【摘要】：背景妊娠期母體免疫活化會增加其成年子代罹患精神分裂癥的風險。目前人們普遍認為精神分裂癥是一種神經(jīng)發(fā)育性疾病,在發(fā)育過程中不斷修剪的突觸在疾病過程中可能發(fā)揮的作用引起了人們的關(guān)注,研究表明,突觸結(jié)構(gòu)和功能的改變對精神分裂癥的發(fā)生是至關(guān)重要的。此外,人們認為,神經(jīng)炎癥可能與突觸蛋白有一定的聯(lián)系并參與了這種高風險的發(fā)生。精神分裂癥患者尸腦研究發(fā)現(xiàn)其腦部存在神經(jīng)免疫系統(tǒng)的改變。然而,人們卻對疾病進展過程中突觸、神經(jīng)炎癥以及行為學的動態(tài)變化及其可能的機制知之甚少。目的在孕早期給予孕鼠聚肌胞苷酸(polyinsinic acid-polycytidylic acid,Poly(I:C)),從而導(dǎo)致其免疫活化,建立孕期感染精神分裂癥大鼠模型,觀察該模型在疾病發(fā)生發(fā)展中腦內(nèi)突觸相關(guān)蛋白表達水平、行為學、腦內(nèi)星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞數(shù)量和形態(tài)以及大腦內(nèi)促炎性細胞因子Interleukin-6、Interleukin-1β、tumor necrosis factor(IL-6、IL-1β、TNF-α)蛋白質(zhì)表達水平的變化,分析不同時期機體的突觸缺損情況、免疫紊亂狀態(tài)及兩者之間的關(guān)系。方法1.選取無特異病原體(Specefic Pathogen Free,SPF級)的6只SD雄鼠和22只SD雌鼠進行交配育種(9周齡)。2.將成功受孕雌鼠隨機分為Poly(I:C)模型組(n=9)和Vehicle對照組(n=9),在GD9(確認出現(xiàn)陰道栓后的第9天)時,兩組尾靜脈分別進行注射10mg/kg Poly(I:C)和等體積的0.9%無菌生理鹽水,注射結(jié)束后孕鼠立即返回原籠中,等待3小時后兩組隨機各選取3只動物作為質(zhì)量控制,其它孕鼠無干擾至產(chǎn)下仔鼠。3.仔鼠在21日齡時離乳,將它們根據(jù)親代來源的不同分為模型組(n=46)和對照組(n=42),使其無干擾自然生長。4.分別在青春期(出生后第40天,PND40)和成年期(出生后第60天,PND60)時對兩組仔鼠進行前脈沖抑制行為的測定。5.分別在青春期(PND40)和成年期(PND60),采用免疫印記技術(shù)檢測兩個目的腦區(qū)中突觸相關(guān)蛋白的表達水平變化,采用免疫組織化學技術(shù)(immunohistochemistry,IHC)檢測兩組仔鼠前額葉皮層和海馬兩個靶向腦區(qū)中的鈣結(jié)合蛋白1(ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的陽性表達,采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測前額葉皮層和海馬中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白質(zhì)表達水平。6.根據(jù)數(shù)據(jù)分布類型選擇恰當?shù)慕y(tǒng)計學分析方法,結(jié)果用均數(shù)±標準差(x±S)來表示。不相關(guān)的兩組樣本比較采用獨立樣本t檢驗,兩組非正態(tài)分布的樣本數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗中的兩獨立樣本檢驗,多樣本之間比較采用單因素方差(one-way ANOVA)分析,檢驗結(jié)果P0.05可認為有統(tǒng)計學差異,使用SPSS20.0軟件對各組實驗結(jié)果統(tǒng)計學分析。結(jié)果1.模型組孕鼠血漿中炎癥因子IL-6、IL-1β和TNF-α的蛋白表達水平均明顯高于對照組,兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.前脈沖抑制實驗中,青春期模型組大鼠與對照組大鼠之間的差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05);成年期模型組大鼠在所有分貝下的前脈沖抑制率均降低,兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.免疫印記結(jié)果顯示,突觸相關(guān)蛋白水平的變化存在時間和腦區(qū)特異性。模型組突觸前膜蛋白突觸素水平僅在青春期額葉出現(xiàn)的升高具有統(tǒng)計學意義;而PSD95在青春期時,兩組之間的差異無統(tǒng)計學意義,僅在成年期時模型組兩個目標腦區(qū)中PSD95的水平均是降低的,且這種兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義;突觸骨架蛋白neurofilament medium(NFM)和neurofilament high(NFH)分別在青春期的海馬和青春期的額葉中水平降低;而對突觸功能起調(diào)節(jié)作用的p-cofilin在成年期額葉和海馬中水平均升高。4.免疫組化結(jié)果顯示,青春期時模型組額葉和海馬中Iba1陽性的小膠質(zhì)細胞數(shù)量均高于對照組,兩組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);成年期時模型組兩目標腦區(qū)中的Iba1陽性的小膠質(zhì)細胞數(shù)量也均高于對照組,兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),模型組在兩個時期不同腦區(qū)的小膠質(zhì)細胞均處于活化狀態(tài),其特點是分枝縮短減少,胞體增大。5.免疫組化結(jié)果顯示,青春期時模型組大鼠海馬和額葉中GFAP陽性的星形膠質(zhì)細胞的數(shù)量與對照組相比,兩組之間的差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05),成年期時模型組大鼠兩目標腦區(qū)中的的GFAP陽性的星形膠質(zhì)細胞的數(shù)量高于對照組,兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。6.青春期模型組大鼠額葉和海馬中炎性細胞因子IL-1β和IL-6的蛋白水平升高,兩組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);成年期時與對照組相比,模型組大鼠海馬中炎癥因子水平的變化無統(tǒng)計學意義,而在前額皮質(zhì)勻漿中炎性細胞因子IL-6和TNF-α的蛋白表達水平均升高,兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);此外,無論是青春期還是成年期,海馬中TNF-α的水平變化無統(tǒng)計學意義(P0.05)。7.在成年期的海馬腦區(qū),IL-6與NFM蛋白表達水平呈負相關(guān);而TNF-α與PSD95的水平呈正相關(guān)。在青春期海馬中星形膠質(zhì)細胞的密度與PSD95的表達水平負相關(guān)。結(jié)論早期母體免疫活化大鼠子代在精神分裂癥樣癥狀顯現(xiàn)之前就已經(jīng)存在多種突觸蛋白水平異常和神經(jīng)炎癥;突觸損傷和神經(jīng)炎癥存在一定的相關(guān)性。我們的研究提示青春期可能是疾病干預(yù)和治療的更為重要的一個關(guān)鍵時間點。
【圖文】：

