發(fā)布時(shí)間：2017-07-01 09:06

  本文關(guān)鍵詞：大鼠彌漫性軸索損傷模型中GPR17的表達(dá)變化及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：彌漫性軸索損傷（diffuse axonal injury，DAI）是指由頭外傷導(dǎo)致的以腦白質(zhì)軸索的彌漫性受損為特征的一種腦損傷。其損傷機(jī)制多認(rèn)為是由于受傷時(shí)頭顱在加減速作用下使腦內(nèi)的各組織之間出現(xiàn)剪切力而造成的。DAI主要累及腦的中軸和附近結(jié)構(gòu)，包括大腦半球、小腦、胼胝體以及腦干等部位，其病理學(xué)改變主要是腦白質(zhì)廣泛的變性和損傷，軸索腫脹和軸索收縮球的出現(xiàn)是其光鏡下的表現(xiàn)特點(diǎn)。臨床主要表現(xiàn)為意識(shí)障礙，治療效果及預(yù)后情況較差。對(duì)于DAI的治療和提高患者的預(yù)后質(zhì)量，是神經(jīng)學(xué)科的一項(xiàng)難點(diǎn)和重點(diǎn)。 GPR17是一種在系統(tǒng)發(fā)育過程中處于P2Y和cysLTs受體家族中介位置的孤兒G蛋白偶聯(lián)受體。它可以特定被尿嘧啶核苷酸（UDP、UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖）和半胱氨酰-白三烯（cysLTs）（LTD4和LTC4）受體家族雙重激活。GPR17主要分布在腦、腎臟、心臟等器官，在腦內(nèi)，GPR17主要分布在白質(zhì)、灰質(zhì)、室管膜下區(qū)、海馬齒狀回及胼胝體等部位。已有研究結(jié)果表明，GPR17在脊髓損傷、髓鞘損傷或變性、腦缺血性損傷以及調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元分化等方面都發(fā)揮著重要的作用。在彌漫性軸索損傷中，不同時(shí)間發(fā)生著不同程度的病理和微環(huán)境的變化,而這些變化與GPR17的作用可能存在交集。 本實(shí)驗(yàn)通過液壓沖擊的方法建立大鼠的彌漫性軸索損傷模型，觀察大鼠大腦損傷后不同時(shí)間的神經(jīng)元和軸索髓鞘的病理變化，以及GPR17在這些時(shí)間中的表達(dá)變化。以探究GPR17的表達(dá)與彌漫性軸索損傷后的進(jìn)展和修復(fù)程度之間可能存在的關(guān)系和意義，從而對(duì)這一疾病的診斷和治療有更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。 方法：健康成年S-D大鼠，體重250-300g，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組和損傷組。損傷組又分為液壓沖擊后1h、3h、12h、24h、72h、7d共六個(gè)時(shí)相組，每組5只大鼠，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)及觀察。 所有損傷組的大鼠均用液壓沖擊裝置沖擊顱骨冠狀縫和頂枕縫之間，矢狀線正上方部位的硬膜的方法來制作彌漫性軸索損傷的模型。沖擊壓力為中度1.6atm�？瞻讓�(duì)照組不給于任何處理。假手術(shù)組切開頭皮，磨開骨窗后，不予以液壓沖擊。損傷組給予液壓沖擊處理后，記錄損傷時(shí)間備用。 進(jìn)行特殊染色和免疫熒光組織化學(xué)染色的各組大鼠，均給予全身灌注固定后取腦。然后置于4%中性甲醛固定液中，4℃冰箱冷藏存放備用。進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR相對(duì)定量檢測的各組大鼠，在到達(dá)規(guī)定時(shí)間點(diǎn)后，給予深度麻醉后直接斷頭取腦，去掉硬膜和小腦，置于凍存管中液氮速凍保存?zhèn)溆谩?采用HE染色、尼氏染色、Gless嗜銀染色觀察DAI后不同時(shí)間的病理變化。用免疫熒光組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí)熒光定量PCR相對(duì)定量檢測分別檢測GPR17的蛋白和mRNA在不同時(shí)間的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，并采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用非參數(shù)檢驗(yàn)Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)法，以P0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1空白對(duì)照組HE染色中神經(jīng)細(xì)胞形狀正常規(guī)則，結(jié)構(gòu)完整清晰。鏡下觀察普遍均勻而致密，也沒有異常細(xì)胞類型的出現(xiàn)和增生。尼氏染色中可見神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)紫色的小顆粒狀，均勻致密的尼氏小體。