【摘要】：目的： 本課題組前期研究已證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）移植治療能夠促進(jìn)心肌梗死后梗死交界區(qū)域微血管生成，改善心肌梗死后的心功能。然而，由于移植MSCs在心肌梗死區(qū)存活率低，以及心梗區(qū)炎癥反應(yīng)，使得大量的移植細(xì)胞快速凋亡等諸多問(wèn)題，大大降低其治療效果。近年研究顯示高遷移率組蛋白1（High Mobility Group Box-1，HMGB1）可以通過(guò)調(diào)節(jié)損傷組織的促進(jìn)血管生成相關(guān)因子和炎癥因子的表達(dá)，可能進(jìn)一步刺激干細(xì)胞的增殖、分化和旁分泌效應(yīng)，而參與組織的損傷修復(fù)。因此，本研究擬在大鼠急性心肌梗死的模型上，通過(guò)注射HMGB1及拮抗HMGB1表達(dá)，同時(shí)聯(lián)合移植MSCs，觀察HMGB1聯(lián)合MSCs移植是否能進(jìn)一步改善梗死區(qū)域局部微環(huán)境、增強(qiáng)干細(xì)胞的旁分泌效應(yīng)，以期更好地發(fā)揮干細(xì)胞修復(fù)心肌的作用。 方法： 通過(guò)貼壁離心法培養(yǎng)獲得高純度大鼠MSCs；進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定；SD雄性大鼠共144只，隨機(jī)分為六組：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、MSCs移植組、HMGB1注射組、HMGB1注射+MSCs移植組、HMGB1BoxA注射+MSCs移植組(n=24只)。制備大鼠急性心肌梗死模型，按照造模成功后心肌內(nèi)注射1.0×106個(gè)MSCs、結(jié)扎冠脈左前降支前后腹膜內(nèi)各注射1次100ng HMGB1（10μg/ml）、MSCs移植聯(lián)合HMGB1注射、MSCs移植同時(shí)腹膜內(nèi)注射HMGB1BoxA400μg給藥方法分別處理。術(shù)后3天，7天，28天ELISA法檢測(cè)血清TLR4、VEGF、IL-6、NF-b、TNF-α、HMGB1濃度水平。術(shù)后28天心臟彩超測(cè)定心臟功能，心臟切片染色觀察病理改變，TTC染色測(cè)定心梗面積、梗死區(qū)新生血管免疫組化測(cè)定梗死區(qū)新生血管密度。 結(jié)果： 1、心功能：術(shù)后28天各組行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)LVDd、LVDs、FS和EF值，結(jié)果顯示，與MSCs移植組、HMGB1注射組、HMGB1BoxA注射+MSCs移植組比較，HMGB1注射+MSCs移植組的心功能改善最為顯著，LVDd和LVDs明顯縮小，F(xiàn)S和EF值增加（P0.05）；余組心功能改善情況依次為：MSCs移植組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組＞HMGB1注射組＞模型對(duì)照組（P0.05）。 2、梗死面積測(cè)定：術(shù)后28天心肌TTC染色顯示HMGB1注射+MSCs移植組的梗死面積較藥物干預(yù)其它三組明顯減�。挥嘟M梗死面積測(cè)定值依次為：模型對(duì)照組＞HMGB1注射組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組＞MSCs移植組（P0.05）； 3、心肌梗死區(qū)新生血管測(cè)定：HMGB1注射+MSCs移植組的CD31染色新生血管數(shù)較藥物干預(yù)其它三組明顯增多；余組新生血管測(cè)定值依次為：MSCs移植組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組＞HMGB1注射組＞模型對(duì)照組（P0.05）。 4、血清TLR4、VEGF及HMGB1水平：血清HMGB1測(cè)定值術(shù)后3天、7天時(shí)間點(diǎn)依次為：模型對(duì)照組＞MSCs移植組；血清TLR4、VEGF測(cè)定值術(shù)后3天時(shí)間點(diǎn)依次為：HMGB1注射+MSCs移植組＞MSCs移植組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組＞HMGB1注射組＞模型對(duì)照組，術(shù)后7天時(shí)間點(diǎn)依次為：HMGB1注射+MSCs移植組＞MSCs移植組＞HMGB1注射組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組＞模型對(duì)照組；28天時(shí)間點(diǎn)上TLR4、VEGF及HMGB1各濃度水平各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 5、血清IL-6、NF-b及TNF-α水平：血清IL-6、NF-b及TNF-α測(cè)定值術(shù)后3天時(shí)間點(diǎn)依次為：HMGB1注射組＞模型對(duì)照組＞HMGB1注射+MSCs移植組＞MSCs移植組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組，術(shù)后7天時(shí)間點(diǎn)依次為：模型對(duì)照組＞HMGB1注射組＞MSCs移植組＞HMGB1BoxA注射+MSCs移植組＞HMGB1注射+MSCs移植組，28天時(shí)間點(diǎn)上IL-6、NF-b及TNF-α各濃度水平各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 結(jié)論： HMGB1聯(lián)合MSCs移植治療比較單MSCs移植治療及單HMGB1注射治療對(duì)梗死心肌局部促進(jìn)血管生成因子的表達(dá)增加，炎癥因子的表達(dá)減少。從而對(duì)大鼠急性心肌梗死后心功能改善、心肌梗死面積減少和局部新生血管生成等更為有益，而拮抗HMGB1后上述作用明顯削弱。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R542.22
【圖文】：

