【摘要】：中文摘要 第一部分慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者IL-33和ST2測定的臨床價值研究背景乙型肝炎病毒(HBV)感染是一個全球公共衛(wèi)生問題,估計在世界范圍內(nèi)有3.5億人是慢性乙型肝炎病毒感染者。HBV感染者是肝功能迅速惡化和進(jìn)展為慢加急性乙型肝炎肝衰竭(ACHBLF)的高危人群,而且ACHBLF患者死亡率高。亞洲屬于HBV感染高發(fā)地區(qū),ACHBLF占急性肝衰竭(ACLF)的70%以上,每年近120000患者死于ACHBLF。迄今為止ACHBLF發(fā)病機(jī)理仍不完全清楚,越來越多的證據(jù)表明促炎細(xì)胞因子可能在ACHBLF患者發(fā)病過程中起重要作用,并加速ACHBLF患者病情進(jìn)展。白細(xì)胞介素33(IL-33)是新近發(fā)現(xiàn)的白細(xì)胞介素因子-1家族的新成員,它也被稱為高內(nèi)皮小靜脈(NF-HEV)和DVS27的細(xì)胞核因子,和IL-1受體樣配位體ST2一起,通過激活MyD88和NF-κB相關(guān)信號通路在輔助性T細(xì)胞2(Th2)相關(guān)酶聯(lián)免疫反應(yīng)中扮演重要的角色。ST2存在跨膜形式(ST2L)和可溶性形式(sST2)兩種形式。ST2L是IL-33生物活性的中介,而sST2充當(dāng)IL-33的誘餌受體。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)IL-33和sST2在急性肝損傷或慢性肝炎患者血清中過度表達(dá),因此ACHBLF患者血清IL-33和sST2也可能過度表達(dá)并且與疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān),但是ACHBLF患者血清IL-33和sST2水平和預(yù)后相關(guān)性還未有研究。研究目的探討IL-33和sST2在慢加急性乙型肝炎肝衰竭(ACHBLF)患者血清中的表達(dá)及意義。ACHBLF為慢性乙型肝炎患者由于急性誘因觸發(fā)肝臟功能衰竭,已有研究表明白細(xì)胞介素33(IL-33)和可溶性ST2(sST2)參與肝損傷過程。本研究旨在評估患者血清IL-33和sST2水平與ACHBLF的關(guān)系,明確其在ACHBLF炎性反應(yīng)過程中扮演的角色,并判斷其對ACHBLF患者預(yù)后的預(yù)測價值,為臨床診治慢加急性肝衰竭并預(yù)測ACHBLF患者預(yù)后提供新的臨床依據(jù)。研究方法研究對象為2011年9月-2013年6月齊魯醫(yī)院肝病科住院的60例慢加急性乙型肝炎肝衰竭(ACHBLF)患者、58例慢性乙型肝炎(CHB)患者和30例門診健康體檢者作為對照。ACHBLF患者診斷符合亞太肝臟研究協(xié)會(APASL)制定的標(biāo)準(zhǔn)。我們按照亞太肝臟病研究協(xié)會共識推薦給予所有的ACHBLF患者綜合內(nèi)科治療,包括常規(guī)的臥床休息、補(bǔ)充能量和維生素、靜脈應(yīng)用白蛋白、維持水電解質(zhì)和酸堿平衡、抗病毒和防治各種并發(fā)癥等,本研究當(dāng)中無一例ACHBLF患者接受肝移植治療。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(E1ISA)法檢測ACHBLF患者、CHB患者以及健康對照組外周血IL-33和sST2濃度,同時檢測ACHBLF患者、CHB患者外周血乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)載量、血清生化指標(biāo)包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)和白蛋白(ALB)；血凝標(biāo)志物包括凝血酶原活動度(PTA)。用公式r=9.57×logel：肌酐(mg/dl))+3.78×loge(膽紅素(mg/dl))+11.2×loge(INR)+6.43×(病因?qū)W：0淤膽型或酒精性,1其他原因)計算終末期肝病模型(MELD)評分評估ACHBLF的嚴(yán)重性。自ACHBLF患者確定診斷的日期開始隨訪,所有的ACHBLF患者隨訪至少3個月,記錄每個患者的結(jié)局(死亡或生存)。