本文關(guān)鍵詞：肝損傷大鼠血清對臍帶間充質(zhì)干細胞的影響

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【摘要】：目的 尋找分離、擴增、鑒定臍帶間充質(zhì)干細胞(hUCMSCs)的方法,探討肝損傷大鼠血清對]hUCMSCs的肝向誘導分化作用,為臨床上利用hUCMSCs治療終末期肝病患者提供實驗依據(jù)。 方法 1.采用酶消化法分離培養(yǎng)hUCMSCs,在顯微鏡下觀察提取的臍帶源間充質(zhì)干細胞的形態(tài)學改變。 2.流式細胞儀檢測間充質(zhì)干細胞標記CD73、CD105及造血干細胞標記CD3、CD45的表達。 3.使用成脂誘導劑誘導分化23天后用油紅O染色,成骨誘導劑誘導分化21天后用茜素紅染色。 4.建立急性肝損傷大鼠模型：模型組腹腔注射四氯化碳-大豆油溶液,對照組腹腔注射等劑量的大豆油,48小時后腹主動脈取血,檢測大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST),取大鼠肝組織進行HE染色,顯微鏡下觀察這兩組大鼠肝臟病理學變化。 5.分別將肝損傷大鼠血清和胎牛血清用于培養(yǎng)hUCMSCs,分為實驗組和對照組。實驗組：20%模型組大鼠血清配成的培養(yǎng)基培養(yǎng)hUCMSCs,對照組：20%胎牛血清配成的培養(yǎng)基培養(yǎng)hUCMSCs。觀察誘導前、實驗組及對照組培養(yǎng)后hUCMSCs細胞形態(tài)學改變,檢測培養(yǎng)液上清AFP、ALB值變化。 結(jié)果 1.倒置顯微鏡下可見原代hUCMSCs貼壁生長,呈短梭形,6-7天后生長速度加快,細胞呈梭形,表現(xiàn)為編織狀或旋渦狀生長。 2.經(jīng)流式鑒定發(fā)現(xiàn)hUCMSCs表達CD73、CD105等間充質(zhì)干細胞標記,不表達CD34、CD45等造血細胞標記。 3.P3代hUCMSCs成脂定向誘導23天后,未加成脂誘導劑的對照組細胞油紅。染色陰性,加入成脂誘導劑的實驗組細胞油紅O染色強陽性,大部分細胞中可見紅色的脂肪空泡。P3代hUCMSCs成骨定向誘導21天后,未加成骨誘導劑的對照組茜素紅染色陰性,加入成骨誘導劑的實驗組細胞茜素紅染色陽性,可見細胞間有黑色顆粒沉積,顆粒大小不等,形態(tài)不一,提示有黑色礦物質(zhì)沉積。 4.四氯化碳模型組大鼠血清與對照組相比,ALT、AST升高明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。模型組大鼠肝組織光鏡下可見肝竇結(jié)構(gòu)消失,肝細胞脂肪變性、灶狀壞死,細胞核固縮、碎裂或溶解,肝細胞間及匯管區(qū)可見少量炎性細胞浸潤。對照組光鏡下見肝組織結(jié)構(gòu)清晰,無細胞水腫、變性及壞死,無炎性細胞浸潤。 5.肝損傷大鼠血清培養(yǎng)hUCMSCs第1天細胞形態(tài)變化不大,呈梭形,仍呈編織狀或旋渦狀生長。第2天細胞呈短梭形,第3天細胞呈類圓形,第4天呈圓形,并有極少量細胞漂浮。對照組細胞呈長纖維狀。肝損傷大鼠血清培養(yǎng)hUCMSCs四天后檢測上清液ALB發(fā)現(xiàn)實驗組ALB較誘導前和對照組均有升高趨勢(P0.001),AFP無明顯變化。 結(jié)論 1.可從臍帶組織中成功提取間充質(zhì)干細胞。 2.提取的干細胞能貼壁生長,可表達間充質(zhì)干細胞標記CD73、 CD105,不表達造血干細胞標記CD34、CD45,具有向脂肪細胞、骨細胞分化的潛能。 3.10%四氯化碳-大豆油溶液腹腔注射可導致急性肝損傷,模型存活率高。 4.肝損傷大鼠血清可使臍帶間充質(zhì)干細胞向肝樣細胞分化。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細胞 肝損傷 肝樣細胞
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 目錄11-12
• ~.略詞12-13
• 第一部分 臍帶間充質(zhì)干細胞的分離、提取及鑒定13-27
• 前言13-14
• 材料和方法14-18
• 結(jié)果18-22
• 結(jié)論22
• 討論22-27
• 第二部分 肝損傷大鼠血清對臍帶間充質(zhì)干細胞的影響27-38
• 前言27-29
• 材料及方法29-31
• 結(jié)果31-35
• 結(jié)論35
• 討論35-38
• 參考文獻38-41
• 綜述41-55
• 參考文獻50-55
• 在讀期間發(fā)表的學術(shù)論文55-56
• 致謝56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：598352