本文關(guān)鍵詞：內(nèi)皮源性一氧化氮合酶基因多態(tài)性與脂多糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷異質(zhì)性關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究?jī)?nèi)皮源性一氧化氮合酶（eNOS）基因多態(tài)性對(duì)eNOS表達(dá)、一氧化氮（NO）合成的影響，以及與脂多糖（LPS）誘導(dǎo)原代人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）活化、損傷異質(zhì)性的關(guān)系。方法： HUVEC體外傳代培養(yǎng)，采用PCR擴(kuò)增目的片段、運(yùn)用酶切及電泳分離手段進(jìn)行基因多態(tài)性分析并進(jìn)行測(cè)序鑒定。采用RT-PCR、Western Blot、ELISA及比色法等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，，研究生理鹽水和LPS刺激下不同eNOS基因型HUVEC eNOS mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)、一氧化氮（NO）的合成；炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的分泌；以及內(nèi)皮細(xì)胞損傷標(biāo)記物血管假性血友病因子（vWF）、血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)、血管內(nèi)皮鈣粘蛋白質(zhì)（VE-cadherin）的表達(dá)。結(jié)果：（1）eNOS894G→T基因型GG、GT、TT基因頻率分別為181／222（81.5%）、38/222(17.1％)和3/222(1.4%)；eNOS內(nèi)含子4ab VNTR基因型aa、ab、bb基因型頻率分別為3/274(1.1%)、35/274(12.8%)和236／274（86.1%）。三種優(yōu)勢(shì)基因型單體為：GG／bb(67.3％), GT/bb(17.1%),和GG/ab(15.2%)。（2）與基因型GG比較，基因型GT eNOS mRNA、蛋白質(zhì)基礎(chǔ)表達(dá)值低且NO合成少。LPS刺激后，兩種基因型eNOS的表達(dá)和NO合成均顯著下降，但基因型GT下降幅度更加顯著（p0.05）�；蛐虶T HUVEC分泌TNF-α、IL-6和表達(dá)vWF、VCAM-1基礎(chǔ)值顯著高于、而VE-cadherin基礎(chǔ)表達(dá)水平顯著低于基因型GG細(xì)胞。LPS刺激后，兩種基因型HUVEC分泌TNF-α、IL-6和表達(dá)vWF、VCAM-1、VE-Cadherin水平與基礎(chǔ)值比較均有顯著差異。但GT型細(xì)胞IL-6升高的幅度顯著高于GG型細(xì)胞（p0.05）。eNOS內(nèi)含子4ab VNTR基因型ab與bb對(duì)eNOS mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)和NO合成；炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6分泌及表達(dá)血管內(nèi)皮損傷標(biāo)志物vWF、VCAM-1和VE-Cadherin水平的影響也呈現(xiàn)與eNOS894GG、GT基因型相似的基礎(chǔ)水平和LPS刺激后的異質(zhì)性變化。三種基因型單體中，GT/bb單體eNOS表達(dá)和NO合成的基礎(chǔ)值最低（p0.05）。LPS刺激后，該單體受影響更加顯著，而且引起炎癥介質(zhì)（TNF-α、IL-6）的釋放和血管內(nèi)皮損傷標(biāo)志物（vWF、VCAM-1）表達(dá)的升高幅度更大、細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性標(biāo)志物VE-Cadherin更加顯著地降低。結(jié)論：eNOS894G→T和內(nèi)含子4ab VNTR基因多態(tài)性均影響原代HUVEC eNOS表達(dá)和NO合成。eNOS894GT、eNOS4bb基因型以及eNOS GT/4bb基因單體HUVEC eNOS基礎(chǔ)表達(dá)水平低，在LPS刺激下，與其它基因型和基因單體HUVEC比較，eNOS表達(dá)和NO合成減少的程度更加顯著，可能是導(dǎo)致LPS誘導(dǎo)HUVEC活化和損傷異質(zhì)性的重要因素。
【關(guān)鍵詞】：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 內(nèi)皮源性一氧化氮合酶 基因多態(tài)性 內(nèi)皮細(xì)胞損
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 目錄4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 英文縮略索引10-11
• 前言11-14
• 1. 課題研究背景14-15
• 2. 研究方法15-16
• 3. 技術(shù)路線圖16-17
• 4. 實(shí)驗(yàn)材料17-20
• 4.1 標(biāo)本17
• 4.2 主要儀器設(shè)備17-18
• 4.3 主要試劑與耗材18-19
• 4.4 主要溶液的配制19-20
• 5. 主要操作技術(shù)流程20-28
• 5.1 HUVEC 體外培養(yǎng)步驟20-21
• 5.2 HUVEC 的 DNA 提取21-22
• 5.3 HUVEC 的 RNA 提取22-23
• 5.4 HUVEC 的蛋白質(zhì)提取23
• 5.5 HUVEC 蛋白質(zhì)的定量23-24
• 5.6 Western-blot 檢測(cè) HUVEC 蛋白質(zhì)的表達(dá)24-27
• 5.7 檢測(cè) HUVEC NO 含量27
• 5.8 檢測(cè) HUVEC TNF-α、IL-6、vWF、VCAM-1 的表達(dá)27-28
• 6. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理28-29
• 7. HUVEC 原代培養(yǎng)鑒定、eNOS 基因型鑒定及基因多態(tài)性分析29-34
• 7.1 實(shí)驗(yàn)步驟29-30
• 7.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-34
• 8. eNOS 基因多態(tài)性與 HUVEC eNOS 表達(dá)、NO 合成、炎癥介質(zhì)釋放以及細(xì)胞損傷標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)系34-64
• 8.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)34-36
• 8.2 實(shí)驗(yàn)分組36-37
• 8.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-64
• 8.3.1 eNOS 894G→T 基因多態(tài)性與 HUVEC eNOS 表達(dá)、NO 合成、炎性介質(zhì)釋放以及細(xì)胞損傷標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)系37-46
• 8.3.2 eNOS 內(nèi)含子 4a/b VNTR 基因多態(tài)性與 HUVEC eNOS 表達(dá)、NO 成、炎性介質(zhì)釋放以及細(xì)胞損傷標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)系46-55
• 8.3.3 eNOS 894G→T4a/b VNTR 基因單體多態(tài)性與 HUVEC eNOS 表達(dá)、NO 合成、炎性介質(zhì)釋放及細(xì)胞損傷標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)系55-64
• 9. 討論64-67
• 10. 結(jié)論67-69
• 參考文獻(xiàn)69-76
• 文獻(xiàn)綜述76-84
• 摘要76
• eNOS 基因定位及結(jié)構(gòu)表達(dá)76-77
• eNOS 基因多態(tài)性及表達(dá)77-78
• eNOS 基因多態(tài)性與膿毒癥78-79
• 參考文獻(xiàn)79-84
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況84-85
• 致謝85-86
• 基金項(xiàng)目86-87