統(tǒng)計分析用SPSS16.0軟件包進(jìn)行；定量變量表示用中位數(shù)(第25百分位數(shù)；第75百分位數(shù))；分類變量表示用數(shù)量(或者百分比)表示；學(xué)生t檢驗、克魯斯卡爾-沃利斯檢驗和單因素方差分析來比較定量變量；卡方檢驗用于比較分類變量；應(yīng)用斯皮爾曼等級相關(guān)分析評價變量之間的相關(guān)性；用ROC曲線下面積(AUC)評估IL-33的診斷價值：sST2和終末期肝病模型(MELD)評分用來預(yù)測三個月ACHBLF患者的死亡率；靈敏性、特異性、陽性預(yù)測值(PPV)和陰性預(yù)測值(NPV)用以評估診斷準(zhǔn)確性；使用卡普蘭-邁耶方法繪制生存曲線和對數(shù)秩檢驗斷定生存率是否具有統(tǒng)計學(xué)差異；聯(lián)合應(yīng)用血清sST2和MELD評分測試它們的診斷價值；估計組合標(biāo)記物的功能使用二元邏輯回歸方程。所有的統(tǒng)計分析都是雙側(cè)的,P0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。研究結(jié)果1、ACHBLF患者和CHB患者之間HBeAg定量檢測數(shù)據(jù)比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P=0.92；x2檢驗),Log10[HBVDNA]比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P=0.71；學(xué)生t檢驗)。ACHBLF患者、CHB患者和HCs之間性別、年齡比較均無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異,分別為性別(P=0.60；x2檢驗)和年齡(P=0.33；單因素方差分析)。ACHBLF患者、CHB患者和HCs三者之間ALT、AST、TBIL、PTA、IL-33、sST2比較均有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異,分別為ALT(P0.01;克魯斯卡爾-沃利斯檢驗),AST(P0.01;克魯斯卡爾-沃利斯檢驗),TBIL(P0.01;克魯斯卡爾-沃利斯檢驗),ALB (P0.01;單因素方差分析),PTA(P0.01；克魯斯卡爾-沃利斯檢驗),IL-33(P0.01；克魯斯卡爾-沃利斯檢驗),sST2水平(P0.01；單因素方差分析)。2、血清IL-33和sST2水平在不同組間的表達(dá)(1)IL-33在不同組問的表達(dá)ACHBLF患者血清IL-33水平為313.10±419.97pg/ml,顯著高于CHB患者(97.25±174.67 pg/ml)和HCs血清IL-33水平(28.39±6.53pg/ml),ACHBLF患者與CHB患者、ACHBLF患者與HCs比較均有統(tǒng)計學(xué)極顯著性差異,P0.01。CHB患者血清IL-33水平(97.25±174.67 pg/ml),明顯高于HCs血清IL-33水平(28.39±6.53pg/ml),兩組比較有統(tǒng)計學(xué)極顯著性差異,P0.01。(2)sST2在不同組間的表達(dá)ACHBLF患者血清sST2水平為1545.87±1135.70 pg/ml,顯著高于CHB患者(152.55±93.28 pg/ml)和HCs血清sST2水平(149.27±104.90 pg/ml,兩組比較均有顯著性差異,P0.01。CHB患者血清sST2水平為152.55±93.28 pg/ml,HCs血清sST2水平為149.27±104.90 pg/ml,兩組比較無顯著性差異,P0.05。3、血清IL-33、sST2水平與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性分析(1)我們分析了所有參加研究對象的資料,對血清IL-33和sST2水平相關(guān)性進(jìn)行了分析。我們發(fā)現(xiàn)所有參與者血清IL-33水平與sST2水平成顯著正相關(guān)(斯皮爾曼等級相關(guān)分析r=0.43,P0.01)。同時,我們對ACHBLF患者血清IL-33、sST2水平與肝功能指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)性分析。其血清IL-33與ALT水平成顯著正相關(guān)(斯皮爾曼等級相關(guān)分析r=0.26,P=0.04)。血清IL-33水平和年齡、AST、TBIL、 ALB、PTA、Log10[HBVDNA]、MELD積分之間無相關(guān)性(斯皮爾曼等級相關(guān)分析分別為r=-0.23,P=0.07; r=0.23,P=0.08; r=0.05,P=0.70; r=0.19,P=0.15; r =0.21,P=0.11; r=0.17,P=0.20; r=-0.03,P=0.80)。