本文關(guān)鍵詞：慢性腦缺血對(duì)小鼠認(rèn)知功能及腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

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【摘要】：目的：研究慢性腦缺血對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，情緒和腦內(nèi)典型形態(tài)結(jié)構(gòu)特征的影響，并探討其作用相關(guān)機(jī)制以及與阿爾茨海默�。ˋlzheimer's Disease, AD）的關(guān)系，為AD的預(yù)防和治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法：C57小鼠，在3月齡時(shí)行改良雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)制作慢性腦缺血模型，假手術(shù)組為對(duì)照。甲苯胺藍(lán)心臟灌注檢測(cè)模型的有效性。于術(shù)后1、4、6個(gè)月行高架十字迷宮檢測(cè)小鼠情緒變化，Morris水迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力；電鏡觀察缺血后各組小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及血管的形態(tài)變化；免疫組化觀察小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元、神經(jīng)元凋亡、星形膠質(zhì)細(xì)胞、β-分泌酶1（β-siteAPP cleaving enzyme1，BACE1）、γ-分泌酶組件早老素-1（presenilin-1，PS-1）、單過(guò)性跨膜蛋白（Nicastrin，NCT）、前咽缺陷蛋白-1（Aph-1）和早老素增強(qiáng)子-2（Pen-2）以及老年斑的變化；免疫印跡檢測(cè)小鼠腦內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43（GAP43）、突觸后致密物質(zhì)-95（PSD95）、膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）以及β-分泌酶等的變化；免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)水通道蛋白4（AquaporinProtein-4，AQP4）和GFAP共表達(dá)情況；ELISA定量檢測(cè)小鼠腦內(nèi)Ａβ水平。 結(jié)果：1.甲苯胺藍(lán)灌注結(jié)果：甲苯胺藍(lán)灌注后模型組大腦呈蒼白色，假手術(shù)對(duì)照組呈深藍(lán)色。 2.行為學(xué)結(jié)果：1）高架十字迷宮結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，慢性腦缺血后，小鼠進(jìn)入開(kāi)放臂的次數(shù)和時(shí)間都明顯下降（P0.05）。2）Morris水迷宮結(jié)果顯示：在第一天平臺(tái)中，各組小鼠找到平臺(tái)的逃避潛伏期和游泳路徑無(wú)明顯差異（P0.05）。在隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)中，隨著游泳訓(xùn)練，假手術(shù)組和模型1個(gè)月組尋找平臺(tái)的時(shí)間和路程均下降。而模型4、6個(gè)月組無(wú)明顯改善。與假手術(shù)組相比，模型4個(gè)月組和6個(gè)月組找到平臺(tái)的逃避潛伏期和搜索路程均明顯增加（P0.01），而模型1個(gè)月組逃避潛伏期增加（P0.05），搜索路徑無(wú)顯著性差異（P0.05）。在探索實(shí)驗(yàn)中，缺血模型各組在60s內(nèi)穿過(guò)平臺(tái)的次數(shù)明顯低于假手術(shù)組（P0.01）。 3.形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果：1)免疫組化結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，缺血模型組皮質(zhì)(P0.01)和海馬內(nèi)的神經(jīng)元數(shù)量(P0.01)均明顯下降，且缺血時(shí)間越久，神經(jīng)元減少越明顯。神經(jīng)元標(biāo)記抗體MAP2和神經(jīng)元特異性微管蛋白β-III Tubulin結(jié)果顯示，假手術(shù)組中，海馬和皮質(zhì)的神經(jīng)元突起排列整齊，規(guī)則，突起較長(zhǎng)，而慢性腦缺血后，海馬和皮質(zhì)的神經(jīng)元突起出現(xiàn)斷裂，突起變短，排列紊亂，不規(guī)則，且染色加深。星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記物GFAP免疫組化結(jié)果顯示，缺血模型各組星形膠質(zhì)細(xì)胞激活，突起變長(zhǎng)，變粗，分支增多，胞體腫脹、肥大。有的星形膠質(zhì)細(xì)胞甚至重疊到一起，突起交叉，有類(lèi)似膠質(zhì)疤痕結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。