本文關(guān)鍵詞：雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶及海馬突觸可塑性的影響

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【摘要】：阿爾茨海默癥(Alzheimer disease,AD)是常見的腦部神經(jīng)退行性疾病。AD臨床癥狀主要表現(xiàn)為記憶喪失、認(rèn)知障礙、行為異常等,其中海馬區(qū)是AD病程中腦內(nèi)最先受損的區(qū)域。主要病理學(xué)改變是存在廣泛的老年斑和神經(jīng)原纖維纏結(jié)。淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)的異常剪接產(chǎn)生了腦內(nèi)可溶性β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ),而Aβ的沉積作用引起老年斑的形成,Aβ的毒性作用被認(rèn)為與AD的發(fā)生發(fā)展直接相關(guān)。Tau蛋白(microtubule-associated protein)高度磷酸化造成神經(jīng)纖維退化及功能喪失,形成雙股螺旋神經(jīng)絲和神經(jīng)原纖維纏結(jié)。2009年AD國際聯(lián)合會(huì)報(bào)告顯示,全球AD患者已達(dá)3500萬。我國AD患者已超過600萬。目前AD的確切病因和發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚,治療尚未取得突破性進(jìn)展。在AD的治療策略中,性激素在腦內(nèi)的分布及其與AD的作用得到了重視。研究表明雄激素能夠降低腦的神經(jīng)退行性疾病,其保護(hù)機(jī)制包括:⑴降低Aβ的沉積;⑵通過雄激素的經(jīng)典與快速非經(jīng)典通路,保護(hù)神經(jīng)元,抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。雄激素的下游代謝產(chǎn)物,和特異性受體結(jié)合,進(jìn)而形成代謝物-受體復(fù)合物,通過一定途徑入胞,進(jìn)入細(xì)胞核后和核內(nèi)的相應(yīng)受體接合后,再結(jié)合染色質(zhì),并進(jìn)一步影響RNA及DNA的合成。相關(guān)的報(bào)道在與年齡相關(guān)雄激素丟失的研究中指出,腦內(nèi)Aβ的水平增加,與AD發(fā)病密切相關(guān)。目前雄激素調(diào)節(jié)Aβ的機(jī)制還不清楚,但可能涉及三個(gè)方面發(fā)揮作用,即雄激素受體(androgen receptor,AR)依賴的途徑;睪酮芳香化轉(zhuǎn)換為雌二醇,再通過雌激素途徑發(fā)揮作用;作用于下丘腦-垂體-性腺軸。因此探討雄激素代謝產(chǎn)物雙氫睪酮,排除雌激素通路的影響,更有利于雄激素作用機(jī)理的研究。AR在腦內(nèi)主要負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)記憶的功能區(qū)高表達(dá),海馬對(duì)空間記憶的獲得發(fā)揮至關(guān)重要的作用。有文獻(xiàn)報(bào)道,體內(nèi)雄激素水平與認(rèn)知功能密切相關(guān),但雄激素如何調(diào)控認(rèn)知功能尚不十分清楚。SAMP8小鼠(senescence accelerated mouse,SAM)是一種衰老模型鼠,遺傳背景均一,具有穩(wěn)定的老化病態(tài)特征。SAM小鼠又可分為SAMP和SAMR兩個(gè)品系。其中,SAMP系為快速老化系,SAMP8小鼠則是其中一個(gè)亞系,小鼠隨著年齡的增長而發(fā)生快速老化和學(xué)習(xí)記憶力減退、認(rèn)知功能障礙并與AD患者出現(xiàn)類似的腦部病理改變,因此SAMP8小鼠被認(rèn)為是研究AD較理想的自然發(fā)病模型。SAMR系為具有抗快速老化的特征,此品系小鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)、平均生存期限均與正常動(dòng)物相近,常作為SAMP系的同源正常對(duì)照組。目前的研究認(rèn)為,SAMP8小鼠在生長期存在著向AD轉(zhuǎn)變的過渡狀態(tài),具有類似人類輕度認(rèn)知功能障礙(mild cognitive impairment,MCI)的特征性變化。MCI和AD是同一疾病在不同階段的不同表現(xiàn)。課題組以往的研究發(fā)現(xiàn),SAMP8小鼠進(jìn)入成熟期后,從5月齡開始出現(xiàn)衰老征象,空間學(xué)習(xí)記憶的獲得能力和儲(chǔ)存能力開始下降,相關(guān)腦區(qū)也出現(xiàn)病理改變,提示該鼠步入老化期,故我們稱之為認(rèn)知障礙早期。我們之前的研究也證實(shí)了,SAMP8小鼠在7月齡發(fā)展為AD樣腦部病變及癥狀,出現(xiàn)明顯的老化體征,學(xué)習(xí)記憶能力顯著下降,進(jìn)入了快速衰老期。因此我們認(rèn)定SAMP8小鼠在7月齡進(jìn)入認(rèn)知功能障礙期,即癡呆期。性激素與突觸可塑性(synaptic plasticity)的調(diào)節(jié)具有相關(guān)性。針對(duì)學(xué)習(xí)記憶相關(guān)腦區(qū)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),高水平的雌激素可誘導(dǎo)產(chǎn)生新的突觸和樹突。雄激素對(duì)突觸可塑性調(diào)節(jié)的作用和機(jī)制近些年也開始得到重視。樹突棘的形態(tài)和功能是突觸發(fā)育的條件,是大腦進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶的重要機(jī)制。有文獻(xiàn)報(bào)道,AD的認(rèn)知障礙早期,一方面突觸的數(shù)量減少,另一方面特定的和記憶相關(guān)突觸退化。