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 李友;王穆;讓歐艷;李恩華;賀彬琪;鄒麗君;鄭宇;讓蔚清;;乙醇誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷及ADMA/NOS/NO信號(hào)機(jī)制[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2008年02期

2 常青;;鉛誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷及機(jī)制研究[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年08期

3 尹萍;金文敏;;內(nèi)皮型一氧化氮和酶及其抑制劑與2型糖尿病血管內(nèi)皮功能[J];天津藥學(xué);2008年02期

4 薛永亮;史海霞;卞卡;;一氧化氮和血管活性物質(zhì)的相互作用及中藥的介入[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年07期

5 張強(qiáng);鄧峰美;何芳;王樹人;盧賢貴;王剛;鄒放君;鐘華;魏克娜;唐斌;;內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性與新疆哈薩克族原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)研究[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2012年02期

6 韓利文;鄭新元;趙亮;侯晉軍;李青山;;羅布麻葉不同成分群對(duì)一氧化氮合酶的抑制活性研究[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2009年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 汪德清;田亞平;;葛根素精氨酸組合物對(duì)大鼠生長(zhǎng)代謝的影響[A];第六屆全國(guó)自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議和海峽兩岸自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)皮源性一氧化氮合酶基因多態(tài)性與脂多糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷異質(zhì)性關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：481044