本文選題：β-淀粉樣蛋白　切入點：電泳　出處：《中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)經(jīng)過自身聚集形成寡聚體,是導(dǎo)致阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)發(fā)病的重要風(fēng)險因素之一。鑒定Aβ寡聚狀態(tài)對于細(xì)胞毒性和寡聚抑制的研究非常重要。本文通過優(yōu)化Aβ42蛋白用量、增加交聯(lián)劑、尺寸排阻色譜法(size exclusion chromatography,SEC)和硫磺素T(thioflavin T,Th T)熒光分析等方法,對Aβ42的蛋白質(zhì)聚集狀態(tài)進行檢測。得到改進和優(yōu)化的方案:(1)對電泳和電鏡的優(yōu)化,16.5%的Tris-tricine膠,最適合分析Aβ42寡聚狀態(tài)。使用電泳和電鏡對Aβ42檢測時,其用量有較嚴(yán)格的限制。電泳的上樣量應(yīng)為0.5μg最佳。50μg/m L Aβ42單體濃度,最適合電鏡觀察;(2)對Aβ42交聯(lián)的優(yōu)化,終濃度為0.3mmol/L BS3,有利于對Aβ42寡聚體的區(qū)分;(3)SEC可以利用凝膠孔隙的大小,實現(xiàn)Aβ42單體和寡聚體在非變性條件下的分離。與Aβ40相比,Aβ42進行SEC分析時,單次上樣量需達到6.75μg以上;(4)細(xì)胞毒性實驗和Th T檢測,可以反饋Aβ42寡聚狀態(tài)的鑒定效果。上述檢測方法的細(xì)化和改進,將為Aβ42肽在AD的研究中提供一定的參考。一些Aβ42特異性寡聚體的鑒定方法本文未提及,仍需要在今后的研究中進一步改進與優(yōu)化。
[Abstract]:Beta amyloid (-amyloid beta peptide and A beta) after their aggregation form oligomers, is the cause of Alzheimer's disease (Alzheimer 's disease, AD) is one of the important risk factors. Identification of A beta oligomers for cytotoxicity and oligo inhibition is very important. In this paper, through the optimization of A protein beta 42 increase the dosage, crosslinking agent, size exclusion chromatography (size exclusion chromatography SEC T (Thioflavin) and Thioflavin T, Th T) fluorescence analysis method to detect A protein beta 42 aggregation. Improved and optimized the scheme: (1) the optimization of electrophoresis and electron microscope, 16.5% Tris-tricine glue, most suitable for the analysis of A beta 42 oligomeric state of A beta 42. Detection using electrophoresis and electron microscope, the amount is limited. The electrophoresis sample volume should be 0.5 ~ g g/m L best.50 A beta 42 monomer concentration, the most suitable for electron microscopy; (2) the optimization of A beta 42 cross-linked, The final concentration of 0.3mmol/L BS3, is conducive to the distinction of A beta 42 oligomers; (3) SEC can use the gel pore size, separation of A beta 42 monomer and dimer under non denaturing conditions. Compared with A beta 40, beta 42 A SEC analysis, single sample the amount required to reach more than 6.75 mu g; (4) cytotoxicity and Th T detection, the identification results can feedback the A beta 42 oligomeric state. The detection method of refinement and improvement, will be A beta 42 peptide in the AD study to provide some reference. Some methods for the identification of A beta 42 specific oligonucleotide this paper did not mention the dimer, still needs further improvement in future research in optimization.

【作者單位】： 西藏民族大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.31660243) 西藏自治區(qū)自然科學(xué)基金項目(No.12KJZRZMY02)~~
【分類號】：R749.16

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9 劉U，

本文編號：1557081