本文關(guān)鍵詞：重組FN C端肝素結(jié)合域多肽對(duì)CLP誘導(dǎo)的膿毒血癥小鼠巨噬細(xì)胞功能的影響

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【摘要】：目的:利用小鼠盲腸結(jié)扎穿刺(CLP)誘導(dǎo)的膿毒血癥動(dòng)物模型,研究重組FN C端肝素結(jié)合域多肽(rh FNHC-36)對(duì)膿毒血癥小鼠的保護(hù)作用,從單核巨噬細(xì)胞功能的角度研究其在膿毒血癥中起保護(hù)作用的機(jī)制。方法:1.建立盲腸結(jié)扎穿刺膿毒血癥模型小鼠腹白線處切開(kāi),在盲腸中點(diǎn)結(jié)扎,穿刺針在結(jié)扎處與盲腸遠(yuǎn)端中點(diǎn)穿刺,穿孔處擠出一滴糞便后將盲腸放回腹腔,分兩層縫合切口。術(shù)后通過(guò)鑒定小鼠腹腔及血液中細(xì)菌的種類驗(yàn)證模型是否構(gòu)建成功。2.rh FNHC-36對(duì)膿毒血癥小鼠的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)小鼠分為正常組(Normal)、偽手術(shù)組(Sham)、盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)、rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36),治療組于盲腸結(jié)扎穿刺術(shù)前半小時(shí)及術(shù)后1小時(shí)、2小時(shí)分別尾靜脈注射40 mg/kg的rh FNHC-36,盲腸結(jié)扎穿刺組小鼠注射等體積的PBS作為對(duì)照。觀察14天內(nèi)rh FNHC-36對(duì)CLP誘導(dǎo)的膿毒血癥小鼠生存率的影響;采用菌落培養(yǎng)并計(jì)數(shù)評(píng)估小鼠腹腔及血液巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的殺滅、清除作用;計(jì)算CLP術(shù)后小鼠胸腺和脾臟指數(shù);組織病理學(xué)檢查肝臟、脾臟、肺臟的病理形態(tài)學(xué)改變,評(píng)估rh FNHC-36對(duì)膿毒血癥小鼠的保護(hù)作用。3.rh FNHC-36對(duì)膿毒血癥小鼠巨噬細(xì)胞功能的影響無(wú)菌分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)4小時(shí)后進(jìn)行巨噬細(xì)胞鑒定,制備單細(xì)胞懸液,加入細(xì)菌脂多糖LPS(1μg/m L)刺激18個(gè)小時(shí)以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的分化;ELISA法檢測(cè)小鼠血漿中IL-6的含量;Griess試劑盒檢測(cè)血清及巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清NO的水平;Transwell小室檢測(cè)巨噬細(xì)胞趨化功能的變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞表面抑制性配體PD-L1的表達(dá)。結(jié)果:1.成功建立盲腸結(jié)扎穿刺模型造模后小鼠表現(xiàn)為體重明顯減輕,豎毛、寒戰(zhàn)、腹瀉,心率加快,喜獨(dú)居等;對(duì)模型小鼠進(jìn)行解剖,發(fā)現(xiàn)其盲腸末端缺血、變黑壞死,伴有彌漫性膿腫及大面積粘連。rh FNHC-36治療組小鼠生理情況明顯優(yōu)于盲腸結(jié)扎穿刺組,經(jīng)菌群鑒定,腹腔及血液中均以E.coli-inactive及A.lwoffii為主,從而證實(shí)血中細(xì)菌來(lái)源于腹腔,膿毒血癥模型建立成功。2.rh FNHC-36對(duì)膿毒血癥小鼠具有保護(hù)作用14天內(nèi)正常組(Normal)以及偽手術(shù)組(Sham)均無(wú)小鼠死亡,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠的死亡率達(dá)70%,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠的死亡率為50%,差別有顯著意義(P0.05);正常組(Normal)以及偽手術(shù)組(Sham)小鼠腹腔及血液中均未檢測(cè)到細(xì)菌菌落生長(zhǎng),盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠血液及腹腔中菌落計(jì)數(shù)分別為3.4×10^4±3.9×10^3個(gè)/ml、3.9×10^4±1.0×10^4個(gè)/ml,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠血液及腹腔中菌落計(jì)數(shù)分別為1.4×10^3±2.1×10^2個(gè)/ml、4.0×10^3±3.3×10^3個(gè)/ml,差別有顯著意義(P0.01);偽手術(shù)組(Sham)與正常組(Normal)小鼠的脾臟及胸腺指數(shù)無(wú)明顯差異,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠術(shù)后6h及24h脾臟指數(shù)分別為的3.0±0.4、2.9±0.5,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠術(shù)后6h及24h脾臟指數(shù)分別為的3.6±0.5、4.2±0.6,差別有顯著意義(P0.05);盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠術(shù)后6h及24h胸腺指數(shù)分別為的1.6±0.3、0.8±0.2,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠術(shù)后6h及24h胸腺指數(shù)分別為的2.7±0.5、1.8±0.2,差別有顯著意義(P0.05);病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠肝、脾、肺可出現(xiàn)廣泛的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、變性及壞死,而rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠肝、脾、肺僅見(jiàn)局灶性的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。