發(fā)布時(shí)間：2020-11-08 21:48

　　 在田徑運(yùn)動(dòng)中,短跨類(lèi)項(xiàng)目跨欄運(yùn)動(dòng)員跟腱(人體最大的肌腱,以下統(tǒng)稱(chēng)為肌腱)組織易發(fā)生損傷,且恢復(fù)慢,嚴(yán)重影響運(yùn)動(dòng)員的競(jìng)技成績(jī)和運(yùn)動(dòng)生涯,目前這成為臨床醫(yī)學(xué)和運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)主要攻克的難點(diǎn),這種損傷主要有三種機(jī)制:撕裂、拉力過(guò)載及挫傷。治療肌腱損傷的傳統(tǒng)方法包括物理療法、手術(shù)療法、冰凍療法等,但這些療法治療周期長(zhǎng),修復(fù)慢且易修復(fù)后肌腱生理功能和機(jī)械性能下降,易造成再次損傷。國(guó)務(wù)院在《國(guó)家中長(zhǎng)期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要(2006-2020)》中強(qiáng)調(diào)指出要全方位大力推進(jìn)干細(xì)胞修復(fù)運(yùn)動(dòng)損傷組織的相關(guān)技術(shù)實(shí)驗(yàn)體系;六部委聯(lián)合發(fā)布《“十三五”健康產(chǎn)業(yè)科技創(chuàng)新專(zhuān)項(xiàng)規(guī)劃》中明確要求加快干細(xì)胞與再生運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)的臨床應(yīng)用。干細(xì)胞的自我更新、高倍速增殖能力和多項(xiàng)分化潛能為個(gè)體組織發(fā)育及損傷組織再修復(fù)提供了重要理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。肌腱干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的研究為肌腱組織病理機(jī)制的探究提供了理論基礎(chǔ),同時(shí)為干細(xì)胞修復(fù)肌腱損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究運(yùn)用文獻(xiàn)資料法、數(shù)理統(tǒng)計(jì)法、專(zhuān)家訪(fǎng)談法和實(shí)驗(yàn)法等研究方法主要做了體外分離培養(yǎng)鴨胚肌腱干細(xì)胞,優(yōu)化肌腱干細(xì)胞最佳培養(yǎng)體系并建立體外擴(kuò)增培養(yǎng)技術(shù)體系,探究了肌腱干細(xì)胞的增殖、分化等一系列生物學(xué)特性和多項(xiàng)分化潛能,構(gòu)建了動(dòng)物肌腱損傷模型并用肌腱干細(xì)胞移植修復(fù),探索體內(nèi)移植后干細(xì)胞的遷移和修復(fù)作用,得到以下結(jié)論:1.使用I型膠原酶、中性蛋白酶和胰酶通過(guò)機(jī)械分離法分離鴨胚來(lái)源的肌腱干細(xì)胞,并通過(guò)加不同因子的全培養(yǎng)基純化細(xì)胞,純化后的細(xì)胞能夠在最優(yōu)培養(yǎng)體系下傳至31代,通過(guò)中代次細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存前進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,細(xì)胞仍有很強(qiáng)的增值能力;通過(guò)免疫組織化學(xué)鑒定、流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR鑒定肌腱干細(xì)胞的特異性表面標(biāo)記物,免疫熒光鑒定顯示細(xì)胞對(duì)CD44、CD105、Collagen I、Collagen III、Oct4、Tenascin-C都呈陽(yáng)性;流式細(xì)胞術(shù)顯示細(xì)胞對(duì)CD44、CD166、CollagenI、CollagenIII、Tenascin-C陽(yáng)性率都在90%以上;RT-PCR顯示細(xì)胞對(duì)CollagenI、CollagenIII、Nucleostemin、CD44、Tenascin-C特異性基因及表面抗原均呈陽(yáng)性表達(dá),表明分離的細(xì)胞為肌腱干細(xì)胞并具有干細(xì)胞特性;通過(guò)克隆能力形成、生長(zhǎng)曲線(xiàn)繪制等生物學(xué)進(jìn)行肌腱干細(xì)胞鑒定;通過(guò)不同誘導(dǎo)體系誘導(dǎo)肌腱干細(xì)胞分化成成脂細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞,誘導(dǎo)后的成脂細(xì)胞用油紅O染色呈現(xiàn)紅色脂滴,RT-PCR檢測(cè)顯示脂肪細(xì)胞特異性分子標(biāo)記LPL和PPAR-γ呈陽(yáng)性表達(dá);成骨細(xì)胞誘導(dǎo)成功后出現(xiàn)骨細(xì)胞團(tuán)并用用茜素紅染色呈陽(yáng)性,RT-PCR結(jié)果顯示成骨細(xì)胞特異性分子標(biāo)記OPN和Runx2呈陽(yáng)性表達(dá);用軟骨誘導(dǎo)液進(jìn)行誘導(dǎo)分化肌腱干細(xì)胞并用阿利新藍(lán)染色液染色呈現(xiàn)藍(lán)染色的酸性糖胺聚糖,表明形成軟骨細(xì)胞團(tuán),RT-PCR檢測(cè)到軟骨細(xì)胞特異性基因Sox9和ACAN陽(yáng)性表達(dá)。