目的探究miR-28-5p在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(ALI)進(jìn)程中的作用和分子機(jī)制。方法將40只C57BL/6雄鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為生理鹽水組、ALI-3h組、ALI-6h組和ALI-12h組,每組10只。利用LPS誘導(dǎo)小鼠ALI 3h、6h、12h,取肺組織進(jìn)行熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)miR-28-5p表達(dá);同時(shí)體外利用LPS刺激小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7發(fā)生炎癥反應(yīng),RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞miR-28-5p表達(dá);巨噬細(xì)胞過(guò)表達(dá)miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)表達(dá)情況;RT-PCR和Western blot檢測(cè)抗氧化關(guān)鍵分子核因子E2相關(guān)因子2 (Nrf2)、血紅素加氧酶(HO-1)、醌氧化還原酶(NQO1)表達(dá)水平;Targetscan 7.0預(yù)測(cè)miR-28-5p靶向基因,突變結(jié)合位點(diǎn)后,并通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)miR-28-5p對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果與生理鹽水組比較,LPS誘導(dǎo)小鼠ALI 3h、6h、12h TNF-α、IL-1β水平明顯升...

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【文章目錄】：
1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 動(dòng)物
    1.2 細(xì)胞株
    1.3 試劑
    1.4 儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 小鼠ALI模型構(gòu)建
    2.2 支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞因子含量測(cè)定
    2.3 小鼠肺巨噬細(xì)胞株RAW264.7培養(yǎng)與處理
    2.4 設(shè)計(jì)mi R-28-5p mimic，轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞
    2.5 RT-PCR檢測(cè)mi R-28-5p、TNF-α、IL-1β、Nrf2、HO-1、NQO1表達(dá)水平
    2.6 Western bolt檢測(cè)Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平
    2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 mi R-28-5p在LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI模型肺組織表達(dá)
    3.2 LPS刺激巨噬細(xì)胞后mi R-28-5p表達(dá)
    3.3 mi R-28-5p mimic促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1型極化
    3.4 mi R-28-5p促進(jìn)Nrf2及其信號(hào)表達(dá)
    3.5 mi R-28-5p靶向Nrf2基因3'UTR序列
4 討論



本文編號(hào)：3792062