【摘要】： 本文使用的“針對(duì)HIV病毒BED三個(gè)亞群的酶免疫捕獲方法(BED-CEIA)”是一種定量酶聯(lián)免疫法。該實(shí)驗(yàn)固相載體包被羊抗人Ig-G，捕獲血漿或血清中的抗HIV-1抗體和非抗HIV-1抗體。通過捕獲的抗HIV-1抗體和非抗HIV-1抗體的相對(duì)數(shù)量可間接檢測(cè)樣品中抗HIV-1特異性Ig-G抗體占總Ig-G抗體的比例。在HIV感染者體內(nèi)，根據(jù)HIV特異性lgG占總IgG抗體的比例隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而增高，，可計(jì)算感染者大致的感染時(shí)間，從而確定是否新近感染。 主要檢測(cè)步驟： 1、按1：100稀釋樣本和對(duì)照，對(duì)照包括高滴度HIV-1抗體人血清的強(qiáng)陽性對(duì)照、低滴度HIV-1抗體人血清的弱陽性對(duì)照、不含HIV-1抗體人血清的陰性對(duì)照和低滴度HIV-1抗體人血清的校準(zhǔn)品對(duì)照。 2、稀釋樣本加入包被羊抗人Ig-G的微孔板中，37℃孵育1h，洗板。 3、將包含gp41的B，E和D表位的合成HIV生物素-抗原肽加入微孔板，37℃孵育1h，洗板。 4、將稀釋好的鏈親和素—過氧化物酶結(jié)合物(為磷酸鹽緩沖液與丙三醇的混合液內(nèi)含酶結(jié)合物)加入微孔板，37℃孵育90min，洗板。 5、加入TMB底物，37℃，嚴(yán)格孵育15min進(jìn)行顯色。 6、加入1mol／L H_2SO_4中止反應(yīng)，酶標(biāo)儀450nm(參考波長(zhǎng)630nm)測(cè)定OD值。 HIV-1 BED發(fā)病率檢測(cè)的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)，通過試劑盒自帶的標(biāo)準(zhǔn)品OD值來標(biāo)化樣本OD值以及陰性對(duì)照、弱陽性對(duì)照和強(qiáng)陽性對(duì)照OD值，以達(dá)到標(biāo)化定量的目的。另外，初檢的對(duì)照和復(fù)核檢測(cè)的樣本及對(duì)照均設(shè)置3個(gè)平行孔，并在計(jì)算結(jié)果時(shí)取中位數(shù)值，可有效控制操作誤差。BED檢測(cè)分兩個(gè)步驟，原理完全相同，重復(fù)檢測(cè)的目的是為了提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，避免操作誤差和偶然誤差。該試驗(yàn)具有以下特征： 1、血清稀釋100倍來檢測(cè)早期或既往感染。只要抗HIV-1抗體和非抗HIV-1抗體的比例保持穩(wěn)定，則該實(shí)驗(yàn)受稀釋變化的影響小。 2、實(shí)驗(yàn)程序簡(jiǎn)單，易于稀釋，精確性較高。 3、應(yīng)用多種亞型的gp41抗原可等效的檢測(cè)到HIV-1多種亞型的抗體，有相似的血清陽轉(zhuǎn)持續(xù)期。 4、HIV-1 BED發(fā)病率檢測(cè)的EIA實(shí)驗(yàn)應(yīng)用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，如陽性判斷值cutoff，血清陽轉(zhuǎn)持續(xù)時(shí)間或窗口期等，可應(yīng)用于HIV-1多種亞型的人群。 由于該方法在個(gè)體水平上可能產(chǎn)生相當(dāng)數(shù)量的假陽性和假陰性，而在人群水平上假陽性和假陰性數(shù)量接近，幾乎可以相互抵消，所以只能用于人群流行病學(xué)研究調(diào)查，不能用于個(gè)體診斷。 本文通過收集四川省2006年吸毒哨點(diǎn)人群初篩陽性樣本，進(jìn)行蛋白印跡法(WB)檢測(cè)，并對(duì)WB檢測(cè)確認(rèn)陽性樣本進(jìn)行新近感染檢測(cè)，對(duì)我省2006年吸毒哨點(diǎn)人群進(jìn)行了新近感染率的初步調(diào)查。檢測(cè)結(jié)果顯示HIV-1抗體確認(rèn)陽性率為12.04％，新近感染率(發(fā)病率)為1.36％，年新近感染率(年發(fā)病率)為3.19％，其95％可信區(qū)間(CI)為(4.12％～2.26％)。結(jié)合流行病學(xué)資料，結(jié)果顯示我省吸毒人群新近感染率尚處于一個(gè)較高水平，該人群的干預(yù)、宣傳措施仍需加強(qiáng)。本文率先在我省使用了用BED-CEIA方法測(cè)定HIV感染人群中的新近感染率，彌補(bǔ)四川省在HIV發(fā)病率研究方面的空白。
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R749.64;R512.91

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本文編號(hào)：2601342