發(fā)布時間：2017-08-19 11:37

  本文關(guān)鍵詞：硫化氫對尿源性膿毒血癥急性腎損傷的保護作用及其機制

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【摘要】：目的 建立尿源性膿毒血癥兔模型；觀察尿源性膿毒血癥腎組織內(nèi)源性H_2S生成及其H_2S胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的變化；應(yīng)用外源性硫化氫干預(yù)，探討外源性硫化氫在尿源性膿毒血癥急性腎損傷中的作用，了解H_2S對尿源性膿毒血癥腎組織NF-κB表達的影響，從而揭示H_2S在尿源性膿毒血癥腎損害中作用的可能機制。 方法 1、家兔左側(cè)輸尿管內(nèi)注入大腸桿菌（ATCC25922），并結(jié)扎左側(cè)輸尿管遠(yuǎn)端，模擬上尿路急性梗阻并感染所致膿毒血癥兔模型。 2、將30只健康雄性家兔隨機分成五組，每組6只。正常組（Control組）；假手術(shù)組（Sham組）；膿毒血癥組（sepsis組）；硫氫化鈉2.8umol/kg組（NaHS2.8umol/kg組）;硫氫化鈉8.4umol/kg組（NaHS8.4umol/kg組）。 3、每組動物按時間點又分為術(shù)前、術(shù)后24h、術(shù)后48h、術(shù)后72h4個時間觀測點。分別于每個時間點觀測肛溫(RT)、呼吸(RR)、心率(HR)； 4、術(shù)前、術(shù)后24、48、72小時采血行外周血細(xì)胞計數(shù)分析(WBC、中性粒細(xì)胞、PLT)、腎功能(Cr、BUN）、血清C反應(yīng)蛋白測定； 5、術(shù)前、術(shù)后24h、術(shù)后48h、術(shù)后72h4個時間點采血ELISA法測定血清TNF-α、IL-10含量；術(shù)后72h抽血血培養(yǎng)，血清鱟試驗檢測； 6、術(shù)后72h各組腎組織行HE染色，光學(xué)顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。免疫組織化學(xué)法檢測各組腎組織的TNF-α、IL-10、NF-κB的蛋白表達。Tunel法檢測腎組織細(xì)胞凋亡情況。 7、術(shù)后72h取腎組織檢測CSE的活性；抽血測H_2S濃度。 結(jié)果 1.家兔的一般情況：實驗家兔sham組與control組體溫，呼吸頻率、心率變化不大（P＞0.05）；sepsis組明顯高于control、sham組（P＜0.05），NaHS2.8umol/kg組、 NaHS8.4umol/kg組低于sepsis組（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg組低于sepsis組（P＜0.05）。 2.血液檢測指標(biāo)：各組術(shù)前血細(xì)胞計數(shù)（WBC、中性粒細(xì)胞、PLT）、CRP、Cr、Bun比較，無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后血細(xì)胞計數(shù)WBC、中性粒細(xì)胞、PLT、CRP、Cr、Bun結(jié)果：實驗家兔control組與sham組比較，差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；sepsis組明顯高于control、sham組（P＜0.05），NaHS2.8umol/kg組、 NaHS8.4umol/kg組有下降趨勢，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且NaHS8.4umol/kg組低于NaHS2.8umol/kg組（P＜0.05）。 家兔血清TNF-α、IL-10含量結(jié)果：control、sham組家兔血清TNF-α，IL-10變化無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與control組比較，，sepsis組明顯升高（P＜0.05）；NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組與sepsis組比較，血清TNF-α明顯降低（P＜0.05），血清IL-10明顯升高（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg組與NaHS2.8umol/kg組比較P＜0.05。 術(shù)后72小時采血做血培養(yǎng)及鱟試驗：sham組與control組比較P0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。sepsis組與control組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。鱟試驗比血培養(yǎng)陽性率高（P=0.009）。 3.病理形態(tài)學(xué)： 左腎肉眼觀：control組和sham組腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，sepsis組肉眼觀腎臟充血水腫，多發(fā)膿腫，腎盂腎盞擴張積膿，粘膜充血、出血、水腫，髓質(zhì)可見黃色條紋狀病灶向皮質(zhì)伸展，腎周圍組織充血水腫，腎門淋巴結(jié)明顯腫大。HE染色光鏡：sepsis組腎盂、腎盞粘膜壞死、脫落大量中性粒細(xì)胞浸潤，腎小球、腎小囊變形，腎小管管腔變大，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤；電鏡：sepsis組腎小球足突細(xì)胞融合、消失，系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生，線粒體嵴排列紊亂，空泡形成。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組上述變化有所減輕。 4.免疫組織化學(xué)法測腎組織TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白：control組、sham組腎組織TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白呈微弱表達；TNF-α、NF-κB蛋白在sepsis組表達最強，NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組減弱； IL-10蛋白在NaHS2.8umol/kg組、 NaHS8.4umol/kg組表達增強，NaHS8.4umol/kg組高于NaHS2.8umol/kg組（P＜0.05）。 5.Tunel法檢測腎組織細(xì)胞凋亡：control、sham組腎組織散在少量的腎小管上皮細(xì)胞凋亡。sepsis組成片的細(xì)胞凋亡及凋亡小體形成，與control組比較P=0.001。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組細(xì)胞凋亡明顯減輕（P0.05），NaHS8.4umol/kg組較NaHS2.8umol/kg組減輕更明顯（P=0.02）。 6.術(shù)后72小時血漿硫化氫濃度及腎組織CSE檢測：sepsis組血漿H_2S含量及腎組織CSE的活性與control組比較明顯降低(P0.05)。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組血漿H_2S含量較sepsis組明顯升高(P0.05)。NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg組血漿H_2S含量與control組比較，P0.05。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組腎組織CSE活性與sepsis組比較，P0.05。Sepsis組NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg組腎組織CSE活性與control組比較，P＜0.05。Control組、sham組、sepsis組血漿H_2S含量與腎組織CSE活性呈正相關(guān)（R=0.979，p＜0.01），內(nèi)源性H_2S的生成與CSE活性正相關(guān)。 結(jié)論 1、將0.5ml/kg大腸桿菌（ATCC25922）注入左側(cè)輸尿管并結(jié)扎,72小時后能成功復(fù)制尿源性膿毒血癥模型。 2、尿源性膿毒血癥腎組織內(nèi)源性硫化氫生成減少,CSE活性降低；外源性硫化氫可減輕尿源性膿毒血癥腎損傷。 3、外源性硫化氫對尿源性膿毒血癥腎損傷保護作用機制可能是通過抑制NF-κB的表達，下調(diào)TNF-α，上調(diào)IL-10及減輕腎臟細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 尿源性膿毒血癥 保護作用 機制 家兔
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 英文縮寫注解4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-27
• 結(jié)果27-51
• 討論51-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻60-71
• 綜述71-78
• 參考文獻75-78
• 碩士在讀研期間發(fā)表的論文78
• 讀研期間所獲獎勵78
• 讀研期間參加的學(xué)術(shù)會議78-79
• 致謝79

【參考文獻】

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本文編號：700514