本文關(guān)鍵詞：肝損傷大鼠血清對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響

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【摘要】：目的 尋找分離、擴(kuò)增、鑒定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)的方法,探討肝損傷大鼠血清對(duì)]hUCMSCs的肝向誘導(dǎo)分化作用,為臨床上利用hUCMSCs治療終末期肝病患者提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1.采用酶消化法分離培養(yǎng)hUCMSCs,在顯微鏡下觀察提取的臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記CD73、CD105及造血干細(xì)胞標(biāo)記CD3、CD45的表達(dá)。 3.使用成脂誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)分化23天后用油紅O染色,成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)分化21天后用茜素紅染色。 4.建立急性肝損傷大鼠模型：模型組腹腔注射四氯化碳-大豆油溶液,對(duì)照組腹腔注射等劑量的大豆油,48小時(shí)后腹主動(dòng)脈取血,檢測(cè)大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST),取大鼠肝組織進(jìn)行HE染色,顯微鏡下觀察這兩組大鼠肝臟病理學(xué)變化。 5.分別將肝損傷大鼠血清和胎牛血清用于培養(yǎng)hUCMSCs,分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組：20%模型組大鼠血清配成的培養(yǎng)基培養(yǎng)hUCMSCs,對(duì)照組：20%胎牛血清配成的培養(yǎng)基培養(yǎng)hUCMSCs。觀察誘導(dǎo)前、實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組培養(yǎng)后hUCMSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,檢測(cè)培養(yǎng)液上清AFP、ALB值變化。 結(jié)果 1.倒置顯微鏡下可見原代hUCMSCs貼壁生長(zhǎng),呈短梭形,6-7天后生長(zhǎng)速度加快,細(xì)胞呈梭形,表現(xiàn)為編織狀或旋渦狀生長(zhǎng)。 2.經(jīng)流式鑒定發(fā)現(xiàn)hUCMSCs表達(dá)CD73、CD105等間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記,不表達(dá)CD34、CD45等造血細(xì)胞標(biāo)記。 3.P3代hUCMSCs成脂定向誘導(dǎo)23天后,未加成脂誘導(dǎo)劑的對(duì)照組細(xì)胞油紅。染色陰性,加入成脂誘導(dǎo)劑的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞油紅O染色強(qiáng)陽(yáng)性,大部分細(xì)胞中可見紅色的脂肪空泡。P3代hUCMSCs成骨定向誘導(dǎo)21天后,未加成骨誘導(dǎo)劑的對(duì)照組茜素紅染色陰性,加入成骨誘導(dǎo)劑的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞茜素紅染色陽(yáng)性,可見細(xì)胞間有黑色顆粒沉積,顆粒大小不等,形態(tài)不一,提示有黑色礦物質(zhì)沉積。 4.四氯化碳模型組大鼠血清與對(duì)照組相比,ALT、AST升高明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。模型組大鼠肝組織光鏡下可見肝竇結(jié)構(gòu)消失,肝細(xì)胞脂肪變性、灶狀壞死,細(xì)胞核固縮、碎裂或溶解,肝細(xì)胞間及匯管區(qū)可見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組光鏡下見肝組織結(jié)構(gòu)清晰,無細(xì)胞水腫、變性及壞死,無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 5.肝損傷大鼠血清培養(yǎng)hUCMSCs第1天細(xì)胞形態(tài)變化不大,呈梭形,仍呈編織狀或旋渦狀生長(zhǎng)。第2天細(xì)胞呈短梭形,第3天細(xì)胞呈類圓形,第4天呈圓形,并有極少量細(xì)胞漂浮。對(duì)照組細(xì)胞呈長(zhǎng)纖維狀。肝損傷大鼠血清培養(yǎng)hUCMSCs四天后檢測(cè)上清液ALB發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組ALB較誘導(dǎo)前和對(duì)照組均有升高趨勢(shì)(P0.001),AFP無明顯變化。 結(jié)論 1.可從臍帶組織中成功提取間充質(zhì)干細(xì)胞。 2.提取的干細(xì)胞能貼壁生長(zhǎng),可表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記CD73、 CD105,不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)記CD34、CD45,具有向脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞分化的潛能。 3.10%四氯化碳-大豆油溶液腹腔注射可導(dǎo)致急性肝損傷,模型存活率高。 4.肝損傷大鼠血清可使臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 肝損傷 肝樣細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 目錄11-12
• ~.略詞12-13
• 第一部分 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、提取及鑒定13-27
• 前言13-14
• 材料和方法14-18
• 結(jié)果18-22
• 結(jié)論22
• 討論22-27
• 第二部分 肝損傷大鼠血清對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響27-38
• 前言27-29
• 材料及方法29-31
• 結(jié)果31-35
• 結(jié)論35
• 討論35-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 鄭學(xué)峰;劉霞;;hUCMSCs腹腔移植治療大鼠急性肝損傷后的病理變化[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2012年04期

2 任紅英;趙欽軍;劉擁軍;盧士紅;李妍涵;韓忠朝;;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的研究[J];山東醫(yī)藥;2008年30期

3 Hosny Salama;Abdel-Rahman N Zekri;Abeer A Bahnassy;Eman Medhat;Hanan A Halim;Ola S Ahmed;Ghada Mohamed;Sheren A Al Alim;Ghada M Sherif;;Autologous CD34~+ and CD133~+ stem cells transplantation in patients with end stage liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2010年42期

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本文編號(hào)：598352