【摘要】：背景妊娠期母體免疫活化會(huì)增加其成年子代罹患精神分裂癥的風(fēng)險(xiǎn)。目前人們普遍認(rèn)為精神分裂癥是一種神經(jīng)發(fā)育性疾病,在發(fā)育過(guò)程中不斷修剪的突觸在疾病過(guò)程中可能發(fā)揮的作用引起了人們的關(guān)注,研究表明,突觸結(jié)構(gòu)和功能的改變對(duì)精神分裂癥的發(fā)生是至關(guān)重要的。此外,人們認(rèn)為,神經(jīng)炎癥可能與突觸蛋白有一定的聯(lián)系并參與了這種高風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生。精神分裂癥患者尸腦研究發(fā)現(xiàn)其腦部存在神經(jīng)免疫系統(tǒng)的改變。然而,人們卻對(duì)疾病進(jìn)展過(guò)程中突觸、神經(jīng)炎癥以及行為學(xué)的動(dòng)態(tài)變化及其可能的機(jī)制知之甚少。目的在孕早期給予孕鼠聚肌胞苷酸(polyinsinic acid-polycytidylic acid,Poly(I:C)),從而導(dǎo)致其免疫活化,建立孕期感染精神分裂癥大鼠模型,觀察該模型在疾病發(fā)生發(fā)展中腦內(nèi)突觸相關(guān)蛋白表達(dá)水平、行為學(xué)、腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)以及大腦內(nèi)促炎性細(xì)胞因子Interleukin-6、Interleukin-1β、tumor necrosis factor(IL-6、IL-1β、TNF-α)蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化,分析不同時(shí)期機(jī)體的突觸缺損情況、免疫紊亂狀態(tài)及兩者之間的關(guān)系。方法1.選取無(wú)特異病原體(Specefic Pathogen Free,SPF級(jí))的6只SD雄鼠和22只SD雌鼠進(jìn)行交配育種(9周齡)。2.將成功受孕雌鼠隨機(jī)分為Poly(I:C)模型組(n=9)和Vehicle對(duì)照組(n=9),在GD9(確認(rèn)出現(xiàn)陰道栓后的第9天)時(shí),兩組尾靜脈分別進(jìn)行注射10mg/kg Poly(I:C)和等體積的0.9%無(wú)菌生理鹽水,注射結(jié)束后孕鼠立即返回原籠中,等待3小時(shí)后兩組隨機(jī)各選取3只動(dòng)物作為質(zhì)量控制,其它孕鼠無(wú)干擾至產(chǎn)下仔鼠。3.仔鼠在21日齡時(shí)離乳,將它們根據(jù)親代來(lái)源的不同分為模型組(n=46)和對(duì)照組(n=42),使其無(wú)干擾自然生長(zhǎng)。4.分別在青春期(出生后第40天,PND40)和成年期(出生后第60天,PND60)時(shí)對(duì)兩組仔鼠進(jìn)行前脈沖抑制行為的測(cè)定。5.分別在青春期(PND40)和成年期(PND60),采用免疫印記技術(shù)檢測(cè)兩個(gè)目的腦區(qū)中突觸相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)兩組仔鼠前額葉皮層和海馬兩個(gè)靶向腦區(qū)中的鈣結(jié)合蛋白1(ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的陽(yáng)性表達(dá),采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)前額葉皮層和海馬中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。6.根據(jù)數(shù)據(jù)分布類型選擇恰當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法,結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)來(lái)表示。不相關(guān)的兩組樣本比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),兩組非正態(tài)分布的樣本數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的兩獨(dú)立樣本檢驗(yàn),多樣本之間比較采用單因素方差(one-way ANOVA)分析,檢驗(yàn)結(jié)果P0.05可認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,使用SPSS20.0軟件對(duì)各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1.模型組孕鼠血漿中炎癥因子IL-6、IL-1β和TNF-α的蛋白表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.前脈沖抑制實(shí)驗(yàn)中,青春期模型組大鼠與對(duì)照組大鼠之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);成年期模型組大鼠在所有分貝下的前脈沖抑制率均降低,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.免疫印記結(jié)果顯示,突觸相關(guān)蛋白水平的變化存在時(shí)間和腦區(qū)特異性。模型組突觸前膜蛋白突觸素水平僅在青春期額葉出現(xiàn)的升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而PSD95在青春期時(shí),兩組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,僅在成年期時(shí)模型組兩個(gè)目標(biāo)腦區(qū)中PSD95的水平均是降低的,且這種兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;突觸骨架蛋白neurofilament medium(NFM)和neurofilament high(NFH)分別在青春期的海馬和青春期的額葉中水平降低;而對(duì)突觸功能起調(diào)節(jié)作用的p-cofilin在成年期額葉和海馬中水平均升高。4.免疫組化結(jié)果顯示,青春期時(shí)模型組額葉和海馬中Iba1陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量均高于對(duì)照組,兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);成年期時(shí)模型組兩目標(biāo)腦區(qū)中的Iba1陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量也均高于對(duì)照組,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),模型組在兩個(gè)時(shí)期不同腦區(qū)的小膠質(zhì)細(xì)胞均處于活化狀態(tài),其特點(diǎn)是分枝縮短減少,胞體增大。5.免疫組化結(jié)果顯示,青春期時(shí)模型組大鼠海馬和額葉中GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量與對(duì)照組相比,兩組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),成年期時(shí)模型組大鼠兩目標(biāo)腦區(qū)中的的GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量高于對(duì)照組,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。6.青春期模型組大鼠額葉和海馬中炎性細(xì)胞因子IL-1β和IL-6的蛋白水平升高,兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);成年期時(shí)與對(duì)照組相比,模型組大鼠海馬中炎癥因子水平的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而在前額皮質(zhì)勻漿中炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的蛋白表達(dá)水平均升高,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);此外,無(wú)論是青春期還是成年期,海馬中TNF-α的水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7.在成年期的海馬腦區(qū),IL-6與NFM蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān);而TNF-α與PSD95的水平呈正相關(guān)。在青春期海馬中星形膠質(zhì)細(xì)胞的密度與PSD95的表達(dá)水平負(fù)相關(guān)。結(jié)論早期母體免疫活化大鼠子代在精神分裂癥樣癥狀顯現(xiàn)之前就已經(jīng)存在多種突觸蛋白水平異常和神經(jīng)炎癥;突觸損傷和神經(jīng)炎癥存在一定的相關(guān)性。我們的研究提示青春期可能是疾病干預(yù)和治療的更為重要的一個(gè)關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)。
【圖文】：