有證據(jù)表明突觸退化最初發(fā)生在樹突棘。大腦發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白(developmentally regulated brain protein,Drebrin)是神經(jīng)元特異的樹突棘肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白�？赏ㄟ^改變細(xì)胞骨架進(jìn)而影響突觸和樹突棘的形態(tài)和功能,會(huì)隨著突觸傳遞功能的增強(qiáng)而增加,是突觸形態(tài)和可塑性變化的重要指標(biāo)。AD動(dòng)物模型顯示,Aβ的積累破壞了突觸后的肌動(dòng)蛋白的調(diào)節(jié),突觸后Drebrin表達(dá)降低,并與認(rèn)知功能損害的嚴(yán)重程度相關(guān)。在調(diào)節(jié)神經(jīng)突起外向生長中起到重要作用。突觸后膜致密物質(zhì)(post synaptic density-95,PSD-95)是突觸后的主要成分,與多種突觸功能相關(guān),涉及離子通道、突觸活性以及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等[12-15]。PSD-95是突觸后膜參與突觸功能改變的一個(gè)很重要的支架蛋白,會(huì)隨著突觸傳遞功能的增強(qiáng)而增加。c AMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(c AMP response element-binding protein,CREB)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子,其生理功能在多個(gè)系統(tǒng)中均發(fā)揮作用,而其在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著不可或缺的作用。CREB在神經(jīng)系統(tǒng)中通常作為許多信號(hào)通路執(zhí)行的交匯點(diǎn),其參與了神經(jīng)干細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期調(diào)控、神經(jīng)元誘導(dǎo)分化、學(xué)習(xí)記憶等正常生理活動(dòng)。除此之外,CREB信號(hào)傳導(dǎo)通路還參與調(diào)控神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生和發(fā)展。研究表明,細(xì)胞內(nèi)外以及上下游信號(hào)分子可通過影響CREB磷酸化來激活相關(guān)信號(hào)分子的靶基因轉(zhuǎn)錄。我們在以往的研究中探討了CREB作為中間或終末調(diào)節(jié)信號(hào)分子在神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病阿爾茲海默病(Alzheimer's disease,AD)的發(fā)生發(fā)展,證實(shí)了Aβ的上調(diào)引起CREB蛋白表達(dá)的下降,睪酮下調(diào)Aβ的沉積同時(shí)CREB蛋白表達(dá)增加。這使得與CREB信號(hào)通路相關(guān)的分子成為較受關(guān)注的神經(jīng)系統(tǒng)疾病干預(yù)的藥物靶點(diǎn)。細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases1/2,ERK1/2)與基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)和細(xì)胞的增殖與分化密切相關(guān)。有報(bào)道MAPK-ERK通路與雄激素的腦保護(hù)作用相關(guān),而MAPK中的JNK和P38在小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬Aβ的炎癥應(yīng)答反應(yīng)中起到主要作用。同時(shí)也有文獻(xiàn)報(bào)道ERK的過度激活可以增加Aβ的沉積,在過氧化物損傷的情況下抑制ERK及膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)可降低Aβ的聚集,阻止AD的進(jìn)展。近年來有學(xué)者在腫瘤的研究中提出ERK-CREB信號(hào)傳導(dǎo)回路的存在,但在非腫瘤和神經(jīng)系統(tǒng)中的報(bào)道較少。我們認(rèn)為在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,雄激素與ERK存在某種聯(lián)系。探討雙氫睪酮調(diào)節(jié)ERK與CREB蛋白表達(dá)在SAMP8雄性小鼠海馬的保護(hù)作用,有助于理解雄激素的腦保護(hù)機(jī)制和原理。我們以往的研究發(fā)現(xiàn),睪酮和雙氫睪酮能夠改善去勢小鼠和大鼠的空間記憶能力。有關(guān)學(xué)者認(rèn)為AD的治療可采取早期發(fā)現(xiàn)、早期干預(yù)、早期治療,即在Aβ積聚甚至更早階段給予干預(yù)措施。因此本研究欲進(jìn)一步探討在AD所致MCI期雄性小鼠,觀察去勢對(duì)空間記憶能力的影響,以及雙氫睪酮對(duì)認(rèn)知障礙早期SAMP8雄性小鼠空間記憶能力的影響。綜上,本研究擬觀察在AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠去勢對(duì)小鼠腦的作用,以及去勢小鼠給予生理劑量雙氫睪酮后,雙氫睪酮對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶能力、海馬突觸可塑性的影響。