目的:慢加急性肝衰竭（Acute-on-chronic liver failure,ACLF）是我國常見的肝臟疾病,嚴(yán)重危害人類的身體健康,因此ACLF的防治備受人們關(guān)注。本學(xué)位論文首先基于核磁共振（~1HNMR）的代謝組學(xué)技術(shù)尋找ACLF患者預(yù)后血清差異代謝物。在此基礎(chǔ)上,利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（Ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS）技術(shù)對代謝差異物進(jìn)一步定量分析,篩選ACLF患者預(yù)后生物標(biāo)志物。方法:1.采用~1HNMR的非靶標(biāo)代謝組學(xué)技術(shù)對127例28天死亡（n=42）與存活（n=85）的ACLF患者的血清進(jìn)行檢測,利用多元統(tǒng)計(jì)模型分析,篩選出能區(qū)分ACLF患者死亡與存活組間的特征的差異代謝物。2.建立和確定生物樣品中膽堿、嘌呤類含量的UPLC-MS/MS定量分析檢測方法。用乙腈對血液樣品進(jìn)行蛋白沉淀,以ZIC-HILIC親水色譜柱,10mmol/ml乙酸銨-0.01%甲酸溶液為流動相采用梯度洗脫,對ACLF死亡與存活患者組的血清差異性代謝進(jìn)行目標(biāo)代謝檢測。3.建立... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 慢加急性肝衰竭簡介
    1.2 代謝組學(xué)研究概況
    1.3 本論文研究思路
第2章 ACLF不同預(yù)后患者血清1HNMR代謝組學(xué)研究
    2.1 試劑與儀器
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)研究對象及樣本收集
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)用溶液的配制
        2.2.3 ACLF血清處理方法
        2.2.4 NMR數(shù)據(jù)采集
        2.2.5 ~1H NMR數(shù)據(jù)預(yù)處理
        2.2.6 ~1H NMR統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 ACLF患者血清~1H NMR圖譜及PCA分析
        2.3.2 兩種歸一化方法的PLS-DA模型分析
        2.3.3 total歸一化法的ACLF血清差異代謝物及代謝通路圖分析
        2.3.4 肌酐校準(zhǔn)歸一化法的ACLF血清差異代謝物分析
        2.3.5 肌酐校準(zhǔn)歸一化法的ACLF患者血清差異代謝物預(yù)后ROC分析
        2.3.6 Logistic診斷模型篩選診斷效能最佳的生物標(biāo)志物
    2.4 討論
第3章 血清膽堿、嘌呤和膽汁酸定量檢測及其與ACLF患者生存期ROC分析
    3.1 材料和儀器
        3.1.1 材料
        3.1.2 儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        第一節(jié) 血清中膽堿類代謝物定量分析
            1.1 膽堿類實(shí)驗(yàn)儲備液的配制
            1.2 膽堿類樣本前處理
            1.3 膽堿類標(biāo)準(zhǔn)曲線配置
            1.4 膽堿類檢測方法和檢測條件
            1.5 膽堿類統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
            1.6 結(jié)果與分析
                1.6.1 UPLC-MS/MS對膽堿差異代謝物定量分析
                1.6.2 UPLC-MS/MS對膽堿差異代謝物ROC分析
        第二節(jié) 嘌呤類代謝物定量分析
            2.1 嘌呤類實(shí)驗(yàn)儲備液的配制
            2.2 嘌呤類樣本前處理
            2.3 嘌呤類標(biāo)準(zhǔn)曲線配置
            2.4 嘌呤類檢測方法和檢測條件
            2.5 嘌呤類統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
            2.6 結(jié)果與分析
                2.6.1 UPLC-MS/MS對嘌呤類差異代謝物定量分析
                2.6.2 UPLC-MS/MS對嘌呤類差異代謝物ROC分析
        第三節(jié) 血膽汁酸類代謝物定量分析
            3.1 膽汁酸類實(shí)驗(yàn)儲備液的配制
            3.2 膽汁酸類樣本前處理
            3.3 膽汁酸類標(biāo)準(zhǔn)曲線配置
            3.4 膽汁酸類檢測方法和檢測條件
            3.5 膽汁酸類統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
            3.6 結(jié)果與分析
                3.6.1 ACLF患者血清不同預(yù)后結(jié)果膽汁酸含量
                3.6.2 ACLF患者血清膽汁酸類代謝物不同預(yù)后結(jié)果ROC分析
        第四節(jié) 整合膽堿、嘌呤和膽汁酸定量數(shù)據(jù)篩選ACLF患者預(yù)后生物標(biāo)志物
            4.1 利用Logistic模型篩選ACLF患者預(yù)后血清生物標(biāo)志物組
            4.2 逐步判別分析篩選ACLF患者預(yù)后血清生物標(biāo)志物組
第4章 ACLF患者尿液中蝶呤類差異代謝物分析及其作為預(yù)后標(biāo)志物的價(jià)值研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.1.1 蝶呤類實(shí)驗(yàn)檢測對象及樣品收集
        4.1.2 蝶呤類實(shí)驗(yàn)儲備液的配制
        4.1.3 蝶呤類尿液樣本前處理
        4.1.4 蝶呤類標(biāo)準(zhǔn)曲線配置
        4.1.5 蝶呤類加樣回收率方法
        4.1.6 蝶呤類檢測方法和檢測條件
        4.1.7 蝶呤類方法學(xué)驗(yàn)證
        4.1.8 人體尿液樣品中蝶呤類物質(zhì)含量測定
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 色譜條件的優(yōu)化
        4.2.2 分析方法的確定
        4.2.3 人體尿液樣品中蝶呤類物質(zhì)含量測定
        4.2.4 Logistic診斷模型篩選診斷效能最佳的生物標(biāo)志物
    4.3 討論
第5章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]生殖遺傳技術(shù)預(yù)防線粒體遺傳病的研究進(jìn)展[J]. 紀(jì)冬梅,曹云霞.  國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志. 2020(02)
[4]大劑量甲氨蝶呤治療兒童急性淋巴細(xì)胞白血病不良反應(yīng)的臨床分析[J]. 孫會靜,代艷,韋彤彤.  中國醫(yī)院藥學(xué)雜志. 2020(04)
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碩士論文
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[2]不同藥物對NH4Cl誘導(dǎo)的肝細(xì)胞模型能量代謝影響[D]. 呂元君.鄭州大學(xué) 2015



本文編號：3672923