圖 1 各組大鼠 PPI 實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)（標(biāo)準(zhǔn)差（ x s）表示，***P＜0.001。圖 A、B 分別為青春期75、80、85 分貝）對(duì)驚嚇刺激反應(yīng)的抑制率的結(jié)果。圖 A 青春的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；圖 B 成年期模型組大鼠降低，兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（***P＜0.001）。測(cè)突觸相關(guān)蛋白能使機(jī)體具有獲取信息并做出恰當(dāng)反應(yīng)的能力。每一分和整合各種各樣的信息。正確處理左右的信息需要在間。而進(jìn)行這項(xiàng)復(fù)雜調(diào)控的基礎(chǔ)是突觸——神經(jīng)元之間被轉(zhuǎn)換成化學(xué)信號(hào)，如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，，然后化學(xué)信號(hào)當(dāng)?shù)纳飳W(xué)過(guò)程。最終，不同腦區(qū)突觸活動(dòng)整合起來(lái)形記憶。人們認(rèn)為突觸缺損是精神分裂中重要的神經(jīng)病理

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文突觸是一個(gè)不對(duì)稱的結(jié)構(gòu)，具有極性，本研究分別檢測(cè)了兩組大鼠前額葉和海馬區(qū)，突觸前膜蛋白突觸素和突觸后膜蛋白 PSD95 以及突觸骨架蛋白 NNFH，突觸調(diào)節(jié)蛋白 p-cofilin 在不同腦發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：青春模型組突觸素在前額葉皮層區(qū)升高，NFH 在前額葉皮層區(qū)降低，NFM 在海馬區(qū)成年期時(shí)，模型組 PSD95 在兩個(gè)腦區(qū)的水平均下降，p-cofilin 在兩個(gè)腦區(qū)的升高。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R749.3

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本文編號(hào)：2602286