通過Morris水迷宮檢測不同分組之間動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶能力的差異,同時(shí)觀察海馬、額葉前皮層ERK1/2蛋白及下游CREB蛋白的表達(dá)情況,以期探討雄激素對(duì)AD可能存在的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。第一部分雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響目的:通過水迷宮這一經(jīng)典行為學(xué)實(shí)驗(yàn),探討去勢對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響,并觀察早期給予雙氫睪酮是否能夠改善去勢組小鼠空間學(xué)習(xí)記憶。實(shí)驗(yàn)分組:5月齡雄性SAMP8小鼠24只,分為3組(每組8只),分別為假手術(shù)溶劑對(duì)照組(sham gonadally-intact and Vehicle group,簡稱P8 group)、去勢組(Castrated group)、去勢后雙氫睪酮給藥組(DHT Castrated group,DHT group)。SAMR1小鼠8只作為同源正常對(duì)照組(簡稱R1 group)。去勢組小鼠進(jìn)行雙側(cè)睪丸切除術(shù);P8組、R1組動(dòng)物給予與相同容積溶劑注射及與去勢組相同的手術(shù)操作但不去除睪丸;DHT組小鼠同時(shí)雙側(cè)睪丸切除術(shù)與雙氫睪酮注射。DHT組分別于去勢手術(shù)24h后,腹腔內(nèi)注射醫(yī)用玉米油溶解的雙氫睪酮,注射生理劑量1 mg/(kg·day),每日上午一次;除DHT組外其余各組均于腹腔內(nèi)注射同等劑量醫(yī)用玉米油,每日上午一次,各組均共注射60d。方法:應(yīng)用水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn),檢測各組雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。水迷宮測試:定位航行實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5天,每天訓(xùn)練4次。記錄大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期。第6天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn),記錄動(dòng)物120s內(nèi)穿越平臺(tái)區(qū)的次數(shù)及在平臺(tái)所在象限停留的時(shí)間等指標(biāo)。結(jié)果： 1定位航行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn):在實(shí)驗(yàn)的5天內(nèi),4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的潛伏期均可見到不同程度的縮短。每日組間數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn):在實(shí)驗(yàn)第1~2天,4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間差別不大,組間ANOVA分析各組潛伏期無差別。自實(shí)驗(yàn)第3日起,與去勢組相比,DHT組、P8組和R1組逃避潛伏期均有不同程度地縮短,R1組與去勢組、DHT組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)實(shí)驗(yàn)第4日數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),R1組與另外三組相比,潛伏期進(jìn)一步縮短,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);另外組間分析還發(fā)現(xiàn),P8組與去勢組相比潛伏期顯著縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)實(shí)驗(yàn)第5日數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),R1組與另外三組相比,潛伏期最短,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P8組與DHT組之間,潛伏期基本相當(dāng),差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但P8組、DHT組與去勢組相比,潛伏期顯著縮短,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2空間探索實(shí)驗(yàn)空間探索實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去勢組小鼠游泳軌跡多為圍繞水池邊緣做漫無目的環(huán)游。P8組、DHT組游泳軌跡一定程度上表現(xiàn)出趨向目標(biāo)象限的指向性,但游泳軌跡明顯雜亂。R1組運(yùn)動(dòng)軌跡則主要集中在目標(biāo)象限附近。對(duì)各組小鼠目標(biāo)象限時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn):R1組相比其余3組,目標(biāo)象限時(shí)間明顯延長,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DHT組、P8組相比去勢組,目標(biāo)象限時(shí)間明顯延長,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。