本文關(guān)鍵詞：亞型CD200陽(yáng)性的胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)人肝細(xì)胞再生，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：既往研究認(rèn)為,人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)治療急性肝衰竭是有益的。在急性肝衰竭中,巨噬細(xì)胞和其分泌的腫瘤壞死因子-α (TNF-α)是參與肝細(xì)胞凋亡和急性肝衰竭發(fā)展的主要因素之一。CD200陽(yáng)性人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞(CD200positive human placenta mesenchymal stem cells, CD200+hPMSCs)通過(guò)與表達(dá)在NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞等上的CD200受體結(jié)合,可抑制這些細(xì)胞活性、轉(zhuǎn)變免疫反應(yīng)的類(lèi)型和抑制巨噬細(xì)胞釋放TNF-α。目前,間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝臟再生方面的研究較多,如改善肝臟代謝,抑制肝臟纖維化以及抑制肝細(xì)胞凋亡等,部分并已應(yīng)用臨床疾病的治療。然而,CD200'hPMSCs對(duì)人肝臟再生的影響仍然研究較少。 目的：探討在共培養(yǎng)系統(tǒng)中,CD200陽(yáng)性的人胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞(CD200positive human placenta chorionic mesenchymal stem cells, CD200+hPCMSCs)對(duì)人正常肝細(xì)胞代謝、增殖和凋亡的影響。 方法：利用Ⅱ型膠原酶和胰酶消化法從胎盤(pán)絨毛膜中分離胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞(hPCMSCs),免疫磁珠分選法從hPCMSCs中富集CD200+hPCMSCs。采用生理鹽水和Ⅱ型膠原酶兩步灌流法分離人原代肝細(xì)胞。在合成代謝與增殖實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組(0.5%FBS培養(yǎng)基對(duì)照,單獨(dú)培養(yǎng)干細(xì)胞上清液對(duì)照),對(duì)照組(單獨(dú)培養(yǎng)肝細(xì)胞對(duì)照)和共培養(yǎng)組(CD200+hPCMSCs:人肝細(xì)胞=1：3、1：1和3：1,分別三組)。測(cè)定不同組中人原代肝細(xì)胞分泌白蛋白和尿素的量,分析不同數(shù)量CD200+hPCMSCs對(duì)人肝細(xì)胞合成代謝的影響；MTT比色法測(cè)定不同組中人HL7702肝細(xì)胞的增殖水平,評(píng)估不同數(shù)量CD200+hPCMSCs對(duì)人肝細(xì)胞增殖的影響。在凋亡實(shí)驗(yàn)中,設(shè)陰性對(duì)照組,凋亡組和抗凋亡組。采用顯微鏡觀察凋亡形態(tài)、Annexin-V/PI標(biāo)記不同組中凋亡的HL7702肝細(xì)胞和流式細(xì)胞儀檢測(cè)HL7702肝細(xì)胞的凋亡比率,以評(píng)估相同數(shù)量CD200+hPCMSCs對(duì)人肝細(xì)胞凋亡的影響。Western blot檢測(cè)人HL7702肝細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xL、Bax和Caspase-3在不同組中的表達(dá)水平,進(jìn)一步評(píng)估相同數(shù)量的CD200+hPCMSCs對(duì)人肝細(xì)胞凋亡影響的干預(yù)機(jī)理。 結(jié)果：在合成代謝實(shí)驗(yàn)中,各共培養(yǎng)組與對(duì)照組中尿索分泌量(1.93±0.42mg/dl)和蛋白分泌量(85.63±4.02ng/ml)相比,共培養(yǎng)細(xì)胞比例為1：3組,尿素和白蛋白分泌量變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尿素量為2.53±0.26mg/dl,P=0.418:自蛋白量為69.15±2.38ng/ml,P=0.926);比例為1：1組,尿索和白蛋白分泌量均高于對(duì)照組(尿素量2.99±0.74mg/dl,P=0.063;白蛋白量172.52±45.19ng/ml,P 0.05):比例為3：1組,尿素和白蛋白分泌量也均高于對(duì)照組(尿素量3.35±0.24mg/dl,P0.05；白蛋白量249.25±49.83ng/ml,P0.01)。在增殖試驗(yàn)中，共培養(yǎng)24小時(shí)后，1：1組中HL7702肝細(xì)胞增殖水平(114.10±2.75%,P0.01)和3：1組HL7702肝細(xì)胞增殖水平(127.16±5.15%,P0.01)均高于對(duì)照組(100%±0.00%)；而與對(duì)照組相比,在1：3組中HL7702肝細(xì)胞增殖沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(97.20±1.85%,P=0.391)。在培養(yǎng)48小時(shí),1：3組(133.36±0.70%,P0.05),1：1組(133.86±3.30%,P0.05)和3：1組(142.50±12.30%,,P0.05)HL7702肝細(xì)胞的增殖水平均較對(duì)照組(130.03±0.55%)高。同時(shí),在培養(yǎng)72小時(shí),1：3組(161.73±1.96%,P0.01),1：1組(164.90±0.75%,P0.01)和3：1組(171.30±5.40%,P0.01)肝細(xì)胞的增殖水平也均高于對(duì)照組(139.40±1.85%)。