目的比較分析急性心肌梗死(AMI)患者和非心源性胸痛(NCCP)患者血漿外泌體中mRNA的表達差異,并探討差異表達mRNA對AMI發(fā)生發(fā)展可能的影響。方法入選北京朝陽醫(yī)院和內(nèi)蒙古包頭市中心醫(yī)院NCCP患者和AMI患者各15例。提取入選者血漿外泌體及外泌體總RNA,高通量測序技術(shù)檢測AMI患者和NCCP患者血漿中外泌體信使RNA(mRNA)的表達譜,篩選出AMI患者中差異表達的mRNA。對差異表達mRNA進行基因本體(GO)分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)信號通路分析。結(jié)果提取的外泌體為粒徑在30～200 nm之間的雙層膜小囊泡,表達外泌體標志分子分化簇63(CD63)和熱休克蛋白70(HSP70),而不表達甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH),符合外泌體的特征。對入選AMI患者和NCCP患者血漿外泌體中的mRNA表達量進行檢測,AMI患者血漿中外泌體轉(zhuǎn)錄本數(shù)量為64 258條,NCCP患者血漿中外泌體轉(zhuǎn)錄本數(shù)量為64 374條。其中差異表達的mRNA共1 800條(上調(diào)951條,下調(diào)849條)。GO和KEGG分析表明上述差異表達的mRNA參與了AMI的生物學(xué)調(diào)節(jié)功能和通路。結(jié)...

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圖2.TEM圖像顯示從血漿中提取的外泌體

透射電鏡下觀察到提取的囊泡大小不均,呈圓形或類圓形,具有脂質(zhì)雙層膜,直徑在30～200nm之間,符合外泌體的形態(tài)特征(圖2)。2.4外泌體特異性分子標志

圖3.外泌體標志蛋白CD63和HSP70的Westernblot分析

免疫印跡實驗結(jié)果顯示,提取到的囊泡表達特異性標志蛋白CD63和HSP70,而不表達GAPDH(圖3),符合外泌體的特征。2.5外泌體已知mRNA表達量

圖1.外泌體粒徑大小及濃度的分析

表1.兩組基本臨床資料的比較(n=15)Table1.Comparisonofbasicclinicaldatabetweenthetwogroups(n=15)指標AMI組NCCP組P男/[例(%)]12(80.0)8(66.7)0.054....

圖6.差異表達mRNAs的KEGG途徑

圖5.差異表達mRNA的GO分析2.8差異表達mRNAKEGG分析

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