【摘要】：近年來,隨著海洋環(huán)境變化和人類生產(chǎn)生活等的影響,導致水母在世界范圍內(nèi)暴發(fā)的現(xiàn)象頻繁發(fā)生,水母蜇傷已成為人們重點關(guān)注的公共安全問題之一。水母皮炎是水母蜇傷后的主要臨床反應(yīng),炎癥反應(yīng)伴隨了水母皮炎的整個過程,嚴重影響了人們的日常生活和健康。由于水母毒素成分的復(fù)雜多樣,使得至今未能有治療水母皮炎的有效藥物。通過對水母毒素的組學研究,表明水母毒素中含有豐富的金屬蛋白酶成分,研究表明,金屬蛋白酶成分在陸生動物的毒液中發(fā)揮了重要的作用。因此,本文以中國常見的大型蜇人水母—沙海蜇為研究對象,分別從體外和體內(nèi)層面,通過基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑對毒素誘導的炎癥反應(yīng)的抑制作用,研究了金屬蛋白酶對水母皮炎的生物學效應(yīng),主要結(jié)果如下:1.體外水平的研究表明,沙海蜇毒素能夠顯著降低細胞的存活率,并且能通過促進細胞凋亡導致細胞死亡;毒素作用于兩種皮膚細胞和兩種炎癥模型細胞時,細胞中的三種炎癥因子IL-6、MCP-1和TNF-α的基因表達水平和蛋白表達水平都顯著增高,說明毒素能夠刺激細胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。當金屬蛋白酶抑制劑BMT和EDTA與沙海蜇毒素反應(yīng)后,能夠顯著降低毒素對細胞的毒性作用,提高細胞的存活率,細胞中的炎癥因子的含量也顯著下降。說明沙海蜇毒素中的金屬蛋白酶在炎癥的發(fā)生過程中起重要作用。2.體內(nèi)研究表明,沙海蜇毒素能夠刺激小鼠體內(nèi)兩種炎癥細胞-淋巴細胞和白細胞的產(chǎn)生,以及三種炎癥因子IL-6、MCP-1和TNF-α的表達顯著增加。皮膚組織病理切片表明沙海蜇毒素導致小鼠皮膚組織中炎癥細胞的含量明顯增多;而金屬蛋白酶抑制劑與毒素作用后,皮膚組織中炎癥細胞的含量減少,表明沙海蜇毒素中金屬蛋白酶具有致炎作用。3.沙海蜇毒素的肌肉毒性實驗表明,沙海蜇毒素能夠?qū)е聶C體中乳酸脫氫酶和肌酸激酶活性的顯著升高,可能會造成肌肉組織損傷,而金屬蛋白酶抑制劑作用后的毒素對機體中乳酸脫氫酶和肌酸激酶的活性顯著降低,說明金屬蛋白酶在沙海蜇毒素的肌肉毒性中發(fā)揮了重要作用。
【學位授予單位】：中國科學院大學(中國科學院海洋研究所)
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R646
【圖文】：

然后向試管中加入０．５邋ｍＬ的福林酚乙液，搖勻后放置３０邋ｍｉｎ。反應(yīng)都在室溫條逡逑件下進行，每組設(shè)定三個平行。然后用不含ＢＳＡ的空白管調(diào)零，用分光光度計逡逑測定每管溶液在５００邋ｎｍ處的吸光值（Ｏ．Ｄ５0Ｇｎｍ）。繪制如圖２．１所示的蛋白濃度逡逑標準曲線，通過待測樣的吸光值即可求出沙海蜇毒素中的蛋白濃度。逡逑０．３逡逑０．２５逡逑Ｉ＂逡逑Ｇ邋＇邐７邋Ｙ邋＝邋０．００１邋＊Ｘ＋０．０００８逡逑６逡逑０１邐Ｒ２邋＝邋０．９９９１逡逑０．０５邐ｊＴ逡逑ｏｋ－邐逡逑０邐５０邐１００邐１５０邐２００邐２５０邐３００逡逑Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（卩ｇ／ｍＬ）逡逑圖２．１邋ＢＳＡ蛋白標準曲線逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋Ｔｈｅ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＢＳＡ邋ｓｔａｎｄａｒｄ逡逑２．邋１．２．４細胞培養(yǎng)逡逑丨）溶液配制：逡逑細胞培養(yǎng)基：逡逑人角質(zhì)形成細胞ＨａＣａＴ培養(yǎng)基：添加］０邋％胎牛血清的ＭＥＭ－ＥＢＳＳ培養(yǎng)基；逡逑人胚胎成纖維細胞ＣＣＣ－ＥＳＦ－１培養(yǎng)基：添加

