)磷酸化修飾增加(P0.05),大腸桿菌組沒(méi)有出現(xiàn)顯著改變�！窘Y(jié)論】1.SD大鼠胃內(nèi)幽門(mén)螺桿長(zhǎng)期定植動(dòng)物模型未能出現(xiàn)腦內(nèi)病變,不適于研究幽門(mén)螺桿菌感染與腦部疾病和之間的關(guān)系。2.UreB不是腹腔注射幽門(mén)螺桿菌濾液誘導(dǎo)tau樣病變的主要致病因子。3.幽門(mén)螺桿菌OMVs誘導(dǎo)腦內(nèi)tau病變。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

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本文編號(hào)：2647802