圖 1 各組大鼠 PPI 實驗結(jié)果數(shù)（標準差（ x s）表示，***P＜0.001。圖 A、B 分別為青春期75、80、85 分貝）對驚嚇刺激反應(yīng)的抑制率的結(jié)果。圖 A 青春的差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；圖 B 成年期模型組大鼠降低，兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義（***P＜0.001）。測突觸相關(guān)蛋白能使機體具有獲取信息并做出恰當反應(yīng)的能力。每一分和整合各種各樣的信息。正確處理左右的信息需要在間。而進行這項復(fù)雜調(diào)控的基礎(chǔ)是突觸——神經(jīng)元之間被轉(zhuǎn)換成化學信號，如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，，然后化學信號當?shù)纳飳W過程。最終，不同腦區(qū)突觸活動整合起來形記憶。人們認為突觸缺損是精神分裂中重要的神經(jīng)病理

新鄉(xiāng)醫(yī)學院碩士學位論文突觸是一個不對稱的結(jié)構(gòu)，具有極性，本研究分別檢測了兩組大鼠前額葉和海馬區(qū)，突觸前膜蛋白突觸素和突觸后膜蛋白 PSD95 以及突觸骨架蛋白 NNFH，突觸調(diào)節(jié)蛋白 p-cofilin 在不同腦發(fā)育時期的表達水平。結(jié)果顯示：青春模型組突觸素在前額葉皮層區(qū)升高，NFH 在前額葉皮層區(qū)降低，NFM 在海馬區(qū)成年期時，模型組 PSD95 在兩個腦區(qū)的水平均下降，p-cofilin 在兩個腦區(qū)的升高。
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R749.3

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 葛年豐,錢國幀;大鼠下丘腦室旁核的突觸結(jié)構(gòu)[J];解剖學雜志;1988年01期

2 韓中勝;;非突觸信息傳遞方式[J];生理科學進展;1988年01期

3 孫經(jīng)淞;靳姍姍;樸豐源;洪巖;曲淑賢;高船舟;呂廣艷;;染砷小鼠腦突觸結(jié)構(gòu)變化及相關(guān)基因差異表達[J];中國公共衛(wèi)生;2009年10期

4 張建軍;于龍川;;NMDA受體參與皮層內(nèi)突觸結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)節(jié)[J];生理科學進展;2008年02期

5 陳易林;于德娥;魏青;韓曉潔;胡筱夏;韓文竹;胡前勝;;出生后鉛暴露對大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)可塑性的影響[J];衛(wèi)生研究;2012年03期

6 郭家松,尹保國,李振林,沈宏友,歐洋;酒精對小鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)影響的電鏡定量研究[J];解剖學研究;2000年02期

7 韓曉潔;胡筱夏;魏青;于德娥;陳易林;胡前勝;;鉛硒聯(lián)合作用對大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)參數(shù)的影響[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2013年13期

8 郭家松,尹保國,李振林,沈宏友,歐洋;電鏡定量分析酒精對小鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)的影響[J];第一軍醫(yī)大學分校學報;2000年02期