逑少而無法收集，因此，選擇細胞存活率在５０％－６０％的沙海蜇毒素濃度進行后續(xù)逡逑金屬蛋白酶抑制劑的細胞實驗，由圖２．２的結(jié)果可知，濃度為５０邋ｉｉｇ／ｍＬ。逡逑■邋ＨａＣａＴ逡逑１２０邋ｎ邐ＣＣＣ－ＥＳＦ－１逡逑ＲＡＷ邋２６４．７逡逑ＨＵＶＥＣ逡逑１00邋－邐－邋Ｔ邋Ｉ邋ｔ逡逑ｔＴｔ逡逑＇ｔＴｔ逡逑Ｔ邋丁邐＊逡逑孑邋８。－邐Ｔ邋＊邋Ｔ逡逑５邐＊Ｔ逡逑６0邋＿邐＊＊＊＊邋Ｔ逡逑１邐－ｒ逡逑＾邐ｉｒｋ逡逑Ｃ邐＊＊邋Ｔ逡逑３邐４0邋．邐＊＊ｔ邋Ｉ逡逑（ｆ）邐４Ｕ邐｜逡逑２0－邐｜邋＊＊＊逡逑上逡逑ｕ邋￣￣ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｒ邐—ｉ邐＼逡逑０邐５邐１０邐１５邐２５邐５０邐１００逡逑ＮｎＮＶ邋Ｄｏｓｅ邋（ｐｇ／ｍＬ）逡逑圖２．２沙海蜇毒素對細胞存活率的影響逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮｎＮＶ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌｓ逡逑２．邋１．３．２細胞凋亡逡逑細胞凋亡是細胞程序性死亡的一種模式，能夠調(diào)節(jié)細胞功能以維持生物體內(nèi)逡逑環(huán)境的穩(wěn)定（Ｅｌｍｏｒｅ，２０丨７），但是，大量的細胞凋亡不僅會阻礙細胞間的交流與逡逑合作，也會導致內(nèi)環(huán)境的紊亂，影響生物體的機體平衡。近幾年一些研究表明水逡逑母毒素可以通過促進癌細胞凋亡從而誘導癌細胞死亡（Ｈａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０Ｉ７；邋Ｑｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，逡逑２０１６），具有潛在的抗癌活性，但是很少有水母毒素誘導皮膚細胞凋亡的研究。逡逑圖２．２的結(jié)果表明沙海蜇毒素能夠促進細胞大量死亡

逑少而無法收集，因此，選擇細胞存活率在５０％－６０％的沙海蜇毒素濃度進行后續(xù)逡逑金屬蛋白酶抑制劑的細胞實驗，由圖２．２的結(jié)果可知，濃度為５０邋ｉｉｇ／ｍＬ。逡逑■邋ＨａＣａＴ逡逑１２０邋ｎ邐ＣＣＣ－ＥＳＦ－１逡逑ＲＡＷ邋２６４．７逡逑ＨＵＶＥＣ逡逑１00邋－邐－邋Ｔ邋Ｉ邋ｔ逡逑ｔＴｔ逡逑＇ｔＴｔ逡逑Ｔ邋丁邐＊逡逑孑邋８。－邐Ｔ邋＊邋Ｔ逡逑５邐＊Ｔ逡逑６0邋＿邐＊＊＊＊邋Ｔ逡逑１邐－ｒ逡逑＾邐ｉｒｋ逡逑Ｃ邐＊＊邋Ｔ逡逑３邐４0邋．邐＊＊ｔ邋Ｉ逡逑（ｆ）邐４Ｕ邐｜逡逑２0－邐｜邋＊＊＊逡逑上逡逑ｕ邋￣￣ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｒ邐—ｉ邐＼逡逑０邐５邐１０邐１５邐２５邐５０邐１００逡逑ＮｎＮＶ邋Ｄｏｓｅ邋（ｐｇ／ｍＬ）逡逑圖２．２沙海蜇毒素對細胞存活率的影響逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮｎＮＶ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌｓ逡逑２．邋１．３．２細胞凋亡逡逑細胞凋亡是細胞程序性死亡的一種模式，能夠調(diào)節(jié)細胞功能以維持生物體內(nèi)逡逑環(huán)境的穩(wěn)定（Ｅｌｍｏｒｅ，２０丨７），但是，大量的細胞凋亡不僅會阻礙細胞間的交流與逡逑合作，也會導致內(nèi)環(huán)境的紊亂，影響生物體的機體平衡。近幾年一些研究表明水逡逑母毒素可以通過促進癌細胞凋亡從而誘導癌細胞死亡（Ｈａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０Ｉ７；邋Ｑｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，逡逑２０１６），具有潛在的抗癌活性，但是很少有水母毒素誘導皮膚細胞凋亡的研究。逡逑圖２．２的結(jié)果表明沙海蜇毒素能夠促進細胞大量死亡

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉萍;張學雷;宋洪軍;龐敏;;我國海域常見有毒水母的分類檢索[J];海洋科學進展;2013年02期

2 洪惠馨,李福振,林利民,應(yīng)敏;我國常見的有毒海洋腔腸動物[J];集美大學學報(自然科學版);2004年01期

本文編號：2791961