此外,在凋亡實(shí)驗(yàn)中,誘導(dǎo)HL7702肝細(xì)胞凋亡24h,顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)：抗凋亡組HL7702肝細(xì)胞凋亡數(shù)少于凋亡組,且抗凋亡組中肝細(xì)胞膜皺縮,細(xì)胞核碎裂程度明顯少于凋亡組。在誘導(dǎo)凋亡12h時(shí),流式細(xì)胞儀分析提示：抗凋亡組HL7702肝細(xì)胞凋亡陽(yáng)性率(14.30±0.1414%)低于凋亡組HL7702肝細(xì)胞凋亡陽(yáng)性率(20.40±1.4142%),P0.01.Western blot結(jié)果表明：在培養(yǎng)12h和24h,抗凋亡組抗凋亡Bcl-xL蛋白1相對(duì)表達(dá)量(Bcl-xL/β-actin)均高于凋亡組；在培養(yǎng)12h和24h時(shí),抗凋亡組促凋亡Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)最(Caspase-3/β-actin)均低于凋亡組。 結(jié)論：CD200+hPCMSCs增強(qiáng)人正常肝細(xì)胞的合成代謝、促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖以。通過(guò)增強(qiáng)抗凋亡Bcl-xL蛋白和降低促凋亡Caspase-3蛋白的表達(dá)來(lái)抑制肝細(xì)胞凋
【關(guān)鍵詞】：CD200 胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞 肝細(xì)胞 再生 凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的13
• 研究方法13-15
• 1 對(duì)象和方法15-29
• 1.1 研究對(duì)象15
• 1.2 分組15
• 1.3 主要儀器設(shè)備及器材15-16
• 1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 1.5 主要試劑的配置17-19
• 1.6 人hPCMSCs的分離、培養(yǎng)和純化19-20
• 1.7 hPCMSCs流式細(xì)胞儀檢測(cè)20-21
• 1.8 磁珠分選CD200~+hPCMSCs21
• 1.9 正常人原代肝細(xì)胞的分離、培養(yǎng)21-22
• 1.10 正常人HL7702肝細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)22-23
• 1.11 CD200~+hPCMSCs與人正常原代肝細(xì)胞共培養(yǎng)23
• 1.12 雙夾心ELISA法和比色法測(cè)定白蛋白23-24
• 1.13 化學(xué)發(fā)光法和比色法測(cè)定尿素24
• 1.14 CD200~+hPCMSCs與HL7702肝細(xì)胞有共培養(yǎng)24-25
• 1.15 MTT比色法分析HL7702肝細(xì)胞增殖25
• 1.16 顯微鏡觀察CD200~+hPCMSCs對(duì)HL7702肝細(xì)胞凋亡的影響25
• 1.17 Annexin-V/PI試劑盒檢測(cè)HL7702肝細(xì)胞凋亡25-26
• 1.18 Western Blot測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xL,Bax和caspase-326-29
• 1.19 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29
• 2 結(jié)果29-36
• 2.1 hPCMSCs的特征29-31
• 2.2 磁珠分選CD200~+hPCMSCs從hPCMSCs31
• 2.3 CD200~+hPCMSCs增強(qiáng)了人原代肝細(xì)胞白蛋白的合31-32
• 2.4 CD200~+hPCMSCs增強(qiáng)了人原代肝細(xì)胞尿素的合32
• 2.5 CD200~+hPCMSCs促進(jìn)了HL-7702肝細(xì)胞增殖32-33
• 2.6 顯微鏡下觀察HL-7702肝細(xì)胞的凋亡33-34
• 2.7 CD200~+hPCMSCs抑制了HL-7702肝細(xì)胞的凋亡34-35
• 2.8 CD200~+hPCMSCs上調(diào)了凋亡相關(guān)蛋白 Bcl-xL和下調(diào)了凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的表達(dá)35-36
• 3 討論36-41
• 3.1 CD200~+hPCMSCs的由來(lái)及課題設(shè)計(jì)分析36-37
• 3.2 CD200~+hPCMSCs對(duì)肝細(xì)胞代謝影響分析37-38
• 3.3 CD200~+hPCMSCs對(duì)肝細(xì)胞有絲分裂影響的分析38
• 3.4 CD200~+hPCMSCs對(duì)肝細(xì)胞凋亡影響的分析38-41
• 結(jié)論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明46-47
• 綜述47-61
• 綜述參考文獻(xiàn)58-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳輝 ,肖衛(wèi)民 ,張陽(yáng)德;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)TNF-α誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年14期

  本文關(guān)鍵詞：亞型CD200陽(yáng)性的胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)人肝細(xì)胞再生，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：484695