肺泡巨噬細(xì)胞在膿毒癥誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）的發(fā)展中起關(guān)鍵作用。最近的證據(jù)表明,糖酵解通過代謝重編程在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化中起重要作用。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）通過分泌外泌體（exosome）可減輕膿毒癥引起的肺損傷,并具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制作用。然而,目前尚不清楚BMSCs來(lái)源的外泌體是否通過抑制巨噬細(xì)胞糖酵解而發(fā)揮其對(duì)膿毒癥肺損傷的保護(hù)作用。因此,本研究旨在評(píng)價(jià)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)膿毒癥小鼠急性肺損傷的抗炎作用,并探討其可能的體內(nèi)外機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)BMSCs通過釋放外泌體抑制MH-S細(xì)胞（小鼠肺泡巨噬細(xì)胞系）的M1極化并促進(jìn)M2極化。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明,BMSCs外泌體通過抑制巨噬細(xì)胞糖酵解來(lái)調(diào)控LPS作用下MH-S細(xì)胞的極化。此外,我們的研究結(jié)果表明,BMSCs來(lái)源的外泌體通過抑制HIF-1α的表達(dá)水平進(jìn)而下調(diào)糖酵解中幾個(gè)重要蛋白的表達(dá)。最后,我們建立了膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠ARDS模型,發(fā)現(xiàn)BMSCs來(lái)源的外泌體改善了LPS... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠BMSCs的特征A：原代BMSCs形態(tài)（標(biāo)尺=50μm）；B：CD90陽(yáng)性；C：CD34陰性；D：BMSCs分化成骨細(xì)胞；E：BMSCs分化成軟骨細(xì)胞；F：BMSCs分化成脂肪細(xì)胞（標(biāo)尺=20μm）

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文27表達(dá)水平。如圖2A-F所示，與CON組相比，LPS組中IL-1β，IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá)顯著上調(diào)，并呈時(shí)間依賴性，而Ym1，CD206和Arg1的mRNA表達(dá)下調(diào)，亦呈時(shí)間依賴性（P＜0.01）。此外，LPS對(duì)MH-S細(xì)胞極化的影響在24h最為顯著。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)的時(shí)間節(jié)點(diǎn)選擇在LPS刺激24h。圖2LPS促進(jìn)肺泡巨噬細(xì)胞系MH-S細(xì)胞的M1極化并抑制M2極化。實(shí)時(shí)定量PCR顯示，LPS以時(shí)間依賴性方式顯著增加MH-S細(xì)胞中IL-1β（A），IL-6（B）和TNF-α（C）的表達(dá)，降低Ym-1（D），CD206（E）和Arg1（F）的表達(dá)水平。β-actin作為內(nèi)參。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD（n=6）。與對(duì)照組相比，**P<0.01。Fig.2LPSpromotedM1polarizationandinhibitedM2polarizationinalveolarmacrophagelineMH-Scells.Real-timeqPCRshowedthatLPSsignificantlyincreasedtheexpressionofIL-1β(A),IL-6(B)andTNF-α(C)inMH-Scellsinatimedependent-manner.Incontrast,theexpressionlevelsofYm-1(D),CD206(E)andArg1(F)inMH-ScellswerereducedateachtimepointafterLPStreatment.AllmRNAlevelswerenormalizedtothelevelofβ-actinmRNA.Thedataareexpressedasthemeans±SD(n=6ineachgroup).**P<0.01versustheControlgroup.隨后，我們將BMSCs與MH-S細(xì)胞共培養(yǎng)24h。BMSCs與MH-S細(xì)胞共培養(yǎng)抑制了LPS刺激后MH-S細(xì)胞中IL-1β，IL-6和TNF-α的基因表達(dá)（圖3A-C）而Ym1，CD206和Arg1的表達(dá)顯著增加（圖3D-F）（P＜0.01）。以上這些數(shù)據(jù)表明，BMSCs可抑制巨噬細(xì)胞向M1型極化而促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化，并對(duì)LPS刺激的MH-S細(xì)胞產(chǎn)生抗炎作用。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文28圖3BMSCs抑制LPS刺激的肺泡巨噬細(xì)胞系MH-S細(xì)胞向M1型極化并促進(jìn)向M2型極化。實(shí)時(shí)定量PCR顯示，LPS顯著增加MH-S細(xì)胞中IL-1β（A），IL-6（B）和TNF-α（C）的表達(dá)，降低Ym-1（D），CD206（E）和Arg1（F）的表達(dá)水平。BMSCs共培養(yǎng)可降低LPS刺激的MH-S細(xì)胞中IL-1β（A），IL-6（B）和TNF-α（C）的表達(dá)，增加Ym-1（D），CD206（E）和Arg1（F）的表達(dá)水平。β-actin作為內(nèi)參。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD（n=6）。與對(duì)照組相比，**P<0.01；與LPS組相比，##P<0.01。Fig.3BMSCsamelioratedM1polarizationandpromotedM2polarizationinLPS-treatedMH-Scells.Real-timeqPCRshowedthatLPSsignificantlyincreasedtheexpressionofIL-1β(A),IL-6(B)andTNF-α(C)inMH-Scells.Incontrast,theexpressionlevelsofYm-1(D),CD206(E)andArg1(F)inMH-ScellsweredecreasedafterLPStreatment.BMSCsco-culturereducedtheexpressionofIL-1β(A),IL-6(B)andTNF-α(C)inLPS-treatedMH-Scells.Incontrast,theexpressionlevelsofYm-1(D),CD206(E)andArg1(F)inLPS-treatedMH-Scellswereincreasedafterco-culturewithBMSCs.AllmRNAlevelswerenormalizedtothelevelofβ-actinmRNA.Thedataareexpressedasthemeans±SD(n=6ineachgroup).**P<0.01versustheControlgroup;##P<0.01versustheLPSgroup.3.3骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過分泌外泌體對(duì)LPS刺激的MH-S細(xì)胞產(chǎn)生抗炎作用近年來(lái)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，BMSCs可以通過分泌外泌體來(lái)發(fā)揮抗炎作用[38]。因此，在隨后的研究中，我們首先觀察到了BMSCs來(lái)源的外泌體（BMSCs-exo）對(duì)LPS處理的MH-S細(xì)胞的影響。GW4869是目前已知的可抑制外泌體釋放的中


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