本文關(guān)鍵詞：重組FN C端肝素結(jié)合域多肽對CLP誘導(dǎo)的膿毒血癥小鼠巨噬細胞功能的影響

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【摘要】：目的:利用小鼠盲腸結(jié)扎穿刺(CLP)誘導(dǎo)的膿毒血癥動物模型,研究重組FN C端肝素結(jié)合域多肽(rh FNHC-36)對膿毒血癥小鼠的保護作用,從單核巨噬細胞功能的角度研究其在膿毒血癥中起保護作用的機制。方法:1.建立盲腸結(jié)扎穿刺膿毒血癥模型小鼠腹白線處切開,在盲腸中點結(jié)扎,穿刺針在結(jié)扎處與盲腸遠端中點穿刺,穿孔處擠出一滴糞便后將盲腸放回腹腔,分兩層縫合切口。術(shù)后通過鑒定小鼠腹腔及血液中細菌的種類驗證模型是否構(gòu)建成功。2.rh FNHC-36對膿毒血癥小鼠的保護作用實驗小鼠分為正常組(Normal)、偽手術(shù)組(Sham)、盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)、rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36),治療組于盲腸結(jié)扎穿刺術(shù)前半小時及術(shù)后1小時、2小時分別尾靜脈注射40 mg/kg的rh FNHC-36,盲腸結(jié)扎穿刺組小鼠注射等體積的PBS作為對照。觀察14天內(nèi)rh FNHC-36對CLP誘導(dǎo)的膿毒血癥小鼠生存率的影響;采用菌落培養(yǎng)并計數(shù)評估小鼠腹腔及血液巨噬細胞對細菌的殺滅、清除作用;計算CLP術(shù)后小鼠胸腺和脾臟指數(shù);組織病理學(xué)檢查肝臟、脾臟、肺臟的病理形態(tài)學(xué)改變,評估rh FNHC-36對膿毒血癥小鼠的保護作用。3.rh FNHC-36對膿毒血癥小鼠巨噬細胞功能的影響無菌分離小鼠腹腔巨噬細胞,貼壁培養(yǎng)4小時后進行巨噬細胞鑒定,制備單細胞懸液,加入細菌脂多糖LPS(1μg/m L)刺激18個小時以誘導(dǎo)巨噬細胞的分化;ELISA法檢測小鼠血漿中IL-6的含量;Griess試劑盒檢測血清及巨噬細胞培養(yǎng)上清NO的水平;Transwell小室檢測巨噬細胞趨化功能的變化;流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞表面抑制性配體PD-L1的表達。結(jié)果:1.成功建立盲腸結(jié)扎穿刺模型造模后小鼠表現(xiàn)為體重明顯減輕,豎毛、寒戰(zhàn)、腹瀉,心率加快,喜獨居等;對模型小鼠進行解剖,發(fā)現(xiàn)其盲腸末端缺血、變黑壞死,伴有彌漫性膿腫及大面積粘連。rh FNHC-36治療組小鼠生理情況明顯優(yōu)于盲腸結(jié)扎穿刺組,經(jīng)菌群鑒定,腹腔及血液中均以E.coli-inactive及A.lwoffii為主,從而證實血中細菌來源于腹腔,膿毒血癥模型建立成功。2.rh FNHC-36對膿毒血癥小鼠具有保護作用14天內(nèi)正常組(Normal)以及偽手術(shù)組(Sham)均無小鼠死亡,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠的死亡率達70%,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠的死亡率為50%,差別有顯著意義(P0.05);正常組(Normal)以及偽手術(shù)組(Sham)小鼠腹腔及血液中均未檢測到細菌菌落生長,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠血液及腹腔中菌落計數(shù)分別為3.4×10^4±3.9×10^3個/ml、3.9×10^4±1.0×10^4個/ml,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠血液及腹腔中菌落計數(shù)分別為1.4×10^3±2.1×10^2個/ml、4.0×10^3±3.3×10^3個/ml,差別有顯著意義(P0.01);偽手術(shù)組(Sham)與正常組(Normal)小鼠的脾臟及胸腺指數(shù)無明顯差異,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠術(shù)后6h及24h脾臟指數(shù)分別為的3.0±0.4、2.9±0.5,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠術(shù)后6h及24h脾臟指數(shù)分別為的3.6±0.5、4.2±0.6,差別有顯著意義(P0.05);盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠術(shù)后6h及24h胸腺指數(shù)分別為的1.6±0.3、0.8±0.2,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠術(shù)后6h及24h胸腺指數(shù)分別為的2.7±0.5、1.8±0.2,差別有顯著意義(P0.05);病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠肝、脾、肺可出現(xiàn)廣泛的炎癥細胞浸潤、變性及壞死,而rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠肝、脾、肺僅見局灶性的炎癥細胞浸潤。