【摘要】：目的 觀察硫化氫(H2S)的前體物質(zhì)硫氫化鈉(NaHS)對嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)存活與生長的影響,獲取對細(xì)胞存活與生長的最佳實(shí)驗(yàn)濃度；觀察硫氫化鈉(NaHS)對淀粉樣前體蛋白(APP)α代謝途徑及α-分泌酶的影響,探討外源性H2S對該代謝途徑的作用是否與α-分泌酶相關(guān)。 方法 以體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞為研究對象,用硫氫化鈉(NaHS)作外源性H2S供體。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組、NaHS10μmol/L組、25μmol/L組、50μmol/L組、100μmol/L組、200μmol/L組、500μmol/L組和1000μmol/L組,共8組。按分組濃度分別處理PC12細(xì)胞24h后,用MTT法檢測細(xì)胞存活與生長,觀察不同濃度NaHS對細(xì)胞存活的影響,篩選出適合實(shí)驗(yàn)的NaHS濃度。按適合實(shí)驗(yàn)濃度處理PC12細(xì)胞后,Western blot法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中APP、ADAM10和ADAM17蛋白水平,ELISA法檢測p-淀粉樣蛋白40(Aβ40)、Aβ42、可溶性APP片段α(sAPP-α)和可溶性APP片段β(sAPP-β)水平。觀察不同濃度NaHS對APP代謝和α-分泌酶活性的影響。 結(jié)果 1.PC12細(xì)胞的存活與生長MTT法檢測結(jié)果顯示,隨著NaHS濃度(10μmol/L-200μmol/L)的增加,PC12細(xì)胞的存活與生長越好(P0.05)；其中對培養(yǎng)神經(jīng)元存活的最佳NaHS濃度是100μmol/L和200μmol/L(P0.05)。隨著NaHS濃度(500μmol/L～1000μmol/L)的增加,細(xì)胞的生長活力下降。500μmol/L和1000μmol/LNaHS濃度時對培養(yǎng)神經(jīng)元有毒性損傷作用。 2.APP蛋白表達(dá)與對照組相比較,不同濃度NaHS組的APP蛋白表達(dá)水平無明顯差異(P0.05)。 3. sAPP-α、A β40、A β42和sAPP-β蛋白表達(dá)與對照組相比較,隨著NaHS濃度的增加(10-200μmol/L),不同濃度NaHS組sAPP-α蛋白表達(dá)水平增高,而Aβ40、A β42和sAPP-β蛋白表達(dá)水平降低,且具有濃度相關(guān)性。各組間比較差別均有顯著性差異(P0.05)。 4. ADAM10和ADAM17蛋白表達(dá)不同濃度NaHS組的ADAM10和ADAM17蛋白表達(dá)水平較對照組增高,且隨著NaHS濃度(從10-1001μmol/L)增加,蛋白表達(dá)水平呈遞增趨勢(P0.05),說明NaHS增強(qiáng)了PC12細(xì)胞的α-分泌酶活性。100μmol/L和200μmol/LNaHS組的ADAM17表達(dá)水平無明顯差異(P0.05),但100μmol/LNaHS組的ADAM10蛋白表達(dá)水平最高(P0.01)。 結(jié)論 1.100μmol/L和200μmol/L濃度的NaHS更利于體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞存活和生長,500μmol/L和1000μmol/L濃度的NaHS對細(xì)胞有毒性傷害作用； 2.外源性H2S能上調(diào)體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞的sAPP-α,減少Aβ40、A β42和sAPP-β病理產(chǎn)物的生成,即增強(qiáng)APP非淀粉樣物質(zhì)代謝途徑(α代謝途徑)。外源性H2S能增加ADAM10和ADAM17蛋白表達(dá),即增強(qiáng)α-分泌酶的活性。外源性H2S增強(qiáng)APP非淀粉樣物質(zhì)代謝途徑(α代謝途徑)作用可能與增強(qiáng)α-分泌酶活性有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

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