【摘要】：目的： 1.探索建立酒精性癡呆模型的最佳條件。 2.探討骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMMSCs)移植治療大鼠酒精性癡呆（alcohol-associated dementia，AAD）的療效及其機制。 方法： 1、以SD大鼠為研究對象，按數(shù)字隨機方法分為：①20%酒精(4ml/kg/d)灌胃28d組；②20%酒精(4ml/kg/d)腹腔注射28d組；③20%酒精(4ml/kg/d)灌胃14d組；④20%酒精(8ml/kg/d)灌胃14d組；⑤20%酒精(12ml/kg/d)灌胃14d組；⑥生理鹽水(4ml/kg/d)灌胃28d對照組；⑦生理鹽水(4ml/kg/d)腹腔注射28d對照組；⑧生理鹽水（4ml/kg/d）灌胃14d。探索建立AAD大鼠模型最佳條件。 2、Morris水迷宮行為學檢測逃避潛伏期（Escape Latency，EL），以測定大鼠癡呆程度。 3、HE組織化學染色檢測酒精性癡呆大鼠海馬齒狀回腦組織損傷形態(tài)學變化。 4、Hoechst熒光染色觀察、計數(shù)酒精性癡呆大鼠海馬齒狀回凋亡神經(jīng)細胞。 5、直接貼壁法分離、培養(yǎng)、純化和擴增BMMSCs。 6、流式細胞儀鑒定BMMSCs表面抗原CD90、CD29、CD34、CD45。 7、選擇最適合的AAD大鼠模型建立方法[(20%酒精(4ml/kg·d)灌胃28d]，同時設立生理鹽水對照組評估模型。AAD模型建立1周后采用靜脈或立體定向移植途徑移植3×106BMMSCs或PBS，Morris水迷宮行為學檢測BMMSCs移植后EL改變。 8、各組大鼠腦組織HE、Hoechst33342染色觀察、計數(shù)BMMSCs靜脈移植或立體定向移植后腦組織海馬齒狀回形態(tài)和凋亡神經(jīng)細胞數(shù)的變化。 9、免疫組織化學檢測大鼠海馬齒狀回、CA1區(qū)、CA3各區(qū)BDNF的表達。 10、采用比色法檢測大鼠血清T-SOD和GSH-PX活力。 結果： 1、與相應生理鹽水對照組相比，20%酒精(4ml/kg·d)灌胃14d或28d組均可誘導大鼠學習記憶功能明顯損害，大鼠EL均顯著延長（P0.05）；而20%酒精(4ml/kg·d)腹腔注射28d、20%酒精(8ml/kg·d，中劑量)灌胃14d、20%酒精(12ml/kg·d，高劑量)灌胃14d等3組大鼠EL延長與20%酒精(4ml/kg·d)灌胃28d組無顯著統(tǒng)計學差異（P0.05）。 2、HE染色顯示各AAD模型組大鼠海馬齒狀回出現(xiàn)散在或局灶分布的異形神經(jīng)細胞。 3、Hoechst33342熒光染色顯示各AAD模型組大鼠海馬齒狀回的異形細胞呈局灶碎片、濃染的凋亡形態(tài)，與相應對照組相比其凋亡細胞增多，與對照組相比酒精灌胃14d和28d增多均有顯著性差異（P0.05），且隨著酒精灌胃時間延長，海馬齒狀回凋亡神經(jīng)細胞數(shù)顯著增多（F=20.74，P0.001）。然而酒精對神經(jīng)細胞凋亡的影響并不隨酒精劑量的增加而增加（P0.05）。 4、BMMSCs貼壁生長，形態(tài)呈梭形，流式細胞儀鑒定高表達CD29(98.6%)和CD90(80.4%)，，低表達CD34（0.1%）和CD45(5.8%)。 5、與生理鹽水對照組相比，選擇20%酒精(4ml/kg·d)灌胃28d成功建立AAD模型，AAD模型組大鼠EL顯著延長（P0.05）。AAD模型大鼠BMMSCs靜脈或立體定向移植2周后與PBS移植組比較，大鼠空間定向?qū)W習記憶功能顯著改善，MWM行為學檢測EL均顯著縮短。 6、BMMSCs尾靜脈移植和立體定向移植2周后與PBS移植組相比，AAD大鼠海馬齒狀回異性病理形態(tài)的神經(jīng)細胞少且散在，凋亡的神經(jīng)細胞數(shù)顯著減少（P0.05）； 7、與生理鹽水對照組比較，AAD模型組海馬DG、CA1和CA3區(qū)BDNF表達均降低，而與PBS靜脈或立體定向移植2周后AAD組比較，BMMSCs靜脈或立體定向移植2周后大鼠海馬DG、CA1、CA3區(qū)BDNF表達均增高，且靜脈移植組CA1區(qū)BDNF表達增高有顯著性意義（P0.05），定向移植組DG和CA1區(qū)BDNF表達增高有顯著性意義（P0.05）； 8、與生理鹽水對照組比較，AAD模型組大鼠血清T-SOD和GSH-PX酶活力均降低，而BMMSCs尾靜脈移植或立體定向移植2周后AAD大鼠血清T-SOD和GSH-PX酶活力均增加，且靜脈移植組GSH-PX活力增加有顯著性差異（P0.05），立體定向移植組大鼠血清T-SOD活力增加有顯著性差異（P0.05）。 結論： 1、低劑量（20%酒精4ml/kg）酒精灌胃14-28d是AAD動物模型建立的最適宜條件。 2、BMMSCs立體定向或靜脈移植均可通過增加海馬BDNF表達及提高T-SOD和GSH-PX活力等抗氧化應激反應能力等抑制AAD大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡、改善AAD大鼠視空間定向?qū)W習記憶能力。
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【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R749.62

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本文編號：2358500