目的:應(yīng)用高通量全轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析小鼠創(chuàng)傷性腦損傷（Traumatic Brain Injury,TBI）后腦細胞間隙外泌體中長非編碼RNA（lncRNA）表達的變化。運用生物信息學方法分析差異性表達lncRNA,并構(gòu)建lncRNA-miRNA-mRNA網(wǎng)絡(luò),闡明腦細胞間隙外泌體攜帶的lncRNA是如何調(diào)控TBI發(fā)生發(fā)展的,為TBI臨床診斷提供新的分子標記物及為TBI的治療提供新策略。方法:（1）建立外泌體分離方法:采用木瓜蛋白酶消化法結(jié)合外泌體分離試劑盒分離小鼠腦細胞間隙外泌體,用磷鎢酸負染法利用透射電鏡觀察外泌體外觀,Western Blot鑒定外泌體標志性蛋白CD63、TSG101和HSP70。（2）分組:24只C57BL/6小鼠隨機分為TBI組和Sham組。（3）RNA高通量測序:提取總RNA,質(zhì)控;去除核糖體RNA（rRNA）,構(gòu)建RNA文庫并進行文庫質(zhì)控;全轉(zhuǎn)錄組測序,對lncRNA、miRNA和mRNA進行檢測、鑒定及注釋;對差異表達的lncRNA、miRNA和mRNA進行篩選。（4）驗證RNA高通量測序結(jié)果:隨機選擇5個差異表達的lncRNA、miRNA和mRNA,并... 

【文章頁數(shù)】：159 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、腦細胞間隙外泌體的分離與鑒定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要儀器
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 實驗方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 透射電鏡下外泌體的形態(tài)學鑒定
        1.2.2 Western Blot鑒定外泌體的表面標志物
    1.3 討論
        1.3.1 外泌體的分離
        1.3.2 外泌體的鑒定
        1.3.3 TBI與外泌體
    1.4 小結(jié)
二、小鼠TBI后腦細胞間隙外泌體中l(wèi)ncRNA表達的變化
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實驗方法
        2.1.5 統(tǒng)計分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 RNA質(zhì)控
        2.2.2 RNA文庫質(zhì)控
        2.2.3 RNA測序結(jié)果以及差異表達RNA的鑒定
        2.2.4 方法學驗證:實時定量PCR驗證RNA結(jié)果
    2.3 討論
        2.3.1 小鼠TBI模型的建立
        2.3.2 lncRNA測序
    2.4 小結(jié)
三、小鼠TBI后外泌體中差異表達的lncRNA的生物信息學分析
    3.1 對象和方法
        3.1.1 實驗方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 差異表達lnc RNA的 GO富集結(jié)果
        3.2.2 差異表達lnc RNA的 KEGG信號通路分析結(jié)果
        3.2.3 lncRNA-miRNA-mRNA相互作用預測
    3.3 討論
        3.3.1 GO分析
        3.3.2 KEGG通路分析
        3.3.3 lncRNA-miRNA-mRNA的相互作用
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述 長非編碼RNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy: From genetics to diagnostic and therapeutic challenges[J]. Bruno Pinamonti,Francesca Brun,Luisa Mestroni,Gianfranco Sinagra.  World Journal of Cardiology. 2014(12)



本文編號：3674158