發(fā)布時(shí)間：2021-08-30 01:31

　　目的通過在體和離體實(shí)驗(yàn),探討膿毒癥發(fā)生時(shí)PLK1與mTOR、自噬之間的相互調(diào)控關(guān)系,并對(duì)其在腸屏障功能障礙中的作用及機(jī)制進(jìn)行研究。方法在體實(shí)驗(yàn):取發(fā)育良好的六周齡雌性C57小鼠30只,隨機(jī)分成3組（n=10）:假手術(shù)組（SHAM）、膿毒癥組（CLP）和PKI膿毒癥組（PLK1轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行CLP造模）,采取CLP（Cecal Ligation and Puncture,盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)）制備膿毒癥模型,對(duì)照組打開腹腔,不進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)。造模后24h處死取血進(jìn)行Elisa檢測(cè)血清TNF-α水平,然后取近盲端小腸5cm,分別進(jìn)行組織包埋、切片、HE染色,觀察小腸組織病理學(xué)改變。小腸上皮細(xì)胞p-mTOR、自噬分子Lc3、p62使用免疫組化進(jìn)行測(cè)定。PLK1及小腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、occuludin使用western blot進(jìn)行測(cè)定。離體實(shí)驗(yàn):結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460作為模式細(xì)胞,使用LPS（30μg/ml）處理36h后收取細(xì)胞檢測(cè)PLK1、p-mTOR、自噬分子Lc3、p62以及細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、occuludin等的蛋白表達(dá)變化;同樣的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行CO-IP（免疫... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1兩組小鼠在行為學(xué)及血清炎癥因圖1（A）兩組小鼠行為學(xué)比較圖

圖2（A）兩組小鼠腸組織HE染色

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文26andpiloerection;Aclearpurulenteffusioncanbeseenaftertheabdominalcavity,andtheintestinalwallisweakandeasilybroken.B.ElisadetectionofthetwogroupsofserumobtainedbycentrifugationshowedthatthecontentofCLPgroupinthetumornecrosisfactorTNF-αwassignificantlyhigherthanthatintheshamoperationgroup（n=10，p＜0.001）.二、小鼠CLP造模術(shù)后24小時(shí)，腸組織損傷明顯將4周齡的雌性C57小鼠分成兩組，每組10只，進(jìn)行CLP盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)，24小時(shí)后處死取腸組織，其中各組取5只進(jìn)行HE染色，觀察小腸組織形態(tài)學(xué)改變；其余5只使用組織研磨器研磨，并使用變形蛋白裂解液裂解提取蛋白，進(jìn)行Westernblot檢測(cè)。結(jié)果表明CLP組小鼠小腸組織絨毛明顯萎縮脫落，形態(tài)完整性遭到破壞；而Westernblot檢測(cè)顯示CLP組小鼠小腸組織內(nèi)細(xì)胞間緊密連接蛋白ZO-1和occludin的表達(dá)明顯下調(diào)，進(jìn)一步說明了CLP造模后小鼠表現(xiàn)出顯著的腸組織損傷。同時(shí)伴隨著PLK1的表達(dá)下調(diào)，可能與腸組織損傷機(jī)制有關(guān)（圖2）。圖2小鼠進(jìn)行CLP造模術(shù)后24小時(shí)小腸組織明顯受損A.小鼠造模后24小時(shí)，處死取小腸組織進(jìn)行HE染色，觀察小腸上皮組織形態(tài)學(xué)改變。B.操作同上，將小腸組織取出提取蛋白并進(jìn)行Westernblot檢測(cè)PLK1、ZO-1、occludin的表達(dá)，GAPDH為內(nèi)參對(duì)照。圖2（A）兩組小鼠腸組織HE染色圖2（B）兩組小鼠腸組織緊密連接蛋白WB檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大黃素改善膿毒癥腸機(jī)械屏障損傷的研究進(jìn)展[J]. 李艷君,郭瑞敏,孫燕妮.  中國中醫(yī)急癥. 2019(03)
[2]膿毒癥的腸道發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 金鵬鋒,陳琳,胡耀仁,蔡挺.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2018(10)
[3]膿毒癥與胃腸道功能損傷的關(guān)系及研究進(jìn)展[J]. 張俊亮,曾其毅.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2016(17)
[4]Genetic factors that affect nonalcoholic fatty liver disease: A systematic clinical review[J]. Tyler J Severson,Siddesh Besur,Herbert L Bonkovsky.  World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[5]慢重癥患者腸屏障功能的維護(hù)[J]. 吳秀文,任建安,黎介壽.  中華胃腸外科雜志. 2016 (07)
[6]保羅樣激酶PLK1與腫瘤預(yù)后及治療研究進(jìn)展[J]. 蔣思明,王朝霞.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2013(03)
[7]膿毒癥定義及診斷的新認(rèn)識(shí)[J]. 姚詠明,盛志勇,林洪遠(yuǎn),柴家科.  中國危重病急救醫(yī)學(xué). 2004(06)

碩士論文
[1]PLK1調(diào)節(jié)NF-κB通路在膿毒癥腸屏障功能障礙中的作用[D]. 曹迎亞.皖南醫(yī)學(xué)院 2015



本文編號(hào)：3371785