P8組與DHT組相比,目標(biāo)象限時(shí)間稍顯延長,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義對(duì)各組小鼠跨越平臺(tái)次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn):R1組跨越平臺(tái)次數(shù)明顯多于其它各組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而DHT組、P8組較去勢組相比,跨越平臺(tái)次數(shù)明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。P8組與DHT組相比,跨越平臺(tái)次數(shù)稍多,但兩組之間相比差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1去勢加重了AD所致MCI期SAMP8小鼠空間學(xué)習(xí)記憶損害的趨勢。2對(duì)于AD所致MCI期SAMP8小鼠,雙氫睪酮可改善因去勢而加重的空間學(xué)習(xí)記憶損害。第二部分雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠海馬突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN、PSD-95、Drebrin表達(dá)的影響目的:觀察去勢加重AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶損害及雙氫睪酮的改善作用是否與海馬突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN、PSD-95、Drebrin表達(dá)有關(guān),進(jìn)而了解雄激素對(duì)MCI期SAMP8雄性小鼠海馬突觸可塑性的影響。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測海馬CA1區(qū)突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN、PSD-95、Drebrin的表達(dá)變化。RT-PCR的方法檢測Syn、Psd95、Drebrin基因的表達(dá)變化。Western blot方法檢測SYN、PSD-95、Drebrin蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分組:雄性SAMP8鼠15只,分為3組(每組5只),分別為假手術(shù)溶劑對(duì)照組(sham gonadally-intact and Vehicle group,簡稱P8 group)、去勢組(Castrated group)、去勢給藥組(DHT Castrated group,DHT group)、SAMR1小鼠5只作為同源正常對(duì)照組(簡稱R1 group)。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理方法同上。結(jié)果：1免疫組織化學(xué)方法觀察各實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬突觸可塑性相關(guān)蛋白的表達(dá)免疫組織化學(xué)方法顯示:SYN、PSD-95和Drebrin蛋白陽性產(chǎn)物主要分布在神經(jīng)元的胞膜,胞漿和突起上,P8組、與DHT組與去勢組相比突起著色密而粗大,細(xì)胞膜和胞漿免疫陽性物質(zhì)明顯增多。免疫組織化學(xué)方法檢測各組動(dòng)物海馬組織SYN結(jié)果顯示,P8組0.887±0.089、去勢組0.553±0.034、DHT組0.843±0.107、R1組1.076±0.086。檢測各組動(dòng)物海馬組織PSD-95結(jié)果顯示,P8組0.983±0.116、去勢組0.636±0.046、DHT組0.935±0.073、R1組1.306±0.085。檢測各組動(dòng)物海馬組織Drebrin結(jié)果顯示,P8組0.673±0.058、去勢組0.489±0.044、DHT組0.729±0.075、R1組0.987±0.112。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),R1組SYN、PSD-95及Drebrin高于P8組、去勢組及DHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P0.01));P8組及DHT組SYN、PSD-95及Drebrin均高于去勢組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);P8組SYN、PSD-95及Drebrin稍高于DHT組,但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 RT-PCR方法觀察各實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬Syn、Psd95及Drebrin的m RNA表達(dá)RT-PCR的方法檢測Syn基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),P8組1.231±0.111、去勢組0.853±0.079、DHT組1.194±0.064、R1組1.426±0.110。RT-PCR的方法檢測Psd95基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),P8組0.894±0.052、去勢組0.421±0.058、DHT組0.861±0.027、R1組1.175±0.075。RT-PCR的方法檢測Drebrin基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),P8組0.443±0.041、去勢組0.329±0.019、DHT組0.422±0.018、R1組0.528±0.043。