本文關(guān)鍵詞：硫化氫對(duì)尿源性膿毒血癥急性腎損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制

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【摘要】：目的 建立尿源性膿毒血癥兔模型；觀察尿源性膿毒血癥腎組織內(nèi)源性H_2S生成及其H_2S胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的變化；應(yīng)用外源性硫化氫干預(yù)，探討外源性硫化氫在尿源性膿毒血癥急性腎損傷中的作用，了解H_2S對(duì)尿源性膿毒血癥腎組織NF-κB表達(dá)的影響，從而揭示H_2S在尿源性膿毒血癥腎損害中作用的可能機(jī)制。 方法 1、家兔左側(cè)輸尿管內(nèi)注入大腸桿菌（ATCC25922），并結(jié)扎左側(cè)輸尿管遠(yuǎn)端，模擬上尿路急性梗阻并感染所致膿毒血癥兔模型。 2、將30只健康雄性家兔隨機(jī)分成五組，每組6只。正常組（Control組）；假手術(shù)組（Sham組）；膿毒血癥組（sepsis組）；硫氫化鈉2.8umol/kg組（NaHS2.8umol/kg組）;硫氫化鈉8.4umol/kg組（NaHS8.4umol/kg組）。 3、每組動(dòng)物按時(shí)間點(diǎn)又分為術(shù)前、術(shù)后24h、術(shù)后48h、術(shù)后72h4個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)。分別于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀測(cè)肛溫(RT)、呼吸(RR)、心率(HR)； 4、術(shù)前、術(shù)后24、48、72小時(shí)采血行外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析(WBC、中性粒細(xì)胞、PLT)、腎功能(Cr、BUN）、血清C反應(yīng)蛋白測(cè)定； 5、術(shù)前、術(shù)后24h、術(shù)后48h、術(shù)后72h4個(gè)時(shí)間點(diǎn)采血ELISA法測(cè)定血清TNF-α、IL-10含量；術(shù)后72h抽血血培養(yǎng)，血清鱟試驗(yàn)檢測(cè)； 6、術(shù)后72h各組腎組織行HE染色，光學(xué)顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組腎組織的TNF-α、IL-10、NF-κB的蛋白表達(dá)。Tunel法檢測(cè)腎組織細(xì)胞凋亡情況。 7、術(shù)后72h取腎組織檢測(cè)CSE的活性；抽血測(cè)H_2S濃度。 結(jié)果 1.家兔的一般情況：實(shí)驗(yàn)家兔sham組與control組體溫，呼吸頻率、心率變化不大（P＞0.05）；sepsis組明顯高于control、sham組（P＜0.05），NaHS2.8umol/kg組、 NaHS8.4umol/kg組低于sepsis組（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg組低于sepsis組（P＜0.05）。 2.血液檢測(cè)指標(biāo)：各組術(shù)前血細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC、中性粒細(xì)胞、PLT）、CRP、Cr、Bun比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后血細(xì)胞計(jì)數(shù)WBC、中性粒細(xì)胞、PLT、CRP、Cr、Bun結(jié)果：實(shí)驗(yàn)家兔control組與sham組比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；sepsis組明顯高于control、sham組（P＜0.05），NaHS2.8umol/kg組、 NaHS8.4umol/kg組有下降趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且NaHS8.4umol/kg組低于NaHS2.8umol/kg組（P＜0.05）。 家兔血清TNF-α、IL-10含量結(jié)果：control、sham組家兔血清TNF-α，IL-10變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與control組比較，，sepsis組明顯升高（P＜0.05）；NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組與sepsis組比較，血清TNF-α明顯降低（P＜0.05），血清IL-10明顯升高（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg組與NaHS2.8umol/kg組比較P＜0.05。 術(shù)后72小時(shí)采血做血培養(yǎng)及鱟試驗(yàn)：sham組與control組比較P0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。sepsis組與control組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。鱟試驗(yàn)比血培養(yǎng)陽(yáng)性率高（P=0.009）。 3.病理形態(tài)學(xué)： 左腎肉眼觀：control組和sham組腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，sepsis組肉眼觀腎臟充血水腫，多發(fā)膿腫，腎盂腎盞擴(kuò)張積膿，粘膜充血、出血、水腫，髓質(zhì)可見黃色條紋狀病灶向皮質(zhì)伸展，腎周圍組織充血水腫，腎門淋巴結(jié)明顯腫大。HE染色光鏡：sepsis組腎盂、腎盞粘膜壞死、脫落大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球、腎小囊變形，腎小管管腔變大，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；電鏡：sepsis組腎小球足突細(xì)胞融合、消失，系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生，線粒體嵴排列紊亂，空泡形成。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組上述變化有所減輕。 4.免疫組織化學(xué)法測(cè)腎組織TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白：control組、sham組腎組織TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白呈微弱表達(dá)；TNF-α、NF-κB蛋白在sepsis組表達(dá)最強(qiáng)，NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組減弱； IL-10蛋白在NaHS2.8umol/kg組、 NaHS8.4umol/kg組表達(dá)增強(qiáng)，NaHS8.4umol/kg組高于NaHS2.8umol/kg組（P＜0.05）。 5.Tunel法檢測(cè)腎組織細(xì)胞凋亡：control、sham組腎組織散在少量的腎小管上皮細(xì)胞凋亡。sepsis組成片的細(xì)胞凋亡及凋亡小體形成，與control組比較P=0.001。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組細(xì)胞凋亡明顯減輕（P0.05），NaHS8.4umol/kg組較NaHS2.8umol/kg組減輕更明顯（P=0.02）。 6.術(shù)后72小時(shí)血漿硫化氫濃度及腎組織CSE檢測(cè)：sepsis組血漿H_2S含量及腎組織CSE的活性與control組比較明顯降低(P0.05)。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組血漿H_2S含量較sepsis組明顯升高(P0.05)。NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg組血漿H_2S含量與control組比較，P0.05。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組腎組織CSE活性與sepsis組比較，P0.05。Sepsis組NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg組腎組織CSE活性與control組比較，P＜0.05。Control組、sham組、sepsis組血漿H_2S含量與腎組織CSE活性呈正相關(guān)（R=0.979，p＜0.01），內(nèi)源性H_2S的生成與CSE活性正相關(guān)。 結(jié)論 1、將0.5ml/kg大腸桿菌（ATCC25922）注入左側(cè)輸尿管并結(jié)扎,72小時(shí)后能成功復(fù)制尿源性膿毒血癥模型。 2、尿源性膿毒血癥腎組織內(nèi)源性硫化氫生成減少,CSE活性降低；外源性硫化氫可減輕尿源性膿毒血癥腎損傷。 3、外源性硫化氫對(duì)尿源性膿毒血癥腎損傷保護(hù)作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制NF-κB的表達(dá)，下調(diào)TNF-α，上調(diào)IL-10及減輕腎臟細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 尿源性膿毒血癥 保護(hù)作用 機(jī)制 家兔
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 英文縮寫注解4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-27
• 結(jié)果27-51
• 討論51-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-71
• 綜述71-78
• 參考文獻(xiàn)75-78
• 碩士在讀研期間發(fā)表的論文78
• 讀研期間所獲獎(jiǎng)勵(lì)78
• 讀研期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議78-79
• 致謝79

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：700514