發(fā)布時間：2022-01-05 15:55

　　背景:急性肝衰竭（Acute liver failure,ALF）是嚴(yán)重的突發(fā)性肝損傷,可由多種原因引起,過量攝入對乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）是其中的常見病因。APAP可通過耗竭細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的方式直接損傷肝細(xì)胞,導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡。壞死的肝細(xì)胞釋放大量的損傷相關(guān)分子模式,激活以肝巨噬細(xì)胞為主的一系列免疫細(xì)胞,調(diào)節(jié)整個病理過程。PGE2,作為人體內(nèi)的各種前列腺素中含量最為豐富的一種,在生物體中的分布最為廣泛,具有多種生物學(xué)活性。在炎癥過程時,PGE2可發(fā)揮促炎或抑炎作用,其最終作用取決于細(xì)胞類型、局部的PGE2濃度、受體類型及組織微環(huán)境。研究報道,PGE2在半乳糖胺/脂多糖、APAP和四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝衰竭模型中均表現(xiàn)出了顯著的緩解作用。但是,PGE2緩解APAP誘導(dǎo)急性肝衰竭的機制仍不明晰。目的:明確dmPGE2對APAP誘導(dǎo)的小鼠ALF的緩解作用;探討PGE2在APAP誘導(dǎo)小鼠ALF過程中調(diào)控巨噬細(xì)胞功能的作用及其機制;構(gòu)建APAP誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷模型,探討PGE2對APAP損傷肝細(xì)胞的緩解作用及機制。方法:（1）建立APAP誘導(dǎo)ALF小鼠模型,設(shè)生理鹽水對照組... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RTCA實時無標(biāo)記細(xì)胞功能分析儀原理圖

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文實驗方法16(1)將細(xì)胞以1×10^6/mL細(xì)胞密度種于6孔板，在細(xì)胞匯合度為70%–90%的時候轉(zhuǎn)染；(2)每孔使用125μLDMEM培養(yǎng)基稀釋7.5μLLipofectamine3000試劑，充分混勻;(3)每孔使用125μLDMEM培養(yǎng)基稀釋2.5μg的質(zhì)粒，制備質(zhì)粒預(yù)混液，同時添加5μLP3000試劑，充分混勻；(4)在每管已稀釋的Lipofectamine3000試劑以1:1比例加入P3000稀釋的DNA；(5)在室溫條件下孵育10–15分鐘；(6)將質(zhì)粒-脂質(zhì)復(fù)合物加至細(xì)胞中，6孔板每孔加入孵育后混合液250μL。圖S2EP4/陰性對照過表達(dá)載體質(zhì)粒圖譜3.13統(tǒng)計分析本文中的計量數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）或平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示。用t檢驗對兩個獨立樣本組間進行統(tǒng)計比較，兩側(cè)的p值小于0.05可認(rèn)為兩組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。統(tǒng)計分析和圖表制作均在GraphPadPrism7（GraphPadSoftware）軟件上進行。。

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文實驗結(jié)果174.實驗結(jié)果4.1建立APAP誘導(dǎo)的ALF小鼠模型用不同劑量的對乙酰氨基酚（APAP）和作用時間來建立適合的APAP誘導(dǎo)小鼠ALF模型�？刂谱兞堪�3點：APAP注射濃度（總液體注射體積），APAP注射劑量，APAP作用時間。選取合適的APAP濃度和作用時間點。I.APAP注射濃度對模型的影響用500mg/kgAPAP劑量，作用5.5小時作為起始標(biāo)準(zhǔn)，分別用總液體注射體積1.5mL、500μL對小鼠進行腹腔注射，對照組為500μL生理鹽水腹腔注射。每組各3只，作用5.5h后各組無小鼠死亡，取外周血血清檢測AST及ALT。結(jié)果顯示1.5mL組ALT上升明顯（p<0.01），AST上升不明顯；500μL組AST、ALT上升均明顯（p<0.0001），且遠(yuǎn)高于1.5mL組（圖1）。因AST存在于肝細(xì)胞線粒體中而ALT存在于肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，ALT上升顯著而AST上升輕微提示1.5mL組肝損傷狀況較輕。所以設(shè)置之后的實驗，總液體注射體積（包括PGE2與拮抗劑）在500μL左右。圖1不同注射劑量對APAP誘導(dǎo)小鼠ALF的轉(zhuǎn)氨酶的影響檢測來自control（n=3），1.5mL注射組（n=3）和500μL注射組（n=3）的外周血AST與ALT水平。所有樣本均用自動生化分析儀檢測。數(shù)值用平均值±SD表示。誤差條表示SD。統(tǒng)計方法采用獨立樣本t檢驗。ns沒有統(tǒng)計學(xué)差異，*p<0.05，**p<0.01，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]mPGES-1 expression in non-cancerous liver tissue impacts on postoperative recurrence of HCC[J]. Koichi Nonaka,Hikaru Fujioka,Yasushi Takii,Seigo Abiru,Kiyoshi Migita,Masahiro Ito,Takashi Kanematsu,Hiromi Ishibashi.  World Journal of Gastroenterology. 2010(38)
[2]Cyclooxygenases in hepatocellular carcinoma[J]. Melchiorre Cervello,Giuseppe Montalto.  World Journal of Gastroenterology. 2006(32)
[3]實驗性暴發(fā)性肝衰竭中腫瘤壞死因子α與肝細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J]. 王玉梅,馮國和,李穎,趙桂珍,喬光彥.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2002(06)

碩士論文
[1]內(nèi)毒素誘導(dǎo)D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究[D]. 羅杰.南昌大學(xué) 2007



本文編號：3570638