【摘要】： 背景:阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)是引起癡呆的最常見疾病。隨著人口老齡化的發(fā)展,AD已成為影響老年人健康的一個(gè)突出問題,嚴(yán)重威脅著老年人的身體健康和生活質(zhì)量。AD的病因和發(fā)病機(jī)制目前還不清楚,對(duì)于AD至今尚無有效的治療方法,目前仍以對(duì)癥治療為主。由于缺乏一種與AD病理和行為等改變相似的理想動(dòng)物模型,使AD基礎(chǔ)研究和藥物開發(fā)受到限制。近年來經(jīng)過研究,大多數(shù)學(xué)者支持淀粉樣β蛋白(amyloid beta protein, Aβ)學(xué)說,認(rèn)為Aβ的產(chǎn)生及其沉積可能是AD致病的核心誘導(dǎo)因素。 目的:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Aβ1-40進(jìn)行海馬注射復(fù)制AD大鼠模型,進(jìn)而給予蝎毒耐熱蛋白(Scorpion Venom heat-resistant protein, SVHRP)進(jìn)行干預(yù),通過觀察行為學(xué)、星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞突觸的變化,檢測(cè)Aβ1-40海馬注射是否可建立一種可靠的動(dòng)物模型,并研究SVHRP對(duì)AD模型大鼠的治療效果,探討AD的發(fā)病機(jī)制和治療機(jī)理。 方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,雄性,體重300g±50g。行水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步篩選,然后隨機(jī)分為3組,即正常對(duì)照組9只,AD模型組8只,SVHRP干預(yù)組7只。參照文獻(xiàn)利用腦立體定位儀進(jìn)行雙側(cè)海馬定位注射,正常對(duì)照組注射溶媒液,AD模型組和SVHRP干預(yù)組注射聚集狀態(tài)的Aβ1-40。術(shù)后SVHRP干預(yù)組大鼠腹腔注射SVHRP,正常對(duì)照組和AD模型組腹腔注射三蒸水連續(xù)干預(yù)10天。然后開始為期5天的水迷宮測(cè)試,記錄大鼠尋找平臺(tái)的逃避潛伏期以及大鼠在目標(biāo)象限游泳距離百分比和游泳時(shí)間百分比。測(cè)試后4%多聚甲醛(paraformaldehyde, PFA)心臟灌注固定,取腦,放入4% PFA中后固定24小時(shí),梯度蔗糖脫水,OCT包埋劑包埋后行冰凍切片。以注射點(diǎn)為中心連續(xù)冠狀切片,厚10μm。進(jìn)行GFAP、p38免疫組織化學(xué)染色。應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行GFAP陽性表達(dá)細(xì)胞計(jì)數(shù)、p38免疫陽性產(chǎn)物累積光密度(integrated optical density, IOD)及面積測(cè)量。所有數(shù)據(jù)用SPSS11. 5軟件包處理分析。 結(jié)果: 1. Morris水迷宮(Morris water maze, MWM)行為學(xué)測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果: ⑴定位航行實(shí)驗(yàn):5天逃避潛伏期比較,模型組大鼠長(zhǎng)于對(duì)照組、干預(yù)組大鼠,5天逃避潛伏期變化趨勢(shì)看,對(duì)照組逃避潛伏期越來越短,而模型組和干預(yù)組逃避潛伏期上下波動(dòng),其中干預(yù)組相對(duì)于模型組波動(dòng)較小。 ⑵空間搜索實(shí)驗(yàn):模型組大鼠與對(duì)照組、干預(yù)組比較,在目標(biāo)象限(平臺(tái)象限)內(nèi)游泳搜索的距離、時(shí)間都明顯減少。 2. GFAP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果: 模型組針道周圍GFAP陽性表達(dá)與對(duì)照組、干預(yù)組比較可見,細(xì)胞數(shù)量明顯增多(p0.05或p0.01),胞體肥大、形態(tài)各異,突起增長(zhǎng)、增粗、不規(guī)則、染色加深;而對(duì)照組與干預(yù)組無顯著差異。 3. p38免疫組織化學(xué)染色結(jié)果: 模型組免疫產(chǎn)物與對(duì)照組、干預(yù)組比較,陽性產(chǎn)物稀疏而染色較淺;陽性產(chǎn)物IOD和面積測(cè)量顯示:模型組p38陽性反應(yīng)產(chǎn)物與對(duì)照組、干預(yù)組比較,明顯降低(P0.05或P0.01);對(duì)照組與干預(yù)組之間無差異。 結(jié)論: 1.進(jìn)行Aβ1-40大鼠海馬注射可引起大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及星形膠質(zhì)細(xì)胞活化、p38表達(dá)下降。 2.SVHRP可明顯改善AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙,并抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化,促進(jìn)p38表達(dá)。
【圖文】：