2.1 MSCs 的培養(yǎng)、鑒定、標(biāo)記2.1.1 MSCs 的培養(yǎng)原代培養(yǎng)過(guò)程中觀察可見(jiàn)密集圓形細(xì)胞，含各種骨髓原始細(xì)胞。第 3 天換液，可見(jiàn)部分細(xì)胞貼壁，可見(jiàn)有少量細(xì)胞由圓形變?yōu)槎嘟切位蚨贪魻�，呈集落狀分布；�?~6 天，可見(jiàn)多角形或短棒狀的細(xì)胞逐漸增多，細(xì)胞體積增大，可觀察到分化完整細(xì)胞器，并逐漸擴(kuò)散、相互交聯(lián)；至 7 天左右，全部細(xì)胞均為梭形，且呈渦流狀，排列細(xì)胞部分融合，可鋪滿瓶底達(dá) 80%-90%。細(xì)胞傳至第 3 代時(shí)，倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)逐漸均勻生長(zhǎng)成為梭形，形態(tài)趨于一致，且分布均勻。細(xì)胞的增殖速度較原代明顯增快，當(dāng)細(xì)胞傳代至 4 代以后，細(xì)胞生長(zhǎng)趨于緩慢，形態(tài)有衰老趨勢(shì)（圖 1）。2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

22圖 2 流式細(xì)胞術(shù)鑒定 MSCs 流式細(xì)胞儀分析顯示多數(shù) MSCs 細(xì)胞表達(dá) CD29 和 CD90，極少數(shù)細(xì)胞表達(dá) CD45Figure 2 Surface antigen of MSCs measured by Flow Cytometry, and MSCs expressing CD90 andCD29, little expressing CD452.1.3 DAPI 標(biāo)記 MSCs選用第 3 代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的 MSCs 細(xì)胞，予 DAPI 染色，觀察到 MSCs 細(xì)胞染色成功，細(xì)胞核藍(lán)色熒光表現(xiàn)。400 倍高倍鏡下隨機(jī)選取 3 個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)，以鏡下平均數(shù)計(jì)算標(biāo)記率為 94%（圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】

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1 王曉武;張衛(wèi)達(dá);羅林;袁彬彬;;大鼠心肌梗死后心肌高遷移率族蛋白HMGB1的時(shí)程變化[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年09期

2 阮紅;何濤;秦超;胡姍;;制備大鼠心肌梗死模型中不同人工通氣法比較[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

3 高鐵磊;王文靖;;高遷移率族蛋白1在人類心肌梗死后的表達(dá)[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2011年01期

4 劉志江;石蓓;許官學(xué);沈長(zhǎng)銀;王正龍;龍仙萍;陳攀科;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)損傷血管的內(nèi)皮修復(fù)作用[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2011年09期

5 劉志江;石蓓;趙然尊;沈長(zhǎng)銀;王冬梅;王正龍;;外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植心肌梗死兔新生血管及心功能的變化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年27期

6 侯春麗;張冬梅;侯學(xué)紅;楊少軍;;大鼠急性心肌梗死模型制備及對(duì)心功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年09期

7 ;Differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells from diabetic patients into insulin-producing cells in vitro[J];Chinese Medical Journal;2007年09期

本文編號(hào)：2715543