【摘要】：急性肺損傷是重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)患者呼吸衰竭最常見的原因之一。它是肺實(shí)質(zhì)疾病的一種特征性形式,代表了從短暫的呼吸困難到呼吸系統(tǒng)的快速終末衰竭(急性呼吸窘迫綜合征,ARDS)等多種嚴(yán)重狀態(tài)。與其他器官如肝臟和皮膚相比,成人肺在穩(wěn)態(tài)條件下被認(rèn)為是靜止的。然而,最近的研究表明,肺具有兼性干細(xì)胞/祖細(xì)胞群,在損傷后具有很大的修復(fù)潛力。肺泡是由扁平上皮肺泡1型細(xì)胞(AEC1s)和分泌表面活性物質(zhì)的立方上皮肺泡2型細(xì)胞(AEC2s)排列組成的氣體交換囊。AEC2s作為肺祖細(xì)胞已經(jīng)被廣泛認(rèn)可,并參與肺的修復(fù)和再生過程。在發(fā)育過程中,AEC1s和AEC2s來自于來源于一種有雙向分化潛能的祖細(xì)胞譜系,而在出生后,AEC2s可以經(jīng)歷長期的自我更新,并在穩(wěn)態(tài)時(shí)分化補(bǔ)充AEC1s。因此,AEC2s作為一群干/祖細(xì)胞,在體內(nèi)增殖并在肺損傷時(shí)產(chǎn)生AEC1s。了解肺泡上皮細(xì)胞再生能力的機(jī)制,可為ALI的治療提供理論基礎(chǔ)。本研究旨在明確急性肺損傷后肺泡上皮的增殖再生能力,同時(shí)對(duì)肺泡上皮再生的機(jī)制進(jìn)行深入探討。我們建立了LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷模型,利用譜系示蹤技術(shù)和免疫染色的方法,觀測(cè)急性肺損傷后不同時(shí)間點(diǎn)AEC2s的數(shù)量變化,發(fā)現(xiàn)損傷后AEC2s的在不同時(shí)間點(diǎn)和不同損傷區(qū)域有不同的增殖和分化特性。AEC2s在損傷后3天增殖最明顯,而增殖主要是出現(xiàn)在損傷區(qū)域。通過蛋白質(zhì)組學(xué)高通量篩選發(fā)現(xiàn)Hippo通路在肺損傷后的變化與AEC2s增殖規(guī)律高度一致,且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Hippo通路關(guān)鍵蛋白YAP1主要在損傷肺的AEC2s中表達(dá);而細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明抑制YAP1的表達(dá)將導(dǎo)致A549細(xì)胞增殖減弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Hippo-Yap1信號(hào)通路在急性肺損傷后的肺組織干祖細(xì)胞再生中參與了細(xì)胞增殖的調(diào)控,發(fā)揮著重要作用。方法:利用蛋白質(zhì)質(zhì)譜spectrometry-based大規(guī)模篩選和譜系示蹤技術(shù)標(biāo)記AEC2s,我們分析了不同肺損傷天數(shù)和損傷區(qū)域AEC2s增殖和遷移情況。然后通過免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)和體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了肺泡上皮細(xì)胞增殖的機(jī)制。結(jié)果:1、經(jīng)氣管內(nèi)滴注肺損傷小鼠模型,當(dāng)LPS劑量為10mg/kg LPS(O55:B5),滴注體積為每只小鼠50ul時(shí),建立的急性肺損傷模型傷情較為適合。在傷后3、5、7天取材,肺大體和HE染色發(fā)現(xiàn)肺損傷在損傷后3天內(nèi)加重,12天后完全恢復(fù)正常。不同的損傷區(qū)域傷情不同,肺門附近損傷最嚴(yán)重,肺周圍損傷最輕。2、Sftpc-CreER~(T2);Rosa26-RFP雙雜合小鼠(Sftpc-CreER~(T2);Rosa26-RFP)給予4次他莫昔芬(0.1-0.15 mg/g體重)譜系標(biāo)記小鼠AEC2s,最后一次注射他莫昔芬后7天處死,約89.2%Sftpc+細(xì)胞譜系標(biāo)記。免疫組織化學(xué)、位置和細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析證實(shí)絕大多數(shù)RFP+細(xì)胞(99.4%±7%)都是AEC2s。3、ALI后3天AEC2s細(xì)胞數(shù)目最大(205.20±46.14個(gè)/HPF,P0.05),損傷后5天、7天細(xì)胞數(shù)目仍明顯多于對(duì)照組(188.29±55.58個(gè)/HPF,195.73±60.06個(gè)/HPF,P0.05);不同天數(shù)的不同損傷區(qū)域,損傷區(qū)域和損傷-正常交界區(qū)域與對(duì)照組相比,細(xì)胞數(shù)目明顯增高(P0.05),而正常區(qū)域與對(duì)照組相比則基本無變化(P0.05)。4、我們通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析通路富集發(fā)現(xiàn)Hippo-YAP1通路在肺損傷修復(fù)過程中可能發(fā)揮重要作用。免疫熒光染色和免疫組化證明了Hippo-YAP1通路關(guān)鍵蛋白YAP的高表達(dá)與ALI后AEC2s增殖規(guī)律一致。此外,結(jié)果顯示ALI后肺組織YAP1陽性細(xì)胞主要為Sftpc譜系標(biāo)記的AEC2s。AEC2s體外增殖實(shí)驗(yàn)表明,YAP1 siRNA和Hippo抑制劑均能顯著抑制AEC2s的增殖。結(jié)論:急性肺ALI后AEC2s是肺泡上皮修復(fù)的主要干/祖細(xì)胞。傷后3至7天AEC2s增殖明顯。Hippo-YAP信號(hào)通路參與調(diào)控ALI后肺AEC2s增殖,使用YAP-TEAD抑制劑和siRNA抑制YAP的作用,可以抑制AEC2s的增殖。表明Hippo-YAP信號(hào)通路是一個(gè)急性肺損傷后,肺組織修復(fù)與再生中的重要通路,通過調(diào)控該通路的活化,可能會(huì)為急性肺損傷以后的修復(fù)提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R563.8
【圖文】：