從缺血4個(gè)月開(kāi)始皮質(zhì)和海馬等區(qū)域出現(xiàn)老年斑，而假手術(shù)組未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性斑塊。缺血時(shí)間越長(zhǎng)，斑塊體積越大，染色越深，結(jié)構(gòu)越致密。且在模型6個(gè)月組中，外側(cè)膝狀體腹側(cè)核出現(xiàn)Aβ胞內(nèi)沉積。與假手術(shù)組相比，缺血模型各組小鼠腦內(nèi)γ-分泌酶組件PS-1, NCT，APH-1免疫陽(yáng)性細(xì)胞的IOD值明顯增高，且各組出現(xiàn)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；而PEN-2免疫陽(yáng)性物主要表達(dá)在細(xì)胞膜上，與假手術(shù)組相比，缺血模型各組陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯變化（P0.05）。與假手術(shù)組相比，，BACE1免疫陽(yáng)性細(xì)胞的IOD值在缺血模型各組明顯增高，且在各組出現(xiàn)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。2）電鏡結(jié)果顯示：缺血模型各組小鼠腦內(nèi)的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的水腫，細(xì)胞核溶解，血管周?chē)灿心[脹。3）免疫熒光結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，在模型6個(gè)月組中，AQP4與GFAP共表達(dá)明顯增加（P0.01）。 4.免疫印跡結(jié)果：與假手術(shù)組相比，缺血模型組Bax(P0.01)，Caspase-3(P0.01)，GFAP （P0.05)和BACE1（P0.05)蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，而B(niǎo)cl-2(P0.01)和PSD95(P0.01)在腦缺血后表達(dá)明顯減弱，GAP43變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。 5.ELISA結(jié)果:與假手術(shù)組相比，模型各組Aβ40和Aβ42含量逐漸增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論：1.慢性腦缺血后，出現(xiàn)焦慮情緒。腦缺血1個(gè)月是小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力障礙初始階段，缺血時(shí)間越長(zhǎng)，學(xué)習(xí)記憶能力損害越明顯。 2．長(zhǎng)期腦血流量灌注不足可導(dǎo)致小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元進(jìn)行性丟失，可能是通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)元凋亡實(shí)現(xiàn)的。 3.慢性腦缺血1個(gè)月就出現(xiàn)神經(jīng)元正常形態(tài)結(jié)構(gòu)破壞，突起斷裂，PSD95明顯降低，影響突觸可塑性和突觸重建，這可能與小鼠最初輕度認(rèn)知功能損害有關(guān)。 4.慢性腦缺血可激活星形膠質(zhì)細(xì)胞，并上調(diào)GFAP和AQP4共表達(dá)，破壞血腦屏障。 5.慢性腦缺血后出現(xiàn)Aβ在細(xì)胞內(nèi)沉積，可能引起PSD95下調(diào)，破壞突觸可塑性和完整性。 6.慢性腦缺血可通過(guò)上調(diào)β-分泌酶和γ-分泌酶活性，促進(jìn)APP生成Aβ增多，引起Aβ沉積，加重認(rèn)知功能損害。
【關(guān)鍵詞】：慢性腦缺血 阿爾茨海默病 認(rèn)知功能障礙 β-淀粉樣蛋白
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R749.13
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-18
• 1 材料和方法18-28
• 2 結(jié)果28-35
• 3 討論35-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 附圖47-59
• 文獻(xiàn)綜述：慢性腦缺血與阿爾茨海默病59-75
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 致謝75-76
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文76-77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉廣義;張笛;杜秀民;徐龍強(qiáng);;大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后GAP-43及IGF-1促進(jìn)神經(jīng)元再生表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2007年04期

本文編號(hào)：1114500