【摘要】： 背景:阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)是引起癡呆的最常見疾病。隨著人口老齡化的發(fā)展,AD已成為影響老年人健康的一個突出問題,嚴重威脅著老年人的身體健康和生活質(zhì)量。AD的病因和發(fā)病機制目前還不清楚,對于AD至今尚無有效的治療方法,目前仍以對癥治療為主。由于缺乏一種與AD病理和行為等改變相似的理想動物模型,使AD基礎研究和藥物開發(fā)受到限制。近年來經(jīng)過研究,大多數(shù)學者支持淀粉樣β蛋白(amyloid beta protein, Aβ)學說,認為Aβ的產(chǎn)生及其沉積可能是AD致病的核心誘導因素。 目的:本實驗應用Aβ1-40進行海馬注射復制AD大鼠模型,進而給予蝎毒耐熱蛋白(Scorpion Venom heat-resistant protein, SVHRP)進行干預,通過觀察行為學、星形膠質(zhì)細胞及神經(jīng)細胞突觸的變化,檢測Aβ1-40海馬注射是否可建立一種可靠的動物模型,并研究SVHRP對AD模型大鼠的治療效果,探討AD的發(fā)病機制和治療機理。 方法:實驗動物Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,雄性,體重300g±50g。行水迷宮實驗進行初步篩選,然后隨機分為3組,即正常對照組9只,AD模型組8只,SVHRP干預組7只。參照文獻利用腦立體定位儀進行雙側(cè)海馬定位注射,正常對照組注射溶媒液,AD模型組和SVHRP干預組注射聚集狀態(tài)的Aβ1-40。術后SVHRP干預組大鼠腹腔注射SVHRP,正常對照組和AD模型組腹腔注射三蒸水連續(xù)干預10天。然后開始為期5天的水迷宮測試,記錄大鼠尋找平臺的逃避潛伏期以及大鼠在目標象限游泳距離百分比和游泳時間百分比。測試后4%多聚甲醛(paraformaldehyde, PFA)心臟灌注固定,取腦,放入4% PFA中后固定24小時,梯度蔗糖脫水,OCT包埋劑包埋后行冰凍切片。以注射點為中心連續(xù)冠狀切片,厚10μm。進行GFAP、p38免疫組織化學染色。應用圖像分析系統(tǒng)進行GFAP陽性表達細胞計數(shù)、p38免疫陽性產(chǎn)物累積光密度(integrated optical density, IOD)及面積測量。所有數(shù)據(jù)用SPSS11. 5軟件包處理分析。 結(jié)果: 1. Morris水迷宮(Morris water maze, MWM)行為學測試實驗結(jié)果: ⑴定位航行實驗:5天逃避潛伏期比較,模型組大鼠長于對照組、干預組大鼠,5天逃避潛伏期變化趨勢看,對照組逃避潛伏期越來越短,而模型組和干預組逃避潛伏期上下波動,其中干預組相對于模型組波動較小。 ⑵空間搜索實驗:模型組大鼠與對照組、干預組比較,在目標象限(平臺象限)內(nèi)游泳搜索的距離、時間都明顯減少。 2. GFAP免疫組織化學染色結(jié)果: 模型組針道周圍GFAP陽性表達與對照組、干預組比較可見,細胞數(shù)量明顯增多(p0.05或p0.01),胞體肥大、形態(tài)各異,突起增長、增粗、不規(guī)則、染色加深;而對照組與干預組無顯著差異。 3. p38免疫組織化學染色結(jié)果: 模型組免疫產(chǎn)物與對照組、干預組比較,陽性產(chǎn)物稀疏而染色較淺;陽性產(chǎn)物IOD和面積測量顯示:模型組p38陽性反應產(chǎn)物與對照組、干預組比較,明顯降低(P0.05或P0.01);對照組與干預組之間無差異。 結(jié)論: 1.進行Aβ1-40大鼠海馬注射可引起大鼠學習記憶障礙及星形膠質(zhì)細胞活化、p38表達下降。 2.SVHRP可明顯改善AD模型大鼠學習記憶障礙,并抑制星形膠質(zhì)細胞活化,促進p38表達。
【圖文】：

透射電鏡觀察Aβ1 - 40聚集狀態(tài)發(fā)現(xiàn)，孵育前Aβ1 - 40分散、均勻分布育后聚集明顯，可見呈條索狀（圖1）。二．水迷宮實驗結(jié)果：(1)定位航行實驗結(jié)果（表 1、圖 2）： 5 天逃避潛伏期比較，模鼠長于對照組、干預組大鼠，其中模型組與干預組比較有顯著變化0.05）；每天逃避潛伏期兩兩比較，模型組基本上長于對照組、干預中第 2 天比較，模型組明顯長于對照組、干預組（P＜0.05），第 較，模型組明顯長于干預組（P＜0.05）。5 天逃避潛伏期變化趨勢照組逃避潛伏期越來越短，而模型組和干預組逃避潛伏期上下波動中干預組波動較小。(2) 空間搜索實驗結(jié)果（表 2、圖 3）：模型組大鼠與對照組、相比，在目標象限內(nèi)游泳搜索的距離百分比、時間百分比都減少，顯著差異；對照組大鼠與干預組大鼠相比，變化不明顯。

4.43±2.061 0 .8 6 ± 2 .4 4 10.36±1.93 9.04±1.76 6.94±1.72 4.24±2.18 20.56±3.23 14.54±2.05 11.03±1.87 9.96±1.82 .89±2.339 .9 7 ± 3 .4 5＃ 7.48±2.19△ 8.09±2.00 4.89±1.95 間點組間比較：對照組與模型組比較 p<0.05；＃干預組與；△干預組與模型組比較 p<0.05組與模型組 5 天逃避潛伏期比較 P<0.05別 目標象限游泳距離（％） 目標象限游泳時間（組 42.93±7.20 46.36±8.46組 38.50±8.11 40.94±7.03組 44.00±6.27 46.70±6.05 三組大鼠在目標象限內(nèi)游泳距離和游泳時間百分比（ x±s，n＝
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

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本文編號：2622606