【摘要】： 目的 本研究通過(guò)將NGF基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植到血管性癡呆(Vascular Dementia,VaD)大鼠的體內(nèi),并從行為學(xué)及其他角度觀察其對(duì)VaD大鼠的作用。 方法 體外分離、擴(kuò)增大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),并以重組腺病毒在體外介導(dǎo)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve Growth Factor,NGF)和/或綠色熒光蛋白(GreenFluorescent Protein,GFP)基因轉(zhuǎn)染BMSCs。并以Western印記法檢測(cè)經(jīng)NGF基因修飾的BMSCs的NGF蛋白表達(dá)變化。 應(yīng)用大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎法制備血管性癡呆模型。 將大鼠隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組:僅暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈,但不結(jié)扎,不進(jìn)行尾靜脈注射;PBS對(duì)照組:血管性癡呆模型制備后1周尾靜脈注射1ml PBS;BMSCs組:造模后1周尾靜脈注射4×10~6/ml僅經(jīng)GFP基因修飾的BMSCs1ml;NGF基因修飾組:造模1周后尾靜脈注射4×10~6ml NGF基因修飾的BMSCs1ml。 注射后4周Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察其行為學(xué)改變,HE染色觀察海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,TUNEL法檢測(cè)海馬凋亡細(xì)胞,以免疫組織化學(xué)技術(shù)觀測(cè)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞N-甲基D-天冬氨酸受體-1(N-methyl-D-aspartate Receptor 1,NMDAR1)、NGF、及突觸素(Synaptophysin,SYN)的表達(dá)變化。 結(jié)果 1、造模4w后,經(jīng)冰凍切片觀察到NGF基因修飾組及BMSCs組大鼠海馬區(qū)有綠色熒光表達(dá),證明經(jīng)鼠尾靜脈移植BMSCs成功。 2、MORRIS水迷宮檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)的第2-5天NGF基因修飾組及BMSC組逃避潛伏期較PBS組均顯著縮短(P＜0.05),且NGF基因修飾組優(yōu)于BMSC組(P＜0.05);第6天的空間探索實(shí)驗(yàn)顯示:NGF基因修飾組及BMSC組穿越平臺(tái)位置的次數(shù)較PBS組顯著增多(P＜0.05),且NGF基因修飾組多于BMSC組(P＜0.05)。 3、HE染色:光學(xué)顯微鏡下觀察可見(jiàn)PBS組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,組織結(jié)構(gòu)紊亂,可見(jiàn)大量的細(xì)胞壞死,細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清:胞核溶解明顯;胞漿淡染;胞體明顯腫脹。BMSC組和NGF基因修飾組改變較PBS組明顯減輕,而且以NGF基因修飾組減輕更為明顯。假手術(shù)組未見(jiàn)明顯變化。 4、TUNEL法檢測(cè)顯示NGF基因修飾組及BMSC組海馬凋亡細(xì)胞比例均較PBS組顯著降低(P＜0.05),且NGF基因修飾組較BMSC組降低更為顯著(P＜0.05)。 5、NGF基因修飾組及BMSC組大鼠海馬區(qū)NMDARl表達(dá)較PBS組顯著降低(P＜0.05),且NGF基因修飾組較BMSC組降低更為顯著(P＜0.05)。 6、NGF基因修飾組及BMSC組大鼠海馬區(qū)SYN表達(dá)較PBS組顯著增高(P＜0.05),且NGF基因修飾組較BMSC組增高更為顯著(P＜0.05)。 7、NGF基因修飾組及BMSC組大鼠海馬區(qū)NGF表達(dá)較PBS組顯著增高(P＜0.05),且NGF基因修飾組較BMSC組增高更為顯著(P＜0.05)。 8、Western印記法顯示:NGF基因修飾的BMSCs的NGF蛋白表達(dá)較未經(jīng)NGF基因修飾的BMSC增高。 結(jié)論 1、靜脈移植NGF基因修飾的BMSCs對(duì)VaD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有一定的改善作用。 2、靜脈移植NGF基因修飾的BMSCs可以降低VaD大鼠海馬區(qū)凋亡細(xì)胞的比例,對(duì)VaD大鼠海馬細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。 3、NGF基因的修飾可使BMSCs的NGF蛋白表達(dá)增高。 4、靜脈移植NGF基因修飾的BMSCs可以使VaD大鼠海馬區(qū)SYN表達(dá)增加。 5、靜脈移植NGF基因修飾的BMSCs可以降低VaD大鼠海馬區(qū)NR1表達(dá)。 6、靜脈移植NGF基因修飾的BMSCs可以提高VaD大鼠海馬區(qū)NGF的表達(dá)。 7、NGF基因修飾的BMSCs對(duì)VaD大鼠的治療效果優(yōu)于單純的BMSC治療。
【圖文】：

圖1大鼠頸動(dòng)脈系解剖及手術(shù)示意圖染復(fù)數(shù)(M01)的測(cè)定及轉(zhuǎn)染:將Ad一GFP一NGF、Ad一GFP在eityofinfeetion，MOI)=0一20opfu/eell的范圍內(nèi)，分別BMSCS:選用P3代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的BMSCS，按1xIJ個(gè)細(xì)

18Cm的鋼質(zhì)黑色平臺(tái)。較為經(jīng)典的MorriS水迷宮測(cè)試程序主要包括定位航行試驗(yàn)印 lacenavigation)和空間探索試驗(yàn) (sPatialProbe)兩個(gè)部分。水迷宮及水迷宮實(shí)驗(yàn)室的大致情況見(jiàn)圖2、圖3。圖2水迷宮示意圖
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐清;趙冬梅;黃飛;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子神經(jīng)保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年01期

2 張艷玲,李露斯,可金星,范文輝;血管性癡呆大鼠的記憶行為改變與突觸結(jié)構(gòu)參數(shù)的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年12期

3 姚國(guó)恩,王景周,陳曼娥;血管性癡呆大鼠認(rèn)知障礙的NMDAR機(jī)制研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年12期

4 石苗茜;劉衛(wèi)平;;血管性癡呆發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年09期

5 吳建云,范光麗;突觸素研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;1999年04期

6 李軍;腦缺血性損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊(cè);2001年06期

7 呂心瑞;潘婭;李清春;董宇華;蔣乃昌;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)擬AD模型大鼠腦內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的影響[J];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年03期

8 郝憲恩;李楠;王鑫國(guó);;益氣活血復(fù)方對(duì)多發(fā)性梗死性癡呆大鼠大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年03期

9 尹昱,宋春風(fēng),王偉斌,梁翠萍,樊敬峰,呂佩源;血管性癡呆小鼠海馬NMDA受體mRNA表達(dá)特征及石杉?jí)A甲的影響[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2004年06期

10 李澎濤,潘彥舒,黃啟福,黃旭,嚴(yán)京,王永炎;解毒通絡(luò)方對(duì)腦缺血損傷海馬區(qū)突觸可塑性的影響[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2002年02期

，

本文編號(hào)：2624113