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),R1組Syn、Psd95及Drebrin高于P8組、去勢組及DHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);P8組及DHT組Syn、Psd95及Drebrin均高于去勢組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);P8組Syn、Psd95及Drebrin稍高于DHT組,但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3 Western blot方法檢測各實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬SYN、PSD-95、Drebrin蛋白的表達(dá)Western blot方法檢測SYN蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組0.891±0.126、去勢組0.453±0.074、DHT組0.947±0.117、R1組1.133±0.117。Western blot方法檢測PSD-95蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組0.205±0.025、去勢組0.109±0.007、DHT組0.193±0.018、R1組0.259±0.018。Western blot方法檢測Drebrin蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組0.613±0.092、去勢組0.189±0.045、DHT組0.632±0.058、R1組0.773±0.055。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),R1組SYN、PSD-95及Drebrin高于P8組、去勢組及DHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);P8組及DHT組SYN、PSD-95及Drebrin均高于去勢組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);P8組SYN、PSD-95及Drebrin稍高于DHT組,但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1去勢導(dǎo)致的雄激素水平降低減少了MCI期SAMP8雄性小鼠海馬中突觸可塑性相關(guān)蛋白PSD-95、SYN、Drebrin的表達(dá)。2補(bǔ)充生理劑量的雙氫睪酮可改善去勢引起的SAMP8小鼠海馬PSD-95、SYN、Drebrin的表達(dá)降低。第三部分雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠海馬ERK1、ERK2和CREB蛋白表達(dá)的影響目的:觀察去勢對(duì)于AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠海馬ERK1、ERK2與CREB表達(dá)的影響,及雙氫睪酮對(duì)于去勢SAMP8雄性小鼠ERK1/2與CREB表達(dá)的影響,探討雙氫睪酮能否在神經(jīng)系統(tǒng)ERK-CREB回路中的發(fā)揮作用。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測海馬ERK1、ERK2與CREB蛋白的表達(dá)。應(yīng)用RT-PCR的方法檢測海馬Erk1、Erk2及Creb基因的表達(dá)變化。Western blot方法檢測ERK1、ERK2與CREB蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分組:雄性SAMP8小鼠15只,隨機(jī)分為3組(每組5只),分別為假手術(shù)溶劑對(duì)照組(sham gonadally-intact and Vehicle group,簡稱P8group)、去勢組(Castrated group)、去勢給雙氫睪酮組(DHT Castrated group,DHT group),SAMR1小鼠5只作為同源正常對(duì)照組(簡稱R1 group)結(jié)果：1免疫組織化學(xué)方法檢測各實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬組織ERK1、ERK2與CREB的表達(dá)免疫組織化學(xué)顯示:ERK2、CREB蛋白陽性產(chǎn)物主要分布在神經(jīng)元的胞漿。P8組、DHT組與去勢組相比胞漿免疫陽性物質(zhì)明顯增多。但是ERK1表達(dá)不明顯,P8組、DHT組與去勢組相比差別不大。免疫組織化學(xué)方法檢測各組動(dòng)物海馬組織ERK1結(jié)果顯示,P8組0.240±0.046,去勢組0.214±0.025,DHT組0.226±0.035,R1組0.254±0.028。各組動(dòng)物海馬組織ERK2結(jié)果顯示,P8組0.415±0.032,去勢組0.255±0.018,DHT組0.388±0.025,R1組0.646±0.037。檢測各組動(dòng)物海馬組織CREB結(jié)果顯示,P8組1.472±0.153,去勢組1.219±0.094,DHT組1.535±0.132,R1組1.957±0.127。對(duì)免疫組織化學(xué)方法檢測的ERK1、ERK2和CREB數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)R1組檢測數(shù)據(jù)均高于P8組、去勢組及DHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P8組及DHT組ERK2和CREB結(jié)果均高于去勢組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2 RT-PCR的方法檢測各實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬組織Erk1、Erk2和Creb的表達(dá)RT-PCR的方法檢測Erk1基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),P8組0.508±0.031,去勢組0.475±0.014,DHT組0.491±0.052,R1組0.673±0.056。