透射電鏡觀察Aβ1 - 40聚集狀態(tài)發(fā)現(xiàn)，孵育前Aβ1 - 40分散、均勻分布育后聚集明顯，可見呈條索狀（圖1）。二．水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表 1、圖 2）： 5 天逃避潛伏期比較，模鼠長(zhǎng)于對(duì)照組、干預(yù)組大鼠，其中模型組與干預(yù)組比較有顯著變化0.05）；每天逃避潛伏期兩兩比較，模型組基本上長(zhǎng)于對(duì)照組、干預(yù)中第 2 天比較，模型組明顯長(zhǎng)于對(duì)照組、干預(yù)組（P＜0.05），第 較，模型組明顯長(zhǎng)于干預(yù)組（P＜0.05）。5 天逃避潛伏期變化趨勢(shì)照組逃避潛伏期越來越短，而模型組和干預(yù)組逃避潛伏期上下波動(dòng)中干預(yù)組波動(dòng)較小。(2) 空間搜索實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表 2、圖 3）：模型組大鼠與對(duì)照組、相比，在目標(biāo)象限內(nèi)游泳搜索的距離百分比、時(shí)間百分比都減少，顯著差異；對(duì)照組大鼠與干預(yù)組大鼠相比，變化不明顯。

4.43±2.061 0 .8 6 ± 2 .4 4 10.36±1.93 9.04±1.76 6.94±1.72 4.24±2.18 20.56±3.23 14.54±2.05 11.03±1.87 9.96±1.82 .89±2.339 .9 7 ± 3 .4 5＃ 7.48±2.19△ 8.09±2.00 4.89±1.95 間點(diǎn)組間比較：對(duì)照組與模型組比較 p<0.05；＃干預(yù)組與；△干預(yù)組與模型組比較 p<0.05組與模型組 5 天逃避潛伏期比較 P<0.05別 目標(biāo)象限游泳距離（％） 目標(biāo)象限游泳時(shí)間（組 42.93±7.20 46.36±8.46組 38.50±8.11 40.94±7.03組 44.00±6.27 46.70±6.05 三組大鼠在目標(biāo)象限內(nèi)游泳距離和游泳時(shí)間百分比（ x±s，n＝
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 李澤良;謝瑤;許曉伍;張園園;何宏文;;當(dāng)歸芍藥散抑制β-淀粉樣肽1-42聚集和纖維形成[J];解剖學(xué)研究;2005年04期

2 伊鳴;;阿爾茨海默病中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體的變化[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2001年02期

3 楊春,章茜,韋迎娜,王書春,朱涵;β-淀粉樣蛋白致大鼠Alzheimer病模型的研究[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2003年04期

4 吳樹亮,金連弘,李竹琴,閆彬彬,田波,于宏偉;阿爾茨海默氏病動(dòng)物模型的建立[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2004年02期

5 洪岸，姚志彬，顧耀銘，，陳以慈;老年大鼠學(xué)習(xí)記憶減退與海馬結(jié)構(gòu)的突觸素改變[J];解剖學(xué)報(bào);1996年02期

6 殷盛明;于德欽;彭巖;高溪;趙杰;唐一源;張萬琴;;蝎毒耐熱蛋白保護(hù)MPTP小鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙的一氧化氮機(jī)制[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2006年01期

7 黃誠(chéng);Alzheimer病腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)第三種病理損害[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

8 謝寧,柳琳,周妍妍,何秀麗,鄒純樸;地黃飲子對(duì)老年性癡呆模型大鼠腦組織NO、NOS含量及行為學(xué)的影響[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;2004年02期

9 李學(xué)坤;Alzheimer病中β淀粉樣蛋白的毒性作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));2001年05期

10 肖昭揚(yáng);殷盛明;于德欽;高溪;趙杰;張萬琴;;蝎毒對(duì)C57BL/6帕金森病小鼠腦內(nèi)前腦啡肽原表達(dá)的影響[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年19期

本文編號(hào)：2622606