3.rh FNHC-36增強膿毒血癥小鼠巨噬細胞功能正常組(Normal)小鼠巨噬細胞培養(yǎng)上清NO的濃度為4.2±1.6umol/L,偽手術(shù)組(Sham)小鼠巨噬細胞培養(yǎng)上清NO的濃度為4.6±1.1umol/L。盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠巨噬細胞培養(yǎng)上清NO的濃度為13.4±3.3umol/L,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠巨噬細胞培養(yǎng)上清NO的濃度為4.4±3.2umol/L,差別有顯著意義(P0.01);正常組(Normal)與偽手術(shù)組(Sham)小鼠血漿IL-6濃度分別為(6.3±6.3)pg/ml、(181±42)pg/ml,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠血漿IL-6的濃度為(64000±29000)pg/ml,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠血漿IL-6的濃度為(19000±19000)pg/ml,差別有顯著意義(P0.05);盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠的巨噬細胞趨化指數(shù)為3.8±0.9,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬細胞趨化指數(shù)為7.8±1.9,差別有顯著意義(P0.05);正常小鼠(Normal)腹腔巨噬細胞LPS刺激后PD-L1陽性率為69.0±10.9%,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠的巨噬細胞表面PD-L1陽性率為91.5%±3.2%,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬細胞表面PD-L1陽性率為80.4%±3.9%,差別有顯著意義(P0.05)。結(jié)論:rh FNHC-36對CLP誘導(dǎo)的膿毒血癥小鼠具有保護作用,可能是通過下調(diào)內(nèi)毒素引起的IL-6及NO水平的升高,促進巨噬細胞趨化功能,下調(diào)巨噬細胞表面PD-L1的表達起到保護作用。
【關(guān)鍵詞】：纖維連接蛋白 肝素結(jié)合域多肽 膿毒血癥 巨噬細胞 小鼠
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 第一部分 重組FNC端肝素結(jié)合域多肽對CLP誘導(dǎo)膿毒血癥小鼠的保護作用12-27
• 1.1 實驗材料12-14
• 1.2 實驗方法14-17
• 1.3 結(jié)果17-24
• 1.4 討論24-27
• 第二部分 重組FN C端肝素結(jié)合域多肽對小鼠巨噬細胞功能的影響27-42
• 2.1 實驗材料27-29
• 2.2 實驗方法29-33
• 2.3 結(jié)果33-39
• 2.4 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-46
• 綜述46-52
• 參考文獻50-52
• 致謝52

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 郭江睿;陳元仲;;纖維連接蛋白在腫瘤及抗感染研究的進展[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年06期

2 薛明;侯志明;張穎;艾紅軍;;牛血漿纖維黏連蛋白抑制大鼠成骨細胞凋亡的實驗研究[J];口腔醫(yī)學(xué);2007年05期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 崔建國;白毛藤生物堿抗菌抗病毒及免疫藥理學(xué)研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 楊惠麟;白毛藤多糖的提取及其藥效學(xué)的初步研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

3 郭江睿;纖維連接蛋白及重組FN肝素結(jié)合域多肽對血小板減少內(nèi)毒素血癥小鼠治療作用的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2006年

4 張敕;纖連蛋白及其重組肝素結(jié)合域多肽對血管內(nèi)皮細胞損傷的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

5 陳小芳;重組纖維連接蛋白C端及N端肝素結(jié)合域兩種多肽的制備及其對小鼠敗血癥治療作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

6 鄭雪萍;重組纖維連接蛋白N端及C端肝素結(jié)合域多肽對大腸桿菌感染敗血癥小鼠模型的治療作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

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本文編號：546898