【摘要】：目的:1.探討不同制備條件對Aβ寡聚體合成的影響,以及利用原子力顯微鏡(AFM)觀察β-淀粉樣蛋白(Aβ_(1-42))的不同聚集形態(tài)結構;2.Aβ寡聚體對大鼠記憶學習能力損害及神經毒性研究。方法:1.寡聚體合成、形態(tài)觀察:以PBS稀釋并合成,合成條件分別為:4℃1d、4℃7d、37℃1d,然后通過蛋白免疫印跡方法觀察Aβ寡聚體聚集水平;用AFM輕敲模式及相位成像技術觀察Aβ_(1-42)不同聚集形態(tài)結構;2.Aβ寡聚體對大鼠記憶學習損害及神經毒性研究:通過立體定位儀進行大鼠兩側側腦室寡聚體等注射,建立阿爾茨海默病(AD)模型;使用Morris水迷宮定位航行試驗檢測大鼠學習記憶能力;采用HE染色觀察大鼠皮質、海馬神經細胞的形態(tài)學變化;3.采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計學分析。結果:1.通過蛋白免疫印跡方法觀察發(fā)現,Aβ寡聚體在4℃1d下以二聚體、三聚體(6-15Kd之間)為主,4℃7d下以四聚體(19Kd上下)、十二聚體(49-64Kd之間)為主,37℃1d下以三聚體(15Kd上下)、六聚體(30Kd上下)、十四聚體(70Kd上下)為主。2.通過AFM觀察到不同形態(tài)的Aβ聚集體,包括球狀寡聚體、環(huán)狀結構、初級原纖維、成熟原纖維、纖維體等。初級原纖維呈串珠樣鏈狀結構,成熟原纖維呈致密的繩狀結構。3.Aβ寡聚體對大鼠記憶學習能力:Aβ寡聚體組、Aβ纖維體組大鼠的逃避潛伏期與造模前比較均延長,具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與Aβ纖維組比較,Aβ寡聚體組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(P0.05)。4.Aβ寡聚體對大鼠神經元的影響:Aβ寡聚體組較纖維組大鼠神經元形態(tài)更明顯,Aβ寡聚體組海馬神經元排列紊亂,細胞數減少,胞質大量空泡形成,核固縮,深染。結論:1.制備溫度和時間是Aβ寡聚體聚集水平的重要條件,在一定條件下,時間越長、溫度越高,聚集水平越高;2.AFM技術是研究蛋白質聚集過程中動態(tài)變化的較好工具,通過AFM可觀察到Aβ動態(tài)聚集過程,包括球狀寡聚體、環(huán)狀結構、初級原纖維、成熟原纖維、纖維體等;3.高分子量Aβ寡聚體較纖維體的神經毒性更強。
[Abstract]:Objective: 1. The effects of different preparation conditions on the synthesis of A 尾 oligomer were investigated, and the different aggregation morphology and structure of 尾-starch protein (A 尾 _ (1 鈮，

本文編號：2485776