【摘要】：背景介紹:載脂蛋白E4（ApoE4）是現(xiàn)在所知的阿爾茨海默氏癥（Alzheimer’sdisease, AD）的最主要的發(fā)病因素。ApoE4攜帶者患阿爾茨海默氏癥的風(fēng)險高達(dá)60%。有研究結(jié)果提示ApoE4可影響線粒體功能，但是沒有實(shí)驗(yàn)直接研究ApoE4對線粒體形態(tài)的影響。由于線粒體的形態(tài)對其功能的維持具有重要意義，本實(shí)驗(yàn)研究了ApoE4對HEK293線粒體形態(tài)變化的影響，，并在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中證明這些形態(tài)和數(shù)目的變化伴隨著線粒體功能的損傷。目的：研究ApoE4對線粒體形態(tài)、數(shù)目和功能的影響。方法：以pEGFP N1為載體構(gòu)建ApoE的三種基因多態(tài)型ApoE2，ApoE3和ApoE4的綠色熒光質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞株（HEK293），用線粒體特異性的染料在轉(zhuǎn)染了ApoE綠色熒光質(zhì)粒的HEK293細(xì)胞上進(jìn)行免疫細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)。在共聚焦顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染了ApoE4的HEK293細(xì)胞中的線粒體形態(tài)和數(shù)目等方面的變化。并使用JC-1檢測試劑盒檢測線粒體膜電位的變化，用ATP檢測試劑盒檢測細(xì)胞中ATP生成量的變化，以檢測ApoE4對線粒體膜電位和ATP生成的影響。 結(jié)果： （1）ApoE4能夠顯著引起線粒體的數(shù)目減少，彎曲形態(tài)線粒體數(shù)目增多； （2）ApoE4引起線粒體膜電位降低； （3）ApoE4引起ATP生成量減少； （4）轉(zhuǎn)染ApoE4的細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物GADD153/CHOP和BiP表達(dá)量降低。 結(jié)論： ApoE4導(dǎo)致細(xì)胞中線粒體數(shù)目減少，呈彎曲形態(tài)線粒體數(shù)目增多，同時形態(tài)和數(shù)目的變化伴隨著線粒體膜電位的降低和ATP生成量的減少；ApoE4對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)無影響。提示ApoE4可直接并特異影響線粒體的形態(tài)和功能。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2570742