【摘要】：背景與目的 研究已證實(shí)急性給予氯胺酮的抗抑郁樣作用與氯胺酮致神經(jīng)元腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Brain derived neurotrophic factors,BDNF）表達(dá)上調(diào)有關(guān)，但其潛在機(jī)制尚不清楚；研究已證實(shí)微小RNA (microRNA,miRNA)可通過轉(zhuǎn)錄后水平來調(diào)控靶基因mRNA的表達(dá)；且研究發(fā)現(xiàn)miRNA-206（miR-206）可調(diào)控BDNF的表達(dá)；我們前期在體動(dòng)物和離體海馬神經(jīng)元細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)氯胺酮可致鼠海馬神經(jīng)元miR-206表達(dá)明顯下調(diào)，，而其目標(biāo)蛋白BDNF表達(dá)明顯增加；因此本實(shí)驗(yàn)的目的是：擬從細(xì)胞水平進(jìn)一步觀察上調(diào)神經(jīng)元內(nèi)miR-206表達(dá)后對氯胺酮處理神經(jīng)元miRNA-206、BDNF表達(dá)以及細(xì)胞功能的影響。 方法 原代培養(yǎng)7天的海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為對照、轉(zhuǎn)染、氯胺酮和轉(zhuǎn)染+氯胺酮四組，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)3次。對照組：海馬神經(jīng)元正常培養(yǎng)6和48h；轉(zhuǎn)染組:海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)染miR-206前體4h后,換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)6和48h；氯胺酮組：加入終濃度為100μM氯胺酮處理海馬神經(jīng)元6h后,換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)6和48h；轉(zhuǎn)染+氯胺酮組：海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)染miR-206前體4h后,加入終濃度為100μM氯胺酮繼續(xù)處理6h后，換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)6和48h。各組在神經(jīng)元最后處理后6h時(shí),提取RNA用qRT-PCR分析miR-206相對表達(dá)量；各組在培養(yǎng)至48h時(shí)：①用TUNEL法分析各組神經(jīng)元凋亡發(fā)生情況，②用western blot測定各組BDNF蛋白質(zhì)相對表達(dá)量，③膜片鉗測定各組單個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞電壓激活鈣電流（Voltage activated calcium currents，Ica(HVA)和瞬間外向鉀電流(Transient outward potassium current, IA)，④顯微鏡下觀察各組神經(jīng)元最長神經(jīng)突起（LPD），分枝數(shù)目（PDs）及神經(jīng)突起總長度（TDL）。 結(jié)果 析因設(shè)計(jì)方差分析表明：海馬神經(jīng)元miR-206和BDNF相對表達(dá)量,凋亡發(fā)生率以及單個(gè)神經(jīng)元Ica(HVA)和IA值不僅受miR-206轉(zhuǎn)染和氯胺酮兩個(gè)因素影響（P0.01），而且還受miR-206轉(zhuǎn)染和氯胺酮兩個(gè)因素交互作用影響，（P0.01）；進(jìn)一步采用單因素方差分析及LSD檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：與對照組比較：①氯胺酮組miR-206相對表達(dá)量以及單個(gè)神經(jīng)元Ica(HVA)或IA值明顯下降(P0.05),蛋白質(zhì)BDNF相對表達(dá)量明顯升高(P0.05)，而神經(jīng)元凋亡發(fā)生率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；②轉(zhuǎn)染組miR-206相對表達(dá)量、神經(jīng)元凋亡發(fā)生率以及單個(gè)神經(jīng)元Ica(HVA)和IA均明顯升高(P0.05),而蛋白質(zhì)BDNF相對表達(dá)量明顯下降(P0.05)；③轉(zhuǎn)染+氯胺酮組miR-206和蛋白質(zhì)BDNF相對表達(dá)量、神經(jīng)元凋亡發(fā)生率以及單個(gè)神經(jīng)元Ica(HVA)和IA均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。與氯胺酮組比較：①轉(zhuǎn)染組miR-206相對表達(dá)量、神經(jīng)元凋亡發(fā)生率以及單個(gè)神經(jīng)元Ica(HVA)和IA均明顯升高(P0.05),而蛋白質(zhì)BDNF相對表達(dá)量明顯下降(P0.05)；②轉(zhuǎn)染+氯胺酮組miR-206相對表達(dá)量以及單個(gè)神經(jīng)元Ica(HVA)和IA明顯升高(P0.05)，蛋白質(zhì)BDNF相對表達(dá)量明顯下降(P0.05)，而神經(jīng)元凋亡發(fā)生率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。顯微鏡下觀察各組神經(jīng)元LPD、PDs以及TDL無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論 1.海馬神經(jīng)元miR-206高表達(dá)可抑制氯胺酮誘發(fā)的BDNF蛋白質(zhì)表達(dá)。 2.miR-206高表達(dá)致神經(jīng)元凋亡可能與其誘發(fā)神經(jīng)元電壓激活鈣電流和瞬間外向鉀電流增加有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 趙景霞;納米氧化鋅對海馬神經(jīng)元電生理特性的影響及對PC12細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制研究[D];南開大學(xué);2010年

2 趙以林;異氟烷對發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)元電生理及興奮性神經(jīng)毒性的影響[D];華中科技大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2541795