9 姚志彬,阮奕文,顧耀銘,陳以慈;藍斑突觸結(jié)構(gòu)衰老性變化和可塑性[J];神經(jīng)解剖學雜志;1991年02期

10 唐宗湘,沈端文,余欣欣,姜世英;蛤蚧圓核細胞形態(tài)及突觸結(jié)構(gòu)的觀察[J];解剖科學進展;1997年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 趙玉珍;張連巍;張彥;;豚鼠內(nèi)耳毛細胞與神經(jīng)終末突觸結(jié)構(gòu)的超微特點(摘要)[A];中國動物學會全國顯微與亞顯微形態(tài)科學（細胞及分子顯微技術(shù)科學）分會第十一次學術(shù)研討會論文摘要集[C];2002年

2 趙玉珍;郝存書;張彥;;豚鼠內(nèi)耳毛細胞與神經(jīng)終末突觸結(jié)構(gòu)的超微特點[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

3 盛慧;徐永君;陳妍明;張琰敏;倪鑫;;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素對海馬神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)節(jié)[A];中國生理學會張錫鈞基金第十二屆全國青年優(yōu)秀生理學學術(shù)論文交流及評獎會議綜合摘要[C];2013年

4 王麗峰;彭瑞云;胡向軍;高亞兵;王水明;董霽;徐新萍;趙黎;蘇鎮(zhèn)濤;;微波輻射對大鼠大腦皮層突觸結(jié)構(gòu)和功能的影響[A];第十二屆中國體視學與圖像分析學術(shù)會議論文集[C];2008年

5 張艷玲;李露斯;可金星;范文輝;;慢性腦灌注不足大鼠記憶和突觸結(jié)構(gòu)參數(shù)分析[A];第十二屆全國電子顯微學會議論文集[C];2002年

6 孫景波;華榮;何莉娜;;清腦通絡(luò)方對實驗性Alzheimer病模型大鼠。海馬突觸結(jié)構(gòu)的重建作用。[A];2010中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會摘要集[C];2010年

7 譚寶璇;蘇文;陳朝鳳;陳潔文;林勵;雷娓娓;;巴戟素對衰老大鼠皮層突觸結(jié)構(gòu)的重塑作用[A];全國中醫(yī)藥科研與教學改革研討會論文集[C];2000年

8 謝玉波;;多次丙泊酚給藥對大鼠空間學習記憶及海馬突觸結(jié)構(gòu)的影響[A];2009年西部麻醉學術(shù)論壇論文匯編[C];2009年

9 彭瑞云;王麗峰;魏麗;;微波輻射對神經(jīng)突觸可塑性的影響[A];第十一屆中國體視學與圖像分析學術(shù)會議論文集[C];2006年

10 彭志勇;程智剛;王云姣;楊文茜;潘冰冰;白念岳;郭曲練;;慢性神經(jīng)病理痛大鼠脊髓Ⅱ板層突觸結(jié)構(gòu)的可塑性變化[A];中華醫(yī)學會疼痛學分會第八屆年會暨CASP成立二十周年論文集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 記者　 顧鋼;德國科學家解開突觸結(jié)構(gòu)控制機理[N];科技日報;2007年

相關(guān)博士學位論文 前3條

1 孫琦峰;Threonate調(diào)節(jié)神經(jīng)元胞內(nèi)鎂對功能突觸密度影響的研究[D];清華大學;2016年

2 鐘偉霞;大鼠海馬可塑性改變對谷氨酸受體通道及其相關(guān)突觸蛋白表達調(diào)控的研究[D];浙江大學;2006年

3 沈萬華;Cdc42信號介導(dǎo)的突觸前快速成熟機制研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2006年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 胡筠卿;母體免疫激活致子代大鼠突觸異常及其與神經(jīng)炎癥之間的關(guān)系[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2018年

2 馬尚峰;康復(fù)訓練對腦梗塞大鼠行為、突觸結(jié)構(gòu)和突觸素表達影響[D];暨南大學;2008年

3 李鐵;不同頻率電針對腦梗死大鼠缺血區(qū)突觸結(jié)構(gòu)可塑性影響的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2016年

4 張潔;苯丙胺對大鼠學習記憶、海馬突觸結(jié)構(gòu)和突觸素表達影響[D];暨南大學;2008年

5 王雙軍;基于憶阻突觸的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)及其應(yīng)用研究[D];東南大學;2017年

6 劉幸毅;環(huán)境雌激素雙酚A對成年小鼠學習記憶和突觸結(jié)構(gòu)的影響[D];浙江師范大學;2013年

7 謝靈丹;圍生期雙酚A暴露對子代小鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)發(fā)育的影響[D];浙江師范大學;2012年

8 丁力;麻醉及手術(shù)創(chuàng)傷對老年大鼠認知功能及海馬突觸結(jié)構(gòu)的影響[D];蘭州大學;2009年

9 馮廣;基于憶阻橋突觸的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)電路研究及應(yīng)用[D];西南大學;2017年

10 劉曉靜;氟對體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)可塑性影響[D];華北理工大學;2017年

本文編號：2602286