Gless嗜銀染色可見在胼胝體中和其附近的軸索排列較整齊。假手術(shù)組出現(xiàn)了少許的神經(jīng)元水腫，空泡變性和少量的小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤，而軸索排列也有少許的紊亂。損傷后急性期的1h和3h組的HE染色中神經(jīng)元水腫和空泡變性現(xiàn)象增多，小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量也明顯增多，出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞衛(wèi)星現(xiàn)象。而且尼氏小體也逐漸的崩解減少，軸索斷裂紊亂現(xiàn)象也增多，出現(xiàn)了軸索腫脹和軸索收縮球。12h和24h組上述損傷進(jìn)一步加重，出現(xiàn)大量的神經(jīng)元變性壞死，小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量大幅增多。尼氏小體的數(shù)量大幅減少甚至消失。軸索的斷裂和紊亂也更加的嚴(yán)重。72h和7d組雖然仍然有損傷性的現(xiàn)象，但已經(jīng)開始出現(xiàn)不同程度的恢復(fù)期改變。HE染色中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)逐步恢復(fù)，神經(jīng)元的變性、水腫和壞死現(xiàn)象逐漸減少，小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量也呈下降趨勢。尼氏小體數(shù)目逐漸的增多，軸索的排列和結(jié)構(gòu)逐漸變得整齊和正常。 2免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果：通過計(jì)算視野內(nèi)熒光染色的熒光強(qiáng)度來代表GPR17的表達(dá)強(qiáng)度。假手術(shù)組、1h組、3h組、12h組GPR17的表達(dá)強(qiáng)度與空白對(duì)照組相比呈逐漸降低的趨勢。在12h時(shí)降至最低水平。24h組較12h組相比表達(dá)強(qiáng)度有所回升，之后在72h和7d組持續(xù)升高，7d時(shí)達(dá)到最高水平。各組的GPR17表達(dá)強(qiáng)度具有明顯差異性（P0.05）。 3實(shí)時(shí)熒光定量PCR相對(duì)定量檢測結(jié)果：假設(shè)空白對(duì)照組的GPR17表達(dá)倍數(shù)值為1，那么假手術(shù)組GPR17的表達(dá)量與其相比有所下降。1h組和3h組的表達(dá)量亦低于空白對(duì)照組，但接近于假手術(shù)組。12h組的表達(dá)量為最低水平。24h組的表達(dá)量與12h組相比有所升高，但仍低于空白對(duì)照組。72h和7d組的表達(dá)量逐漸升高，7d時(shí)達(dá)到最高。各組GPR17mRNA的表達(dá)水平具有明顯差異性（P0.05）。 結(jié)論： 1本實(shí)驗(yàn)通過液壓沖擊的方法成功建立了大鼠的彌漫性軸索損傷（DAI）模型。原理科學(xué)，可重復(fù)性好，可用于DAI的基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)研究。 2在DAI發(fā)生后的不同時(shí)間點(diǎn)，隨著病理學(xué)的改變，，GPR17的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的先降低后升高的動(dòng)態(tài)性變化。提示其與DAI的進(jìn)展和恢復(fù)有著密不可分的聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】：GPR17 彌漫性軸索損傷 P2Y受體 cysLTs受體 G蛋白偶聯(lián)受體
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-33
• 附表33-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 綜述 GPR17 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用研究進(jìn)展43-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡歷56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 毛鳳霞;陳惠金;;GPR17調(diào)控腦白質(zhì)損傷后內(nèi)在修復(fù)潛能的研究進(jìn)展[J];臨床兒科雜志;2012年03期

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王連友;大鼠液壓沖擊顱腦損傷模型的立體定向控制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：505292