本文關(guān)鍵詞：TDP-43與β-淀粉樣前體蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相互作用并誘導(dǎo)P53依賴(lài)的細(xì)胞凋亡　出處：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： TDP-43 β-淀粉樣前體蛋白 β-淀粉樣前體蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域 阿爾茨海默病 神經(jīng)退行性疾病

【摘要】：目的： 探求TDP-43(TAR DNA-binding protein43)與β-淀粉樣前體蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（the intracellular domain of Amyloid Precursor Protein，AICD）之間的關(guān)系，從而揭示其在阿爾茨海默病病理機(jī)制中可能發(fā)揮的作用。 方法： 1.運(yùn)用免疫熒光染色方法在HEK293/COS7細(xì)胞系上檢測(cè)TDP-43與AICD在細(xì)胞水平的是否存在共定位。2.在細(xì)胞系上轉(zhuǎn)染克隆質(zhì)粒TDP-43-V5、APP-FLAG，，48h后收集細(xì)胞提取蛋白，用免疫共沉淀（co-immunoprecipitations）的方法檢測(cè)APP（β淀粉樣蛋白前體蛋白）與TDP-43在蛋白水平是否結(jié)合。在野生型C57/BL6J成年小鼠的大腦組織上用免疫共沉淀方法證明內(nèi)源性的TDP-43與APP在正常小鼠腦組織中是否存在結(jié)合關(guān)系。進(jìn)一步在細(xì)胞系上轉(zhuǎn)染質(zhì)粒TDP-43-V5、AICD-FLAG，以明確TDP-43是否與AICD存在結(jié)合關(guān)系。3.用雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試方法檢測(cè)TDP-43對(duì)AICD是否存在轉(zhuǎn)錄作用，進(jìn)一步加入APP γ酶切位點(diǎn)的分泌酶抑制劑，觀察這種轉(zhuǎn)錄作用是否有變化。用Real-Time PCR的方法檢測(cè)這種轉(zhuǎn)錄作用對(duì)P53mRNA水平的影響。4.在分別轉(zhuǎn)染了AICD，TDP-43，AICD+TDP-43的細(xì)胞系上計(jì)數(shù)Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞，直接比較對(duì)細(xì)胞凋亡的作用。使用TUNEL法再次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果： 1.免疫熒光染色，觀察到在體外培養(yǎng)的HEK293/COS7細(xì)胞系上，TDP-43在細(xì)胞水平定位于胞核，AICD大部分位于胞核，且二者存在共定位關(guān)系。2.在細(xì)胞系上轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，進(jìn)一步證明了TDP-43與AICD在蛋白水平存在結(jié)合。在野生型C57/BL6J成年小鼠的大腦組織上檢測(cè)到內(nèi)源性的TDP-43與AICD存在結(jié)合。3.TDP-43對(duì)AICD有類(lèi)似于Fe65樣的轉(zhuǎn)錄激活作用，但是這種作用可以被加入的APPγ酶切位點(diǎn)的分泌酶抑制劑所阻斷（***p0.001；NS：無(wú)意義）。TDP-43有類(lèi)似與AICD的作用，增加P53mRNA的表達(dá)水平，從而促進(jìn)TP53基因編碼的P53蛋白的轉(zhuǎn)錄作用，且TDP-43可以增強(qiáng)AICD該種轉(zhuǎn)錄激活作用（*：p 0.05；**: p 0.01；***p 0.001）。4. TDP-43在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面有與AICD類(lèi)似的作用，其增加Caspase-3陽(yáng)性或TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡；并且TDP-43可以增強(qiáng)AICD誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用（*：p 0.05；**：p 0.01；***：p 0.001）。 結(jié)論： TDP-43與AICD共定位存在與細(xì)胞核中；TDP-43增強(qiáng)AICD的轉(zhuǎn)錄作用，以及ACID對(duì)P53的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用；TDP-43促進(jìn)AICD介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。因此，通過(guò)我們的研究結(jié)果可以設(shè)想，TDP-43可能為阿爾茨海默病研究的新靶點(diǎn)。阿爾茨海默病相關(guān)病理組織的萎縮可能與TDP-43調(diào)控的APP信號(hào)通路有相關(guān)性。
[Abstract]:Objective: Study on the relationship between TDP-43(TAR DNA-binding protein 43 and 尾 -amyloid precursor protein (尾 -amyloid precursor protein). The intracellular domain of Amyloid Precursor Protein. The relationship between AICD, thus revealing its possible role in the pathological mechanism of Alzheimer's disease. Methods: 1. Immunofluorescence staining was used to detect the co-localization of TDP-43 and AICD in HEK293/COS7 cell line. 2. Transfection of cloned plasmid T. DP-43-V5. After 48 hours of APP-FLAGG, the protein extracted from the cells was collected. Detection of app (尾 -amyloid precursor protein) by co-immunoprecipitation with co-immunoprecipitation. The immunoprecipitation method was used to prove that endogenous TDP-43 and APP were present in the brain of normal C57 / BL6J adult mice by immunoprecipitation. Further transfection of plasmid TDP-43-V5 on cell line was carried out. AICD-FLAG. To determine the binding relationship between TDP-43 and AICD. 3. To detect whether TDP-43 has transcriptional effect on AICD by double luciferase reporter gene test. The secretory enzyme inhibitor of APP 緯 restriction site was added further. Real-Time PCR was used to detect the effect of transcription on p53 mRNA level. 4. AICD was transfected respectively. Caspase-3 positive cells were counted on the cell line of TDP-43 AICD TDP-43, and the effect on apoptosis was compared directly. TUNEL method was used to repeat the experiment. Results: 1. Immunofluorescence staining showed that TDP-43 was located mostly in the nucleus of HEK293/COS7 cell line at the cellular level. And there is a colocalization relationship between them. 2. Transfection plasmid on cell line. It was further demonstrated that TDP-43 and AICD bind to protein level. Endogenous TDP-43 and AICD knots were detected in the brain tissues of wild-type C57 / BL6J adult mice. The transcriptional activation of AICD by TDP-43 is similar to that of Fe65. However, this effect could be blocked by the addition of secretory enzyme inhibitor at APP 緯 site. NS.TDP-43 has similar effect with AICD and increases the expression level of p53 mRNA, thus promoting the transcription of p53 protein encoded by TP53 gene. TDP-43 could enhance the transcriptional activation of AICD. P0.01; TDP-43 has similar effect as AICD in inducing apoptosis, which increases the number of Caspase-3 positive cells or TUNEL positive cells. Promoting apoptosis; TDP-43 could enhance the apoptosis induced by AICD. P0.01; A: P 0.001. Conclusion: TDP-43 and AICD co-located in the nucleus; TDP-43 enhanced the transcription of AICD and the transcriptional regulation of p53 by ACID. TDP-43 promotes apoptosis mediated by AICD. Therefore, through our research results, we can imagine. TDP-43 may be a new target for the study of Alzheimer's disease. The atrophy of Alzheimer's disease-related tissues may be related to the APP signaling pathway regulated by TDP-43.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉仕昌;楊卓;;聚乙二醇減少腦外傷退變軸索內(nèi)β淀粉樣前體蛋白積聚[J];天津醫(yī)藥;2007年12期