3.rh FNHC-36增強(qiáng)膿毒血癥小鼠巨噬細(xì)胞功能正常組(Normal)小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清NO的濃度為4.2±1.6umol/L,偽手術(shù)組(Sham)小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清NO的濃度為4.6±1.1umol/L。盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清NO的濃度為13.4±3.3umol/L,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清NO的濃度為4.4±3.2umol/L,差別有顯著意義(P0.01);正常組(Normal)與偽手術(shù)組(Sham)小鼠血漿IL-6濃度分別為(6.3±6.3)pg/ml、(181±42)pg/ml,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠血漿IL-6的濃度為(64000±29000)pg/ml,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠血漿IL-6的濃度為(19000±19000)pg/ml,差別有顯著意義(P0.05);盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠的巨噬細(xì)胞趨化指數(shù)為3.8±0.9,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬細(xì)胞趨化指數(shù)為7.8±1.9,差別有顯著意義(P0.05);正常小鼠(Normal)腹腔巨噬細(xì)胞LPS刺激后PD-L1陽(yáng)性率為69.0±10.9%,盲腸結(jié)扎穿刺組(CLP+PBS)小鼠的巨噬細(xì)胞表面PD-L1陽(yáng)性率為91.5%±3.2%,rh FNHC-36治療組(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬細(xì)胞表面PD-L1陽(yáng)性率為80.4%±3.9%,差別有顯著意義(P0.05)。結(jié)論:rh FNHC-36對(duì)CLP誘導(dǎo)的膿毒血癥小鼠具有保護(hù)作用,可能是通過(guò)下調(diào)內(nèi)毒素引起的IL-6及NO水平的升高,促進(jìn)巨噬細(xì)胞趨化功能,下調(diào)巨噬細(xì)胞表面PD-L1的表達(dá)起到保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：纖維連接蛋白 肝素結(jié)合域多肽 膿毒血癥 巨噬細(xì)胞 小鼠
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 第一部分 重組FNC端肝素結(jié)合域多肽對(duì)CLP誘導(dǎo)膿毒血癥小鼠的保護(hù)作用12-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-17
• 1.3 結(jié)果17-24
• 1.4 討論24-27
• 第二部分 重組FN C端肝素結(jié)合域多肽對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞功能的影響27-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-33
• 2.3 結(jié)果33-39
• 2.4 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述46-52
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 致謝52

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 郭江睿;陳元仲;;纖維連接蛋白在腫瘤及抗感染研究的進(jìn)展[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年06期

2 薛明;侯志明;張穎;艾紅軍;;牛血漿纖維黏連蛋白抑制大鼠成骨細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];口腔醫(yī)學(xué);2007年05期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 崔建國(guó);白毛藤生物堿抗菌抗病毒及免疫藥理學(xué)研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 楊惠麟;白毛藤多糖的提取及其藥效學(xué)的初步研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

3 郭江睿;纖維連接蛋白及重組FN肝素結(jié)合域多肽對(duì)血小板減少內(nèi)毒素血癥小鼠治療作用的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2006年

4 張敕;纖連蛋白及其重組肝素結(jié)合域多肽對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

5 陳小芳;重組纖維連接蛋白C端及N端肝素結(jié)合域兩種多肽的制備及其對(duì)小鼠敗血癥治療作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

6 鄭雪萍;重組纖維連接蛋白N端及C端肝素結(jié)合域多肽對(duì)大腸桿菌感染敗血癥小鼠模型的治療作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：546898