【摘要】：前言 抑郁癥發(fā)病率逐年增加，對人類的健康和生命已構(gòu)成威脅，并引起人們的廣泛的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)激性生活事件是抑郁癥的明顯促發(fā)因素，且抑郁癥患者大腦存在與慢性應(yīng)激大鼠相似的整體形態(tài)的改變。而慢性應(yīng)激動物模型所表現(xiàn)出來的行為特征的改變、血漿皮質(zhì)激素的變化與抑郁癥病人的表現(xiàn)極為相似，因此以應(yīng)激制作抑郁癥動物模型，其發(fā)病機(jī)理可能與人類抑郁癥更接近。 既往關(guān)于應(yīng)激所致抑郁的機(jī)制大多集中在應(yīng)激后HPA軸的反應(yīng)以及神經(jīng)遞質(zhì)變化的研究和海馬結(jié)構(gòu)的損害。近來有研究表明前額葉(PFC)活力降低可以導(dǎo)致“假性抑郁”，特點(diǎn)是缺乏感情或興趣、缺乏目標(biāo)相關(guān)性行為，有多種任務(wù)執(zhí)行缺陷。前額葉皮質(zhì)在單相抑郁癥(UD)或雙相抑郁癥癥(BD)中均起作用。應(yīng)激(Stress)是指機(jī)體受到各種應(yīng)激原的刺激時，，出現(xiàn)的以交感神經(jīng)興奮和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)(HPA)分泌增多為主的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)，以及由此引起的各種功能和代謝的改變。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是神經(jīng)營養(yǎng)素(Neurotrophins，NTs)家族的成員之一，BDNF通過靶源性、自分泌、旁分泌方式激發(fā)神經(jīng)細(xì)胞上高親和力信號傳導(dǎo)通路而發(fā)揮其特殊的生物作用。 本研究參照文獻(xiàn)，使大鼠連續(xù)三周處于應(yīng)激狀態(tài)，制作成應(yīng)激模型，研究模型鼠前額葉神經(jīng)元細(xì)胞變化，揭示慢性應(yīng)激、前額葉神經(jīng)元細(xì)胞活性變化和抑郁癥之間的關(guān)系，探討應(yīng)激所致抑郁的機(jī)制，為臨床預(yù)防和治療抑郁性疾病提供理論參考依據(jù)和新的手段。 材料和方法 一、實(shí)驗(yàn)材料 1．實(shí)驗(yàn)動物 采用青年雄性Wistal大鼠巧只，體重210一2409。由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí) 驗(yàn)動物中心提供。 2.主要試劑 兔抗大鼠BDNF多克隆抗體，生物素標(biāo)記的山羊抗兔lgG，SABC(鏈霉 素過氧化物復(fù)合物)免疫組化試劑盒，DAB顯色劑，以上試劑均購于Boster 公司。 3.主要實(shí)驗(yàn)儀器 YSD一4G型藥理生理實(shí)驗(yàn)多用儀(安徽蚌埠醫(yī)學(xué)院無線電二廠);Meta Mo甲h/Cool Snap份A派70計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)。 二、實(shí)驗(yàn)方法 1.動物分組 大鼠適應(yīng)環(huán)境一周后采用曠場分析法測定行為并稱重。然后隨機(jī)分為 對照組5只和實(shí)驗(yàn)組10只。 2.應(yīng)激過程 實(shí)驗(yàn)組10只大鼠，分籠喂養(yǎng)，每籠1只。實(shí)驗(yàn)第1一21天，接受各種不 同的應(yīng)激:電擊足底、冰水游泳、搖晃、夾尾、熱應(yīng)激、禁食、禁水。每天給予 l種刺激，每種刺激累計使用2一3次。 對照組5只大鼠，放人一籠中群養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)第l一21天，不給任何刺激。 3.灌注取材與切片 實(shí)驗(yàn)第22天殺死所有大鼠，無論實(shí)驗(yàn)組還是對照組大鼠于第22天處 死前再次測定行為并稱重。每只大鼠用戊巴比妥鈉行腹腔麻醉后，經(jīng)左心 室快速灌注37℃生理鹽水Zoonil，繼之灌注4℃的4%多聚甲醛溶液300nil， 然后剝離腦，后固定48小時以上;梯度乙醇脫水，石蠟包埋后，行冠狀切片。 4.免疫組化法檢測BDNF蛋白 采用免疫組化ABC法檢測切片中的BDNF蛋白。 5.圖像分析 每只大鼠選取前額葉完好的切片1張，在計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)上分別 測量雙側(cè)前額葉內(nèi)BDNF陽性細(xì)胞的平均光度值。 6.統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSSn .5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.體重和開場行為評定 實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)組與對照組在體重和開場行為指標(biāo)上無差異。21天后，實(shí) 驗(yàn)組與對照組相比，體重明顯下降、中央格停留時間延長、水平穿越格數(shù)減 少、直立次數(shù)減少、修飾次數(shù)減少、糞便粒數(shù)增多。 2.前額葉神經(jīng)元細(xì)胞的光鏡下表現(xiàn) 光鏡下觀察，正常對照組大鼠前額葉皮質(zhì)中，BDNF陽性細(xì)胞表達(dá)較 強(qiáng)，細(xì)胞排列密集，著色深，被染成棕黃色，免疫陽性顆粒主要分布于胞槳和 細(xì)胞膜表面，有的有較長的突起。實(shí)驗(yàn)組大鼠前額葉皮質(zhì)陽性細(xì)胞數(shù)量明 顯減少，且多數(shù)細(xì)胞呈空泡狀，胞槳著色很淺。其中以右側(cè)區(qū)明顯。 3.前額葉神經(jīng)元中BDNF的表達(dá) 通過比較實(shí)驗(yàn)組和對照組BDNF表達(dá)的平均光密度，可以看出，在左右 即C區(qū)正常組大鼠BDNF的光密度均高于實(shí)驗(yàn)組。正常大鼠左右PFC區(qū) BDNF表達(dá)無差異。經(jīng)過21天應(yīng)激后，實(shí)驗(yàn)組左右PFC區(qū)的BDNF表達(dá)均 低于正常對照組(P0.01)，但右PFC區(qū)顯著，同應(yīng)激后左PFC具有顯著差 異。 討論 到目前為止，動物抑郁模型制作方法一般有:藥物誘發(fā)的抑郁動物模 型、獲得性無助模型、慢性應(yīng)激模型、孤養(yǎng)模型、切除雙側(cè)嗅束模型。但這些 模型單獨(dú)用于研究尚有難以克服的假陽性和假陰性反應(yīng)，因此有人主張同 時聯(lián)合應(yīng)用其中的幾種模型，可能會提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可行性。另外，不同抑 郁模型的制作方法其應(yīng)激導(dǎo)致抑郁發(fā)作的病理生理機(jī)制各異。既往的一些 研究大多采用單純的物理應(yīng)激方法來制作抑郁癥模型，但物理應(yīng)激不能很 好的模擬抑郁癥病人的心理社會應(yīng)激，因此本實(shí)驗(yàn)綜合了慢性應(yīng)激(物理 應(yīng)激)和孤養(yǎng)(心理應(yīng)激)兩種經(jīng)典模型，利用長期不可預(yù)見的中等強(qiáng)度的 不良應(yīng)激，造成分養(yǎng)動物的抑郁狀態(tài)，這在抑郁癥模型的制作方面是個有益 的探索。 評價一個抑郁癥模型的制作是否成功主要依據(jù)動物在行為上的變化， 曠場行為分析是一種檢測大鼠在新異環(huán)境中的探
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R749.4

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本文編號：2623698