圖 1-1 小鼠繁育雜交示意圖2.5.1.2 轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定方法(1)剪尾：消毒眼科剪剪取 2 周齡小鼠鼠尾 0.5cm，置于干凈的 1.5ml 離心管中，并編號(hào)標(biāo)記；(2) 鼠尾 DNA 提取：利用血液/細(xì)胞/組織基因組 DNA 提取試劑盒提取鼠尾 DNA。（詳細(xì)步驟參照血液/細(xì)胞/組織基因組 DNA 提取試劑盒）；(3) DNA 質(zhì)量檢測(cè)：DNA 振蕩混勻后，取 1ul DNA 用 Nanodrop 分光光度計(jì)檢測(cè)獲得 DNA 濃度、A260/A280 值。(4) PCR 擴(kuò)增A、引物信息（引物序列為 Jackson Lab 官網(wǎng)提供，由華大基因科技股份有限公司合成。）表 1-1 鑒定基因的引物序列

圖 1-2 取材位置示意圖圖機(jī)肺大體照相。材、石蠟切片kg 戊巴比妥鈉溶液麻醉，后肢內(nèi)側(cè)肌臥位固定，從下腹部沿正中線剪開皮膚行氣管插管。動(dòng)靜脈，剪斷血管放血，向上剪破膈經(jīng)氣管灌注 400ul 4%多聚甲醛（4℃4℃預(yù)冷）的血清瓶中繼續(xù) 4℃固定過m）。

圖 1-2 取材位置示意圖大體照相。石蠟切片巴比妥鈉溶液麻醉，后肢內(nèi)固定，從下腹部沿正中線剪開管插管。脈，剪斷血管放血，向上剪管灌注 400ul 4%多聚甲醛（預(yù)冷）的血清瓶中繼續(xù) 4℃固

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8 ;Ｃａｌｆａｃｔａｎｔ在兒科急性肺損傷中的療效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

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