RT-PCR的方法檢測Erk2基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),P8組0.944±0.068,去勢組0.533±0.026,DHT組0.875±0.085,R1組1.173±0.109。RT-PCR的方法檢測Creb基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),P8組1.246±0.060,去勢組0.598±0.075,DHT組1.177±0.100,R1組1.598±0.064。對(duì)RT-PCR方法檢測的Erk1、Erk2和Creb數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)R1組檢測數(shù)據(jù)高于P8組、去勢組及DHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P8組及DHT組Erk2和Creb結(jié)果均高于去勢組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 Western blot方法檢測各實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬組織ERK1、ERK2和CREB的表達(dá)Western blot方法檢測ERK1蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組0.613±0.054,去勢組0.552±0.027,DHT組0.587±0.034,R1組0.750±0.051。Western blot方法檢測ERK2蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組0.835±0.043,去勢組0.561±0.033,DHT組0.805±0.065,R1組1.059±0.050。Western blot方法檢測CREB蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組1.113±0.152,去勢組0.589±0.075,DHT組1.032±0.118,R1組1.376±0.107。Western blot方法檢測p-CREB蛋白的表達(dá),與GAPDH相比分別為P8組0.567±0.027,去勢組0.353±0.026,DHT組0.540±0.037,R1組0.750±0.055。對(duì)Western blot方法檢測的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)R1組檢測數(shù)據(jù)高于P8組、去勢組及DHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P8組及DHT組ERK2和CREB結(jié)果均高于去勢組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1去勢導(dǎo)致的雄激素水平降低減少了AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠海馬中ERK2和CREB的表達(dá)。2補(bǔ)充生理劑量的雙氫睪酮可改善去勢引起的SAMP8小鼠海馬ERK2和CREB表達(dá)的降低。
【關(guān)鍵詞】：去勢 空間學(xué)習(xí)記憶 雙氫睪酮 輕度認(rèn)知功能障礙 SAMP8小鼠
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 中文摘要5-14
• 英文摘要14-26
• 英文縮寫26-28
• 引言28-32
• 第一部分 雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響前言32-53
• 前言32-34
• 材料與方法34-37
• 結(jié)果37-39
• 附圖39-43
• 附表43-44
• 討論44-48
• 小結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 第二部分 雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠海馬突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN、PSD-95、Drebrin表達(dá)的影響前言53-87
• 前言53-55
• 材料與方法55-67
• 結(jié)果67-69
• 附圖69-78
• 附表78-79
• 討論79-81
• 小結(jié)81-82
• 參考文獻(xiàn)82-87
• 第三部分 雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠海馬ERK1、 ERK2和CREB表達(dá)的影響前言87-120
• 前言87-89
• 材料與方法89-101
• 結(jié)果101-103
• 附圖103-112
• 附表112-113
• 討論113-115
• 小結(jié)115
• 參考文獻(xiàn)115-120
• 結(jié)論120-121
• 綜述一AD發(fā)病中突觸可塑性的變化及其雄激素的影響121-139
• 參考文獻(xiàn)132-139
• 綜述二 輕度認(rèn)知功能障礙研究現(xiàn)狀及雄激素對(duì)其的影響139-155
• 參考文獻(xiàn)148-155
• 致謝155-156
• 個(gè)人簡歷15

