【摘要】：目的:創(chuàng)傷應(yīng)激誘導(dǎo)恐懼記憶及其伴隨的焦慮將導(dǎo)致個(gè)體生活質(zhì)量下降、社會職能受損,還經(jīng)常伴有藥物濫用、恐懼癥和自傷行為等,給家庭及社會造成長期而持續(xù)的負(fù)面影響。伏隔核作為基底節(jié)的信息整合核團(tuán),在調(diào)節(jié)情緒及其情緒相關(guān)行為中具有非常重要的樞紐作用。伏隔核作為參邊緣系統(tǒng)的組成部分,參與構(gòu)成獎(jiǎng)賞環(huán)路和涉及藥物成癮。伏隔核內(nèi)γ-氨基丁酸能神經(jīng)元及其接受的多種神經(jīng)遞質(zhì)共同參與學(xué)習(xí)記憶和情緒活動反饋調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化為行為反應(yīng)。目前,對于伏隔核調(diào)控恐懼記憶和焦慮的分子機(jī)制仍不清楚。因此,深入探討應(yīng)激的發(fā)生分子機(jī)制、在伏隔核尋求有效的治療靶點(diǎn),對于發(fā)展持久有效的預(yù)防和治療措施具有重要的指導(dǎo)意義。方法:以C57BL/6J雄性小鼠為主要研究對象,將實(shí)驗(yàn)小鼠用規(guī)避檢測進(jìn)行初期的篩選,符合要求的小鼠分為對照組、觀察組和入侵組并分別進(jìn)行軀體創(chuàng)傷應(yīng)激和精神心理應(yīng)激處理,造模結(jié)束后再進(jìn)行規(guī)避檢測。相對于對照組,對實(shí)驗(yàn)組中表現(xiàn)有明顯恐懼記憶和焦慮小鼠的伏隔核腦區(qū)進(jìn)行高通量測序,篩選出差異表達(dá)的基因。將測序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并對部分基因進(jìn)行q PCR驗(yàn)證及雙熒光素酶系統(tǒng)驗(yàn)證。結(jié)果:1)經(jīng)過應(yīng)激造模5天后,入侵組造模后相對于造模前規(guī)避結(jié)果值顯著降低,觀察組造模后相對于造模前規(guī)避結(jié)果值顯著降低,入侵組相對于對照組規(guī)避結(jié)果值顯著降低,入侵組相對于觀察組組規(guī)避結(jié)果值顯著降低(P值均小于0.05)。2)通過比較對照組、入侵組和觀察組小鼠伏隔核高通量測序結(jié)果,以差異表達(dá)倍數(shù)大于1.5為標(biāo)準(zhǔn)篩選出對照組、入侵組和觀察組差異表達(dá)的micro RNA和m RNA。通過入侵組、觀察組分別與對照組小鼠的伏隔核腦區(qū)差異表達(dá)基因的比較得出,編碼Adr Rα、BDNF、SSR、ACh RM2/3、Glu RM2/8、Hr R1和AC的基因上調(diào),編碼DR3/5、PR2、GPγ8和P450的基因下調(diào),這些突觸受體和信號分子的變化說明生理/心理應(yīng)激或心理應(yīng)激導(dǎo)致了恐懼記憶和焦慮狀態(tài)的形成。3)通過對差異表達(dá)基因信號通路富集分析顯示神經(jīng)活性配體-受體相互作用,鈣離子信號通路,WNT信號通路,多巴胺能突觸,神經(jīng)營養(yǎng)因子信號通路,軸突導(dǎo)向,MAPK信號,谷氨酸能突觸,膽堿能突觸等信號通路參與了生理應(yīng)激或心理應(yīng)激導(dǎo)致的恐懼記憶的形成。4)通過三個(gè)靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫(Targetscan、RNAhybrid和mi Randa)對差異表達(dá)的micro RNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,進(jìn)一步與已經(jīng)篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行重疊,繪制了應(yīng)激小鼠伏隔核micro RNA/m RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖。5)挑選出一部分差異表達(dá)的micro RNA和m RNA分別進(jìn)行q PCR驗(yàn)證測序分析果,進(jìn)一步證明了測序結(jié)果的準(zhǔn)確性(P值均小于0.05)。6)通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)顯示mi R-483-5p直接靶向于Crhr1,mi R-669p-5p直接靶向于Adralb,Crhr1受mi R-483-5p的負(fù)調(diào)控,Adralb受mi R-669p-5p的負(fù)調(diào)控。結(jié)論:小鼠經(jīng)過應(yīng)激造模處理可以產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng);心理/生理應(yīng)激或心理應(yīng)激在伏隔核內(nèi)通過不同的突觸、信號通路等途徑導(dǎo)致了恐懼記憶和焦慮狀態(tài)的形成;通過對伏隔核m RNA和micro RNA的測序結(jié)果進(jìn)行分析,并通過q PCR和雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證測序結(jié)果與分析結(jié)論的一致性。
【圖文】：

圖 1. CD-1 鼠籠側(cè)面圖 C57 小鼠大，且具有較強(qiáng)的攻擊性。三一周（籠子的中間為一塊透明的有孔的亞-1 取出，雄性 CD-1 將對入侵者進(jìn)行攻擊，，結(jié)束后再將 CD-1 雌性放回籠子里繼續(xù)與 C57 小鼠放入有常駐雄性 CD-1 大鼠的一組的 C57 小鼠放入沒有 CD-1 大鼠的一側(cè)的亞克力板觀察到對面 C57 小鼠被 CD-1鼠撕咬 5 次，如果 CD-1 持續(xù)撕咬 C57 超一次應(yīng)激造模實(shí)驗(yàn)。觀察組小鼠需要觀察內(nèi) CD-1 撕咬 C57 至少 10 次，每天上午下察組小鼠持續(xù) 5 天應(yīng)激造模之后，在第 6檢測。

圖 1. CD-1 鼠籠側(cè)面圖型比 C57 小鼠大，且具有較強(qiáng)的攻擊性。三月齡籠一周（籠子的中間為一塊透明的有孔的亞克力 CD-1 取出，雄性 CD-1 將對入侵者進(jìn)行攻擊，作為驗(yàn)結(jié)束后再將 CD-1 雌性放回籠子里繼續(xù)與 CD-組的 C57 小鼠放入有常駐雄性 CD-1 大鼠的一側(cè)，觀察組的 C57 小鼠放入沒有 CD-1 大鼠的一側(cè)，這透明的亞克力板觀察到對面 C57 小鼠被 CD-1 攻擊1 大鼠撕咬 5 次，如果 CD-1 持續(xù)撕咬 C57 超過 1進(jìn)行一次應(yīng)激造模實(shí)驗(yàn)。觀察組小鼠需要觀察 CD鐘內(nèi) CD-1 撕咬 C57 至少 10 次，每天上午下午各和觀察組小鼠持續(xù) 5 天應(yīng)激造模之后，在第 6 天進(jìn)行為檢測。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.5

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本文編號：2592902