目的:本研究通過糖尿病小鼠模型觀察改良保存液處理的自體血對糖尿病小鼠傷口愈合情況的影響,觀察HIF-1α信號通路在促進傷口愈合中的作用并探討其可能的作用機制。方法:選擇健康雄性昆明小鼠30只,8w齡,體重26~30g,適應性飼養(yǎng)1w后,小劑量注射STZ（50 mg/kg）連續(xù)注射5d構(gòu)建糖尿病小鼠模型。成功建模后,采用隨機數(shù)字表法分為3組:獻血組（每只小鼠心臟0.6mL,分別置于改良保存液和標準保存液體外保存7d）;實驗組:改良組（n=6）（回輸改良保存液處理的自體血）;標準組（n=6）（回輸標準保存液處理的自體血）。（1）小鼠麻醉后,進行背部皮膚消毒,用穿孔機在脊柱兩側(cè)制作直徑為2 cm的開放性皮膚傷口。傷口模型建立后第1d、2d、3d將貯存在不同保存液中的自體血進行回輸,并于傷后0d、1d、4d、7d和14d記錄受傷部位,并計算傷口愈合面積百分比。（2）收集創(chuàng)面和邊緣的全層皮膚,立即貯存于液氮中保存待測。RT-qPCR檢測傷口組織中HIF-1α、VEGF、EGF、HSP90 mRNA表達水平;免疫組化檢測皮膚組織HIF-1α、VEGF、EGF表達水平。（3）HIF-1α通過siRN... 

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【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
前言
材料、內(nèi)容與方法
    1.研究材料
        1.1 藥品和試劑
        1.2 所需設備及儀器
        1.3 研究內(nèi)容
    2.研究方法
        2.1 實驗動物選擇
        2.2 小鼠模型制備
            2.2.1 糖尿病小鼠模型制備
            2.2.2 糖尿病小鼠自體血的采集及保存
            2.2.3 糖尿病小鼠創(chuàng)傷模型建立及自體血回輸
            2.2.4 糖尿病小鼠創(chuàng)傷模型建立及自體血回輸
        2.3 免疫組織化學
        2.4 皮膚成纖維細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定及處理
            2.4.1 皮膚成纖維細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
            2.4.2 RNA干擾
            2.4.3 細胞轉(zhuǎn)染
            2.4.4 灌注生物反應器中的細胞培養(yǎng)
            2.4.5 CCK8法
            2.4.6 流式細胞術(shù)檢測
        2.5 Western blot法
        2.6 實時熒光定量PCR(RT-qPCR)
    3 統(tǒng)計方法
    技術(shù)路線圖
結(jié)果
    1.各組小鼠傷口愈合率的比較
    2.改良自體血對傷口相關(guān)指標的影響
    3.HIF-1α 通過 siRNA 在成纖維細胞中沉默后，改良自體血對相關(guān)指標的影響
    4.改良處理自體血對成纖維細胞的影響
討論
    1.糖尿病傷口延遲愈合及其可能存在的機制
    2.糖尿病患者自體血液如何保存問題有待解決
    3.改良處理自體血對糖尿病小鼠傷口愈合率的影響
    4.改良處理自體血對HIF-1α通路的影響
    5.改良處理自體血對成纖維細胞的增殖和遷移能力的影響
結(jié)論
參考文獻
綜述 HIF-1α與糖尿病患者傷口愈合相關(guān)性的研究進展
    參考文獻
附錄
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]HIF-1α與自噬在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的相關(guān)性研究現(xiàn)狀[J]. 張梅,李春霞.  臨床眼科雜志. 2017(05)
[2]缺氧誘導因子-1α與糖尿病血管新生的研究進展[J]. 艾麗根,劉芳.  中國糖尿病雜志. 2015(05)



本文編號：3693934