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宓志鈞,張瑞金,張美云,丁霆;血漿雙氫睪酮(經(jīng)紙層析)放射免疫分析的研究[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;1985年01期

2 史建棟，馬成禹;5α－雙氫睪酮B環(huán)衍生物的合成[J];中國藥物化學(xué)雜志;1996年02期

3 孔天翰,范天生,楚憲襄,韓雪飛,方智慧,任清雨;針刺“足三里”對(duì)大鼠血漿睪酮、雙氫睪酮含量的影響[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年01期

4 沈彬;杜怡峰;相媛媛;叢琳;;5α-雙氫睪酮對(duì)解聚素金屬蛋白酶9表達(dá)水平的影響[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2013年06期

5 應(yīng)俊,姚德鴻,張慶華;血清睪酮、游離睪酮、雙氫睪酮濃度與男性年齡關(guān)系的研究[J];中國男科學(xué)雜志;2000年01期

6 江洪濤;陳昭典;;前列腺組織雙氫睪酮結(jié)合容量與年齡的關(guān)系及意義[J];中國男科學(xué)雜志;2007年01期

7 鄭曉春,陳淑英,鄭松柏,楊儉英,甘潔民,金健華,江魚;中老年男性血清睪酮、游離睪酮、雙氫睪酮和性激素結(jié)合球蛋白含量的變化[J];中國男科學(xué)雜志;2003年04期

8 陳君;梁瓊麟;李琿;羅國安;王義明;;利用GC/MRM檢測去勢大鼠前列腺中睪酮、雙氫睪酮和脫氫表雄酮[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2008年11期

9 李鐘;莫曾南;楊小麗;龐友紅;黃逢雨;宣強(qiáng);;雙氫睪酮對(duì)人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3細(xì)胞生長影響的體外研究[J];臨床泌尿外科雜志;2007年09期

10 張志新;楊高潮;;性激素與下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 叢琳;杜怡峰;;5α-雙氫睪酮對(duì)解聚素金屬蛋白酶9表達(dá)水平的影響[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國神經(jīng)免疫大會(huì)2013論文匯編[C];2013年

2 崔慧先;李楠;李莎;康林;杜鵑;;雙氫睪酮對(duì)SAMP8小鼠海馬CA1區(qū)突觸結(jié)構(gòu)影響的研究[A];中國解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

3 湯元杰;孫穎浩;;5α-雙氫睪酮對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞鈣離子移動(dòng)和細(xì)胞生長的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

4 唐悅清;孫曉文;夏術(shù)階;;雙氫睪酮-蛋白水解靶向嵌合體對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞雄激素受體的降解作用[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉文山;藥物可輔助毛發(fā)再生[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 潘文森;雙氫睪酮對(duì)AD所致MCI期SAMP8雄性小鼠空間學(xué)習(xí)記憶及海馬突觸可塑性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 趙春節(jié);雙氫睪酮對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎成纖維細(xì)胞的成骨作用研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

2 李楠;雙氫睪酮對(duì)SAMP8小鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

3 許丹;AR、SRD5A2基因突變與46,XY性腺發(fā)育不良相關(guān)性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1116846