(2)血清sST2水平與TBIL之間成顯著正相關(guān)(斯皮爾曼等級相關(guān)分析r=0.59,P0.01),血清sST2水平與Log10[HBVDNA]之間成顯著負(fù)相關(guān)(斯皮爾曼等級相關(guān)分析r=-0.47,P0.01)和血清sST2水平與MELD積分之間成顯著正相關(guān)(斯皮爾曼等級相關(guān)分析r=0.28,P=0.03)。血清sST2水平與年齡、ALT、AST、 ALB、PTA均無相關(guān)性(斯皮爾曼等級相關(guān)分析分別為r=0.08,P=0.55;r=-0.08, P=0.52; r=-0.12,P=0.38; r=0.01,P=0.93; r=-0.08,P=0.52)。4、血清IL-33和sST2水平對ACHBLF患者預(yù)后的預(yù)測價值和精確度ACHBLF患者三個月死亡率為43.33%(26/60),與患者血清TBIL、PTA、血清sST2水平和MELD積分呈顯著正相關(guān)(均P0.05)。ACHBLF患者三個月死亡率與性別、年齡、HBeAg、Log10[HBVDNA]、ALT、 AST、ALB和血清IL-33水平各自均無相關(guān)性(P0.05)。血清IL-33水平、sST2水平和MELD積分對預(yù)測ACHBLF患者3個月死亡率的預(yù)測價值以AUC方式評估。血清sST2水平的AUC是0.81(SE0.06,95%CI 0.68-0.90),而MELD積分的AUC是0.77(SE 0.06,95%CI 0.64 -0.87),血清sST2水平和MELD積分的AUC比較無顯著性差異(P=0.64)；血清IL-33水平的AUC是0.53(SE 0.08, 95%CI 0.40-0.66),顯著低于血清sST2水平和MELD積分的AUC(均P0.05)。不同的血清sST2水平分界點預(yù)測ACHBLF患者三個月死亡率的臨床價值。以受試者的臨床特征為基礎(chǔ),選擇較低的分界點分析獲得至少90%的敏感性,選擇中等分界點分析獲得最適宜的尤登指數(shù),選擇較高的分界點分析獲得至少85%的特異性。選擇較低的血清sST2分界點(sST2695pg/ml)分析顯示敏感性92%、特異性47%、陽性預(yù)測值57%、陰性預(yù)測值89%。它成功地預(yù)測了26位死亡患者中的24人。與此同時,18位血清sST2≤695 pg/ml的患者只有2人在隨訪3個月后死亡。中等分界點(血清sST21507pg/ml)分析顯示敏感性77%、特異性76%、陽性預(yù)測值71%、陰性預(yù)測值81%,在這個分界點分析獲得最適宜的尤登指數(shù)為0.53。選擇較高的分界點(血清sST21811pg/ml)分析顯示敏感性58%、特異性85%、陽性預(yù)測值75%、陰性預(yù)測值73%,它準(zhǔn)確地預(yù)測了34位存活患者中的29人。同時,20位血清sST21811pg/ml患者中的15人在隨訪3個月后死亡。ACHBLF患者的平均存活時間(從進(jìn)入醫(yī)院算起)為67.55(SE 3.80,95% CI60.09-75.01)天,與血清sST21507pg/ml的ACHBLF患者相比,血清sST21507 pg/ml的患者存活時間更短(P0.01,對數(shù)秩檢驗)。血清sST21507pg/ml的ACHBLF患者的平均存活時間(從進(jìn)入醫(yī)院算起)為51.00(SE5.69,95% CI39.86-62.15)天。血清sST21507pg/ml的ACHBLF患者的平均存活時間(從進(jìn)入醫(yī)院算起)為82.03(SE3.48,95% CI 75.22-88.84)天。為了評估聯(lián)合應(yīng)用血清sST2和MELD積分是否比單用這兩種生物學(xué)指標(biāo)中的一種更好,一種新的預(yù)測ACHBLF患者3個月死亡概率的新變量在二元邏輯斯蒂回歸方程基礎(chǔ)上獲得。新變量(sST2加MELD)=log(p/1-p)=0.01×sST2+0.238×MELD-6.59根據(jù)受試者的臨床特征分析比較sST2聯(lián)合MELD積分與單用其中一種對ACHBLF患者3個月死亡率的診斷價值。sST2聯(lián)合MELD積分曲線下面積為0.86(SE0.05,95% CI 0.74-0.93),比單用MELD積分顯著增高(P0.05)。結(jié)論我們的研究結(jié)果提示ACHBLF患者血清IL-33和sST2水平明顯升高,血清sST2水平與ACHBLF患者三個月死亡率具有顯著相關(guān)性。血清sST2水平越高,ACHBLF患者三個月死亡率越高,我們推測ACHBLF患者血清IL-33和sST2水平可以作為患者病情判斷的指標(biāo),而且sST2還可作為判斷ACHBLF患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。