2 景沛;;Alzheimer病[J];生命的化學(xué);1993年04期

3 李琳;郝峻巍;王志華;Holscher Christian;;雌激素減少去卵巢兔高膽固醇誘導(dǎo)的淀粉樣前體蛋白信使RNA過(guò)表達(dá)并抑制前額葉皮層Aβ表達(dá)(英文)[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2009年05期

4 閆峰;劉向榮;張營(yíng);張陳誠(chéng);吉訓(xùn)明;羅玉敏;;遠(yuǎn)隔后適應(yīng)對(duì)大鼠腦組織中淀粉樣前體蛋白表達(dá)的影響[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年04期

5 石琦;韓俊;高晨;李鋒;張寶云;周玉玲;董小平;;淀粉樣前體蛋白的原核表達(dá)、純化及抗血清的制備和應(yīng)用[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2006年03期

6 李曉晴;張?zhí)K明;駱清銘;張智紅;;突變型APP雙熒光融合基因的構(gòu)建和FRET對(duì)其表達(dá)的研究[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2007年04期

7 徐光;郭凌晨;石莎;殷明;;治療阿爾茨海默病的新策略:腦啡肽酶[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年06期

8 李曉晴;張?zhí)K明;楊華靜;張智紅;;多光子激光掃描成像技術(shù)對(duì)活細(xì)胞內(nèi)淀粉樣前體蛋白裂解和β-淀粉樣蛋白生成的觀察(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2007年05期

9 張瑞;王子玫;夏宗勤;胡雅兒;;知母皂苷元對(duì)HEK293sw細(xì)胞APP和BACE1的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年07期

10 張婷;;糖尿病加劇大鼠腦缺血損傷及皮層淀粉樣蛋白的生成[J];中華腦血管病雜志(電子版);2010年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 邱瑜;吳興軍;榮征星;周冠懷;陳紅專(zhuān);;M受體對(duì)大鼠海馬和大腦皮層的淀粉樣前體蛋白代謝調(diào)節(jié)作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第八次全國(guó)代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

2 邱瑜;吳興軍;榮征星;周冠懷;陳紅專(zhuān);;M受體對(duì)大鼠海馬和大腦皮層的淀粉樣前體蛋白代謝調(diào)節(jié)作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第八次全國(guó)代表大會(huì)論文摘要集（第二部分）[C];2002年

3 呂海燕;賈建平;;APP啟動(dòng)子多態(tài)性增加阿爾茨海默病的易感性[A];第九次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

