本文選題：阿爾茨海默癥 + 細(xì)胞凋亡��； 參考：《吉林大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：Presenilin相關(guān)蛋白PSAP （Presenilin-associated protein），是一種線(xiàn)粒體促凋亡蛋白。然而，PSAP誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制至今仍然懸而未決。為了解決這一問(wèn)題，我們?cè)贖EK293細(xì)胞中建立了一個(gè)可誘導(dǎo)PSAP過(guò)表達(dá)的系統(tǒng)，運(yùn)用這一體系，我們檢測(cè)了在PSAP過(guò)表達(dá)引起的凋亡中，不同因子發(fā)揮的作用。這些因子包括：半胱氨酸天冬氨酸酶（Cysteine aspartic acid specific protease，caspases，簡(jiǎn)稱(chēng)半胱天冬酶）， Bcl-2家族蛋白，細(xì)胞色素c， Smac蛋白（Smac/Diablo, second mitochondria-derived activator of caspases/direct IAPbinding protein with low PI）， Apaf-1蛋白（apoptotic protease-activatingfactor）。我們的結(jié)果顯示，PSAP誘導(dǎo)的凋亡依賴(lài)于caspase的活性。抑制caspase-9基因的表達(dá)阻斷PSAP引起的PARP切割和caspase的活化，但是caspase-8基因的抑制表達(dá)對(duì)PSAP引起的凋亡沒(méi)有影響。這一現(xiàn)象說(shuō)明，在PSAP過(guò)表達(dá)引起的凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)中，caspase-9充當(dāng)起始caspase的作用。除了caspase-9，， Apaf-1基因的抑制表達(dá)也能夠阻斷PSAP引起的caspase活化和PARP切割，說(shuō)明由細(xì)胞色素c引起的凋亡復(fù)合體—apoptosome—的形成對(duì)PSAP誘導(dǎo)的凋亡至關(guān)重要。除此之外，Smac基因的抑制表達(dá)也能阻礙PSAP過(guò)表達(dá)引起的caspase活化和PARP切割。這一結(jié)果說(shuō)明，除了Apaf-1或凋亡復(fù)合體的形成，Smac對(duì)于PSAP介導(dǎo)的凋亡同樣不可或缺。抗凋亡蛋白Bcl-2或Bcl-xl的過(guò)表達(dá)不能抑制PSAP引起的細(xì)胞程序性死亡，而抑制促凋亡蛋白Bid，Bax和Bak的基因的表達(dá)同樣不影響PSAP引起的細(xì)胞色素c和Smac從線(xiàn)粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì)中。以上結(jié)果說(shuō)明PSAP引起的凋亡不受Bcl-2家族蛋白的調(diào)控。因此，PSAP引起特殊的線(xiàn)粒體途徑的凋亡，這一特殊的途徑不受Bcl-2家族蛋白調(diào)控，但依賴(lài)于細(xì)胞色素c-Apaf-1-凋亡復(fù)合體的形成，以及Smac從線(xiàn)粒體中的釋放。
[Abstract]:Presenilin associated protein), (PSAP) is a mitochondrial apoptotic protein. However, the mechanism of apoptosis induced by PSAP is still unknown. In order to solve this problem, we established a system to induce overexpression of PSAP in HEK293 cells. Using this system, we examined the role of different factors in apoptosis induced by overexpression of PSAP. These factors include: cysteine aspartic acid specific protease caspases, Bcl-2 family proteins, cytochrome c, Smac protein (second mitochondria-derived activator of caspases/direct IAPbinding protein with low Pi), Apaf-1 protein (apoptotic protease-activatingfactor). Our results showed that apoptosis induced by PSAP-dependent on the activity of caspase. Inhibition of the expression of caspase-9 gene blocked PARP-cleavage and caspase activation, but the inhibitory expression of caspase-8 gene had no effect on the apoptosis induced by caspase-8. This phenomenon suggests that caspase-9 acts as the initiator of caspase in the cascade of apoptosis induced by overexpression of PSAP. In addition to caspase-9, the inhibitory expression of Apaf-1 gene also blocked the activation and cleavage of caspase induced by caspase, which indicated that the formation of apoptotic complex -apoptosome- induced by cytochrome c was crucial to the apoptosis induced by caspase. In addition, the inhibitory expression of SMAC gene also blocked the activation and cleavage of caspase induced by PSAP-overexpression. These results suggest that in addition to the formation of Apaf-1 or apoptotic complex, SMAC is also essential for PSAP-mediated apoptosis. Overexpression of anti-apoptotic proteins Bcl-2 or Bcl-xl did not inhibit programmed cell death induced by PSAP, while inhibition of the expression of bid-Bax and Bak genes did not affect the release of cytochrome c and SMAC from mitochondria into cytoplasm. These results suggest that apoptosis induced by PSAP is not regulated by Bcl-2 family proteins. Therefore, PSAP induces apoptosis through a special mitochondrial pathway, which is not regulated by Bcl-2 family proteins, but is dependent on the formation of cytochrome c-Apaf-1- apoptotic complex and the release of SMAC from mitochondria.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

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本文編號(hào)：2078826