中文摘要第二部分慢性乙型肝炎患者IL-33和ST2測定的臨床價值研究背景白細(xì)胞介素33(IL-33)是細(xì)胞因子-1家族的新成員,誘導(dǎo)促炎因子和T輔助細(xì)胞2(Th2)相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。ST2作為IL-33的受體,能夠減弱Th2炎癥因子的反應(yīng)。乙型肝炎病毒(HBV)感染至今依然是一個世界性的健康難題。全球大約有3.5億人口存在慢性乙型肝炎病毒感染,他們是肝硬化和肝細(xì)胞癌的高危人群,大約5%的成人和90%的嬰幼兒感染HBV后進(jìn)展為慢性,很多慢性乙型肝炎(CHB)患者最終進(jìn)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌。既往的研究顯示HBV感染持續(xù)時間和炎癥慢性化取決于HBV、肝細(xì)胞和宿主免疫系統(tǒng)的相互作用,我們已知HBV感染抑制了患者的免疫系統(tǒng),實驗顯示抗原特異性Thl免疫和促炎因子在HBV相關(guān)肝損傷和病毒清除過程中起了重要的作用,慢性乙型肝炎患者血清IL-33和sST2水平升高；肝衰竭患者血清IL-33和ST2水平升高,是免疫激活的標(biāo)志或者是炎癥下調(diào)的機(jī)制；可溶性ST2對于識別急慢性肝衰竭或者監(jiān)控其病程和嚴(yán)重性具有重要作用。適應(yīng)性免疫應(yīng)答在HBV感染的清除過程中起關(guān)鍵作用是共識,但是固有免疫應(yīng)答在HBV感染過程中的作用尚不清楚,其原因為極早期無癥狀HBV感染者的招募是非常困難的。慢性乙型肝炎病毒感染包括免疫耐受期、免疫清除期、非活動低復(fù)制期和再活動期；雖然IL-33和ST2在肝衰竭患者和慢性乙型肝炎患者血清水平是升高的,但是患者血清這兩個因子的水平和慢性乙型肝炎病毒感染過程以及肝細(xì)胞損傷的相關(guān)性需要進(jìn)一步研究。研究目的白細(xì)胞介素-33(IL-33)和ST2已經(jīng)被證明與肝細(xì)胞損傷具有相關(guān)性,但是它們對于慢性乙型肝炎病毒感染者潛在的評估價值尚未完全明確。本研究通過檢測慢性乙型病毒性肝炎病毒感染者血清IL-33和ST2水平的變化,以探討其在乙型病毒性肝炎病毒感染過程中的作用機(jī)制和臨床相關(guān)性。研究方法研究對象為2012年9月至2014年5月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科和青島市傳染病醫(yī)院就診和治療的120例慢性乙型肝炎患者(CHB)、20例門診定期復(fù)查的處于免疫耐受期的慢性乙型肝炎病毒攜帶者(CHBVIT)以及28例門診健康查體者作為對照(HC)。120例CHB患者根據(jù)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平分為四組：ALT1-2倍正常上限(ALT1-2ULN)組、ALT2-5ULN組、ALT5-10ULN組、ALT10ULN組；根據(jù)血清HBeAg檢測結(jié)果分為HBeAg陰性組55人和HBeAg陽性組65人。根據(jù)試劑盒說明書應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(BUSA)法檢測所有CHB患者、CHBVIT和HC外周血IL-33和ST2濃度,同時檢測了所有研究對象的血清HBsAg, HBsAb, HBcAb, HBeAg, HBeAb和HBVDNA定量水平以及肝功能等臨床指標(biāo)。結(jié)合臨床指標(biāo),對IL-33和ST2與臨床指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行了分析。定量檢測結(jié)果應(yīng)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示.應(yīng)用SSPS19.0進(jìn)行統(tǒng)計計算。組間差異采用兩組獨立樣本資料的t檢驗進(jìn)行分析,應(yīng)用斯皮爾曼等級相關(guān)方法進(jìn)行相關(guān)性分析。所有的統(tǒng)計分析都是雙側(cè)的,P0.05為差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果1.六組研究對象在性別、年齡分布上沒有統(tǒng)計學(xué)差異。CHB患者各組血清HBVDNA水平及HBeAg陰性或者陽性數(shù)量上均沒有統(tǒng)計學(xué)差異。