【摘要】：目的:探究在阿爾茨海默病(AD)大鼠腦內(nèi)共同移植嗅鞘細(xì)胞(OECs)和神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs),OECs在腦內(nèi)對NSCs的增殖和定向分化的影響,為干細(xì)胞腦移植治療AD提供新的理論依據(jù)。 方法: 1.從新生5-7d大鼠嗅球分離培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞純化和鑒定。 2.從新生24h內(nèi)大鼠海馬內(nèi)分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,形成原代克隆神經(jīng)細(xì)胞球后傳代培養(yǎng),以免疫細(xì)胞化學(xué)法和免疫熒光法進(jìn)行鑒定,移植前使細(xì)胞被5-嗅脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標(biāo)記。 3.大鼠立體定位儀下將Aβ1-42注入大鼠海馬CA1區(qū)制備成AD大鼠模型,應(yīng)用Morris水迷宮和病理學(xué)HE染色進(jìn)行模型鑒定。 4.將生理鹽水,NSCs和NSCs+OECs分別注射入AD模型大鼠海馬CA1區(qū),分別于移植7d,14d,21d和28d后,對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行Morris水迷宮行為學(xué)檢測,并行大鼠腦組織切片免疫組織化學(xué)染色檢測BrdU,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)陽性表達(dá)情況,分析移植細(xì)胞在AD大鼠腦內(nèi)的增殖和定向分化情況。 結(jié)果: 1.嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)4-7d時突起逐漸變長,主要二至三極的細(xì)胞,呈NGFRp75和GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性,純度可至90%以上。 2.神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)7d時會形成較大的神經(jīng)細(xì)胞球,分離傳代后,經(jīng)Nestin和BrdU免疫熒光染色,細(xì)胞呈陽性染色,經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈NSE,GFAP和ChAT陽性染色。 3.造模后大鼠行動減少,水迷宮檢測逃避潛伏期和穿越平臺次數(shù)較造模前明顯減少(P㩳0.01),學(xué)習(xí)記憶能力顯著降低,HE染色顯示細(xì)胞羅列層次減少,細(xì)胞雜亂,部分細(xì)胞核固縮深染。 4.細(xì)胞移植后實(shí)施Morris水迷宮行為學(xué)檢測,從14d時間點(diǎn)開始,神經(jīng)干細(xì)胞移植組大鼠的平均逃避潛伏期則顯著低于鹽水組(P㩳0.01),聯(lián)合移植組的各時間點(diǎn)的平均潛伏期均明顯低于鹽水組,21d和28d聯(lián)合移植組的平均潛伏期明顯低于神經(jīng)干細(xì)胞移植組,提示學(xué)習(xí)記憶能力開始得以恢復(fù)。 5.細(xì)胞移植后腦組織切片免疫組織化學(xué)染色顯示,聯(lián)合移植的細(xì)胞存活數(shù)量明顯高于NSCs獨(dú)立移植的數(shù)目(P㩳0.01)。各時間點(diǎn)間比較,NSCs獨(dú)立移植組的細(xì)胞存活數(shù)、NSE陽性細(xì)胞數(shù)和ChAT陽性細(xì)胞數(shù)差異不顯著,7d,14d和21d聯(lián)合移植組的細(xì)胞數(shù)量、NSE陽性細(xì)胞數(shù)和ChAT陽性細(xì)胞數(shù)增長趨勢顯著,差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.01),21d-28d增長趨勢變緩(P㩳0.05)。 結(jié)論: 1.從新生大鼠海馬和嗅球分別分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞和嗅鞘細(xì)胞共同移植到AD大鼠腦內(nèi),嗅鞘細(xì)胞能夠促使神經(jīng)干細(xì)胞存活,增殖和向膽堿能神經(jīng)元分化。 2.嗅鞘細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合移植能夠明顯提高AD模型大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2612038