目的:初步探討脂多糖誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞源性外泌體調(diào)控肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制。方法:通過miRNAs基因芯片技術(shù)比較正常肺泡上皮細(xì)胞來源的外泌體(AEC-Exo)和LPS誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞來源的外泌體(LPS-AEC-Exo)組間差異miRNAs表達(dá)譜并進(jìn)行驗證,篩選得到與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的miR-92a-3p;利用qRT-PCR技術(shù)分別檢測LPS刺激下AEC中miR-92a-3p的表達(dá)情況以及LPS-AEC-Exo處理后AM中miR-92a-3p的表達(dá)情況;將miR-92a-3p mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染至AEC中,過表達(dá)AEC-Exo中的miR-92a-3p或沉默LPS-AEC-Exo中miR-92a-3p的表達(dá)后與AM共培養(yǎng),檢測各組AM中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)變化以及NF-κB信號通路激活情況;生物信息學(xué)預(yù)測miR-92a-3p的下游靶基因,檢測調(diào)控AEC-Exo和LPS-AEC-Exo中miR-92a-3p表達(dá)后,各組AM中下游靶基因PTEN的表達(dá)變化;采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-92a-3p與靶基因3’UTR區(qū)的靶向結(jié)合。結(jié)果:(1)m...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細(xì)胞
        2.1.2 主要實驗試劑和耗材
        2.1.3 主要儀器和設(shè)備
    2.2 實驗試劑的配置
        2.2.1 培養(yǎng)基的配制
        2.2.2 LPS的配制
        2.2.3 Western Blot相關(guān)試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 AM、AEC培養(yǎng)
        2.3.2 實驗分組及實驗流程圖
        2.3.3 外泌體提取
        2.3.4 RNA的提取、純度及完整性檢測
        2.3.5 miRNAs芯片分析
        2.3.6 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.3.7 qRT-PCR
        2.3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.9 Western Blot
        2.3.10 Firefly luciferase& Renilla luciferase雙螢光素報告基因檢測
    2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 脂多糖誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞外泌體源性miRNAs的表達(dá)變化
        3.1.1 MiRNAs基因芯片檢測LPS-AEC-Exo中 miRNAs表達(dá)譜
    3.2 miR-92a-3p在 LPS-AEC-Exo發(fā)揮致炎效應(yīng)中的作用
        3.2.1 LPS-AEC-Exo將 miR-92a-3p遞送到肺泡巨噬細(xì)胞
        3.2.2 LPS-AEC-Exo通過miR-92a-3p刺激肺泡巨噬細(xì)胞活化
        3.2.3 LPS-AEC-Exo中 miR-92a-3p靶向作用于AM中 PTEN的3’UTR區(qū)域
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 進(jìn)一步工作方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3898726