目的:探討R18多肽聯(lián)合亞低溫通過抑制細(xì)胞自噬對顱腦創(chuàng)傷（Traumatic Brain Injury,TBI）后神經(jīng)元的保護(hù)作用及機(jī)制。方法:1)原代分離培養(yǎng)E18-19 SD大鼠皮質(zhì)層神經(jīng)元細(xì)胞并將細(xì)胞分組:對照組和谷氨酸誘導(dǎo)組。用免疫熒光對原代分離的神經(jīng)元進(jìn)行鑒定;用MTS檢測細(xì)胞谷氨酸誘導(dǎo)72h后細(xì)胞的活力改變。采用落體打擊的方法建立SD大鼠TBI模型,對照組不予以撞擊。在模型建立72h和12d后剝離大鼠腦組織并采用Nissl染色來檢測神經(jīng)元細(xì)胞的損失;從模型建立后第一天開始采用釘板平衡木行走測試對大鼠的行為學(xué)進(jìn)行檢查;同時對大鼠神經(jīng)功能缺損進(jìn)行評分（modified neurological severity scores,mNSS）;2)將細(xì)胞分為五組:分別為對照組、谷氨酸處理組、亞低溫處理組（32.0?0.5℃）、R18多肽處理組以及亞低溫聯(lián)合R18多肽處理組。對照組不施加任何處理因素,谷氨酸處理組為用谷氨酸處理并誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞損傷組,亞低溫處理組、R18多肽處理組以及亞低溫聯(lián)合R18多肽處理組為在谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞損傷時分別施加對應(yīng)的處理因素組,同時,R18多肽設(shè)置四... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

神經(jīng)元的分離、鑒定以及谷氨酸誘導(dǎo)Figure1.1Isolation，identificationandglutamicacidinductionofneuronsA為原代分離的神經(jīng)元細(xì)胞，B為免疫熒光鑒定（Tubulin）C為谷氨酸誘導(dǎo)后細(xì)胞活力的改變；**P＜0.01，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

圖 1.2 大鼠 TBI 模型的評估Figure 1.2 Evaluation of TBI of rats 為大鼠腦組織 Nissl 染色，B 為經(jīng) Nissle 染色后統(tǒng)計的神經(jīng)元數(shù)量，C 為行為學(xué)檢數(shù)統(tǒng)計；**P＜0.01，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。表 1.2 模型建立后不同時間點大鼠 mNSS 評分對比Table 1.2 mNSS scores change of different time point after model establishment模型建立后的時間（d）1 3 5 7 9 rol 2.6±1.1 2.8±0.8 2.8±0.8 2.6±1.1 2.4±1.3 2.6I 8.4±2.9* 13.6±2.3** 7.4±1.1* 6.3±1.5* 5.2±1.1* 4.3P＜0.05，**P＜0.01，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

亞低溫組為谷氨酸誘導(dǎo)的同時將細(xì)胞培養(yǎng)箱的溫度調(diào)整至 32 0.5℃、R18 多肽聯(lián)合亞低溫組為在谷氨酸誘導(dǎo)的同時將用 R18 多肽進(jìn)行處理并將培養(yǎng)箱的溫度調(diào)整至 32 0.5℃，72h 后，用 MTS 法檢測細(xì)胞活力，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，谷氨酸誘導(dǎo)組細(xì)胞活力明顯下降；與單純谷氨酸誘導(dǎo)組相比，亞低溫處理組和 R18 多肽處理組細(xì)胞的活力升高，且隨著 R18 濃度的升高而升高，并且，R18 多肽聯(lián)合亞低溫處理組細(xì)胞活力高于單純的亞低溫處理組和單純的 R18 多肽處理組，具體見表 2.1 圖 2.1。表 2.1 R18 多肽和亞低溫能提高神經(jīng)細(xì)胞活力Table 2.1 R18 polypeptide and hypothermia can increase nerve cell viability組別 細(xì)胞活力百分比 組別 細(xì)胞活力百分比Control 100 0 亞低溫+R18(0.2 M) 29.6 5.6*Glut 13.6 1.8##亞低溫+R18(0.5 M) 53.0 8.0*R18(0.2 M) 23.5 4.9* 亞低溫+R18(1.0 M) 79.1 4.9**R18(0.5 M) 34.5 6.3* 亞低溫+R18(2.0 M) 92.9 2.1**R18(1.0 M) 69.9 3.7** 亞低溫 35.1 6.6*R18(2.0 M) 89.4 1.2**

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃芪甲苷對谷氨酸誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用[J]. 楊岳,王陽,楊景蘭,王佐周,侯偉健.  中藥藥理與臨床. 2015(02)
[2]知母皂苷元對谷氨酸引起的皮層神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究[J]. 王琦,隋海娟,屈文慧,郁盛雪,金迎新,劉卓,金英.  中國藥理學(xué)通報. 2013(02)
[3]阿托伐他汀對谷氨酸引起大鼠神經(jīng)元損傷保護(hù)作用機(jī)制的研究[J]. 丁奇,董燕,金英,隋海娟.  中國藥理學(xué)通報. 2010(12)

博士論文
[1]鈣池調(diào)控的鈣離子內(nèi)流在高血糖誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷中的作用機(jī)制研究[D]. 徐振寬.山東大學(xué) 2016



本文編號：2896170