CHB患者血清ALT、IL-33和ST2檢測值均明顯高于CHBVIT組和HC組。2.統(tǒng)計學(xué)顯示血清ALT水平健康對照組顯著低于CHBALT1-2ULN組、ALT2-5ULN組、ALT5-10ULN組、ALT10ULN組(均為P0.0001)。健康對照組血清ALT水平與CHBVIT組血清ALT水平比較無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P=0.1047)。CHBVIT組血清ALT水平和CHB ALT1-2ULN組、ALT2-5ULN組、ALT5-10ULN組、ALT10ULN組各組比較,均具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(均為P0.0001)。CHBALT1-2ULN組、ALT2-5ULN組、ALT5-10ULN組、ALT10ULN組兩兩比較,血清ALT水平均具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(均為P0.0001)。HBeAg陰性組和HBeAg陽性組比較,血清ALT水平無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P=0.0565)。慢性乙型肝炎患者分層研究顯示其肝損傷具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。3.統(tǒng)計學(xué)顯示與健康對照組、CHBVIT組和CHB ALT1ULN-2ULN組相比,慢性乙型肝炎ALT≥2 ULN各組患者血清IL-33和ST2的濃度顯著升高(分別為P0.05或P0.01)。健康對照組血清IL-33和ST2的濃度明顯高于CHBVIT組(P0.01)。CHBALT5-10ULN組血清IL-33和ST2的濃度顯著高于CHBALT2ULN-5ULN組(P0.01)。CHB ALT≥10ULN組血清IL-33和ST2的濃度顯著高于CHB ALT5ULN-10ULN組(P0.01)。健康對照組和CHB ALT1ULN-2ULN組血清IL-33和ST2濃度比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。CHBVIT組和CHB ALT1ULN-2ULN組血清IL-33和ST2濃度比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。HBeAg陰性組和HBeAg陽性患者兩組比較,血清IL-33和ST2濃度無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4.統(tǒng)計學(xué)研究顯示慢性乙型肝炎病毒感染者血清IL-33和ST2水平分別與血清ALT水平成顯著正相關(guān)(均為P0.05),所有研究對象血清IL-33和ST2水平分別與血清ALT水平成顯著正相關(guān)(均為P0.05)。結(jié)論我們的數(shù)據(jù)資料顯示CHBALT≥2ULN各組患者血清IL-33和ST2隨著血清ALT升高而升高,但是正常對照組血清IL-33和ST2濃度比CHBVIT組高；與正常對照和CHBVIT兩組相比,CHBALT1ULN-2ULN組患者血清IL-33和ST2的濃度沒有明顯升高；CHBALT≥2ULN各組血清IL-33和ST2的濃度明顯升高,而CHBVIT和CHBALT1ULN-2ULN兩組血清IL-33和ST2濃度下降。這些數(shù)據(jù)表明血清IL-33和ST2濃度隨著乙型肝炎病毒慢性感染的過程發(fā)生了變化,因此我們推測IL-33和ST2與乙型肝炎病毒慢性感染的階段性相關(guān),可以作為患者免疫狀態(tài)和病情判斷的指標(biāo),用以指導(dǎo)患者抗病毒治療和治療效果評價。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.62;R575.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Xue-Song Liang;Cheng-Zhong Li;Yin Zhou;Wei Yin;Ya Yun Liu;Wen-Han Fan;;Changes in circulating Foxp3~+ regulatory T cells and interleukin-17-producing T helper cells during HBV-related acute-on-chronic liver failure[J];World Journal of Gastroenterology;2014年26期

本文編號：2788911