目的在大鼠膿毒癥早期應用短效、高選擇性β1受體阻滯劑艾司洛爾,觀察其對膿毒癥大鼠心肌細胞凋亡相關蛋白表達、氧化應激反應、線粒體結(jié)構(gòu)及心功能的影響,并初步探討其心臟保護機制。方法63只Wistar雄性大鼠,隨機分為三大組:假手術(shù)組(Sham組)、膿毒癥組(CLP組)和艾司洛爾組(ES組)。根據(jù)采取標本時間的不同,每大組再隨機分為6、12、24小時三個亞組。Sham組僅開腹盲腸探查,CLP和ES組均采用盲腸穿孔結(jié)扎法(CLP)法建立膿毒癥大鼠模型。Sham和CLP組均以1ml/h速度持續(xù)微量泵入0.9%氯化鈉溶液,共6 h;ES組同樣以1ml/h速度持續(xù)微量泵入艾司洛爾稀釋溶液[15 mg/(kg·h)],共計6 h。大鼠分別于造模成功并泵藥開始后6 h、12 h及24 h時間點處死,無菌條件下迅速開胸取血并摘取心臟,處理血液、心臟組織標本。采用ELISA法檢測血清TNF-α、BNP水平;WST-1法檢測心肌組織SOD活力;分光光度法測定心肌組織MDA含量;Western Blot檢測心肌組織Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達。透射電鏡下觀察心肌線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)變化情況。結(jié)果1....

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 膿毒癥研究背景與現(xiàn)狀
    1.2 細胞凋亡機制
    1.3 氧化應激與凋亡
    1.4 線粒體的核心地位
    1.5 艾司洛爾對膿毒癥心臟的保護作用
    1.6 本研究的目的與意義
    參考文獻
第二章 研究內(nèi)容與過程
    2.1 研究內(nèi)容與技術(shù)路線圖
        2.1.1 研究內(nèi)容
        2.1.2 技術(shù)路線圖
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 主要實驗試劑
        2.2.3 試劑配制
        2.2.4 實驗器材與設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 動物分組
        2.3.2 采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)法建立大鼠膿毒癥模型
        2.3.3 膿毒癥模型評估
        2.3.4 顯微鏡下股靜脈置管及用藥
        2.3.5 血清標本的采集與處理
        2.3.6 心肌組織標本的采集與處理
    2.4 酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測血清TNF-α、BNP水平
        2.4.1 Elisa測定原理
        2.4.2 實驗前準備
        2.4.3 主要檢測步驟
    2.5 WST-1 法、分光光度法分別檢測心肌組織SOD、MDA
        2.5.1 WST-1法測定原理
        2.5.2 實驗前準備(WST-1法)
        2.5.3 SOD主要檢測步驟
        2.5.4 分光光度法檢測MDA實驗前準備
        2.5.5 MDA主要檢測步驟
    2.6 Western Blot法檢測心肌組織Caspase-3、Bcl-2、Bax表達水平
        2.6.1 提取心肌組織蛋白
        2.6.2 BCA法檢測蛋白含量及蛋白變性
        2.6.3 SDS-PAGE凝膠制備與灌膠
        2.6.4 上樣與電泳
        2.6.5 濕轉(zhuǎn)膜法轉(zhuǎn)膜
        2.6.6 封閉
        2.6.7 孵育一抗、二抗
        2.6.8 ECL法顯影曝光
        2.6.9 圖像灰度值測定與分析
    2.7 透射電鏡檢測心肌細胞及線粒體形態(tài)
        2.7.1 電鏡標本制備
        2.7.2 電鏡觀察并拍照
    2.8 統(tǒng)計學分析
第三章 研究結(jié)果
    3.1 血清TNF-α水平變化
    3.2 血清BNP水平變化
    3.3 心肌組織SOD活力變化
    3.4 心肌組織MDA含量水平變化
    3.5 心肌組織Caspase-3、Bax、Bcl-2 表達水平變化
    3.6 透射電鏡結(jié)果
第四章 討論
    4.1 大鼠盲腸結(jié)扎與穿刺(CLP)膿毒癥模型
    4.2 TNF-α與膿毒癥心肌細胞凋亡、氧化應激
    4.3 膿毒癥與氧化應激
    4.4 膿毒癥與心肌凋亡相關蛋白表達及線粒體損傷
    4.5 膿毒癥誘導的心功能障礙與BNP
第五章 結(jié)論
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 不足與展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學期間的研究成果
致謝
中英文對照詞表



本文編號：3761014