90%的hESCs分化為其他的細(xì)胞類(lèi)型或者死亡,只有10%能夠保留形成所有細(xì)胞類(lèi)型的能力,就是維持它們所謂的“干性”,以上結(jié)果表明體外分離培養(yǎng)的跟腱來(lái)源肌腱干細(xì)胞具有“干性”特征、自我增值能力和多項(xiàng)誘導(dǎo)分化潛能。2.通過(guò)I型膠原酶構(gòu)建小鼠肌腱組織損傷模型,并取樣制備石蠟和冰凍切片,結(jié)果石蠟切片顯示肌腱纖維束嚴(yán)重破壞且排列紊亂,用CM-Dil標(biāo)記過(guò)的肌腱干細(xì)胞移植到小鼠肌腱損傷部位,肌腱干細(xì)胞能夠穩(wěn)定遷移到損傷組織周?chē)⒃鲋撤只?不同時(shí)間梯度取樣分析組織及血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的連續(xù)觀察表明:細(xì)胞移植治療組損傷肌腱有較好的修復(fù);血清分析與正常組相比,肌腱干細(xì)胞移植組CK值有一定程度下降,表明肌腱干細(xì)胞可以修復(fù)受損的肌腱組織�？傊�,本實(shí)驗(yàn)研究了跨欄運(yùn)動(dòng)員肌腱組織損傷,并在體外分離培養(yǎng)肌腱干細(xì)胞,對(duì)肌腱干細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行了檢測(cè)并鑒定,探索了其最佳培養(yǎng)體系。通過(guò)對(duì)肌腱干細(xì)胞進(jìn)行多項(xiàng)誘導(dǎo)分化潛能實(shí)驗(yàn)證明了肌腱干細(xì)胞具有“干性”特征,構(gòu)建肌腱干細(xì)胞修復(fù)小鼠肌腱損傷動(dòng)物模型,為臨床應(yīng)用基于以干細(xì)胞夯實(shí)基礎(chǔ)的細(xì)胞療法治療肌腱運(yùn)動(dòng)損傷和促進(jìn)肌腱組織再生提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：牡丹江師范學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R686.1
【部分圖文】：

P0～P31鴨TDSCs形態(tài)（40×）

三種培養(yǎng)體系的細(xì)胞倍增時(shí)間對(duì)比

鴨TDSCs凍存前和復(fù)蘇后細(xì)胞形態(tài)
【參考文獻(xiàn)】

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1 宮媛;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠胃癌前病變模型的干預(yù)和機(jī)制的初步探討[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

2 陳曉;胚胎干細(xì)胞與蠶絲—膠原支架促進(jìn)肌腱再生的研究[D];浙江大學(xué);2010年

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3 程娟;2015-2016冬訓(xùn)期陜西省跆拳道隊(duì)重點(diǎn)運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能生化指標(biāo)監(jiān)測(cè)及評(píng)價(jià)[D];西安體育學(xué)院;2017年

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6 齊方園;遼寧省優(yōu)秀田徑運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)損傷成因及預(yù)防對(duì)策研究[D];遼寧師范大學(xué);2015年

7 王聰;河南省高校高水平田徑運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)損傷因素調(diào)查研究[D];四川師范大學(xué);2013年

8 牛書(shū)彬;河北省跨欄跑運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)損傷現(xiàn)狀及預(yù)防措施研究[D];河北師范大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2875396