4 楊紅旗;陳生弟;巴茂文;任汝靜;張宇紅;譚玉燕;;Deprenyl對(duì)淀粉樣前體蛋白代謝的影響[A];第九次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

5 李昱;周偉輝;童貽剛;賀桂瓊;宋偉宏;;阿爾茨海默病中可誘導(dǎo)BACE1穩(wěn)定表達(dá)的神經(jīng)細(xì)胞系的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第九屆全國(guó)病理大會(huì)論文匯編[C];2007年

6 李衛(wèi)平;張文;李維祖;孫翔翔;周素素;徐小群;;黃芪總苷對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)小鼠記憶障礙的保護(hù)作用及其機(jī)制[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)刊[C];2009年

7 張華;晏寧;代政偉;孟濤;晏勇;;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1對(duì)PC12細(xì)胞β-淀粉樣前體蛋白裂解酶1的影響[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

8 韓恩吉;齊宏順;夏文;;海風(fēng)藤抑制β-APP基因表達(dá)有效成分及其機(jī)制研究[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

9 崔衛(wèi)剛;張應(yīng)花;孫燕;徐沖沖;王飛;彭裕文;李瑞錫;;激活肝X受體可通過(guò)減少膜膽固醇削弱β-分泌酶活性而減少AD鼠老年斑的沉積[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

10 陳麗敏;林楠;張靜;朱元貴;陳曉春;;人參皂苷Rg1通過(guò)NFκB調(diào)節(jié)β-分泌酶的活性減少APP酶切產(chǎn)物β-淀粉樣蛋白的生成[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 麥迪信;淀粉樣前體蛋白令神經(jīng)元“挨餓”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

2 劉海英;瑞典發(fā)現(xiàn)阿爾茨海默癥生物新標(biāo)志[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

3 ;膽堿能加強(qiáng)劑治療AD研究進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

4 徐池;NSAID降低AD發(fā)病率的機(jī)制[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張鵬;淀粉樣前體蛋白可溶性α片段與睡眠的相關(guān)性及潛在的認(rèn)知保護(hù)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 王艷艷;糖皮質(zhì)激素對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞β淀粉樣蛋白代謝的影響及其在Alzheimer's病發(fā)病中的作用與機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

3 徐廣偉;淀粉樣前體蛋白（APP）的表達(dá)與制備以及非修飾性APP/C99細(xì)胞模型的建立與應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2008年

4 陳麗敏;人參皂苷Rg1通過(guò)PPARγ和NFκB調(diào)節(jié)β-分泌酶的活性減少APP酶切產(chǎn)物β-淀粉樣蛋白的生成[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

5 夏文;海風(fēng)藤對(duì)阿爾茨海默病的治療作用及其作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

6 林軍;銀杏葉提取物（EGb）對(duì)糖尿病大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙保護(hù)作用的機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

7 何苗;EGCG對(duì)阿爾茨海默病小鼠的保護(hù)作用及其可能機(jī)制[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

8 陳筱山;外源性硫化氫對(duì)原代神經(jīng)元APP代謝BACE-1/PS1的影響及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

9 李曉;阿爾茨海默病5xFAD轉(zhuǎn)基因小鼠眼部病變研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

10 王嘉鵬;阿爾茨海默病實(shí)驗(yàn)免疫治療與致病機(jī)理的研究[D];吉林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王靜;TDP-43與β-淀粉樣前體蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相互作用并誘導(dǎo)P53依賴(lài)的細(xì)胞凋亡[D];蘇州大學(xué);2014年

2 管姝軼;大鼠反復(fù)前腦缺血再灌注后β淀粉樣前體蛋白表達(dá)變化的研究[D];吉林大學(xué);2005年

3 劉靖;穩(wěn)定表達(dá)人淀粉樣前體蛋白HEK293細(xì)胞系的建立及鑒定[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

4 胡薇;小鼠慢性酒精中毒腦神經(jīng)細(xì)胞APP和Aβ蛋白的表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

5 楊世高;治療阿茲海默病多肽藥物的篩選及其功能研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 郝峻巍;高膽固醇誘發(fā)去卵巢兔AD樣病理變化及雌激素的保護(hù)作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2005年

7 鐘華;開(kāi)心散對(duì)Aβ_（25-35）誘導(dǎo)Alzheimer病大鼠模型的作用研究[D];山東大學(xué);2005年

8 高品;觀察海馬星形細(xì)胞興奮毒性損害過(guò)程中APP、PS1的表達(dá)變化及GBE干預(yù)對(duì)其影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 馬玉奎;復(fù)方加蘭他敏改善阿爾茨海默病的藥效學(xué)及機(jī)制研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2004年

10 滕藤;抗體及天然藥物對(duì)靶細(xì)胞在胞外Abeta42基質(zhì)上粘附的影響[D];吉林大學(xué);2012年

本文編號(hào)：1396567