【摘要】：研究目的:創(chuàng)傷性顱腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)以其高致死致殘率成為世界范圍內(nèi)重要公共衛(wèi)生問題。創(chuàng)傷后原發(fā)性血腦屏障破壞導(dǎo)致腦血流灌注不足、血腦屏障通透性升高,代謝失衡、出凝血障礙等病理過程,引起繼發(fā)性腦損傷,加重血腦屏障開放,形成惡性循環(huán)。及時(shí)修復(fù)血腦屏障成為TBI治療的關(guān)注重點(diǎn)之一。血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又被稱作血管通透性因子,在血腦屏障開放、血管新生中起到重要作用。血管內(nèi)皮生長抑制因子(Vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)是機(jī)體內(nèi)天然抑制VEGF的因子,且在抑制VEGF的同時(shí)并不影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能。因此,本實(shí)驗(yàn)在建立TBI動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,檢測(cè)TBI后不同時(shí)間點(diǎn)VEGF和VEGI的表達(dá)變化,探討二者與血腦屏障通透性的相關(guān)聯(lián)系。通過側(cè)腦室注射VEGI純化蛋白對(duì)TBI急性期小鼠進(jìn)行干預(yù)治療,觀察TBI后VEGF表達(dá)變化,血腦屏障通透性的改變,創(chuàng)傷側(cè)細(xì)胞凋亡水平和小鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能。同時(shí),探究VEGI對(duì)VEGF的下游作用機(jī)制,及其在TBI急性期抑制血管新生的作用機(jī)制。研究方法:1)在C57BL/6雄性小鼠上建立TBI模型,應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)TBI后不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)傷側(cè)纖維蛋白原的含量。2)應(yīng)用Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)TBI后不同時(shí)間點(diǎn)VEGF和VEGI的各自表達(dá)量。3)應(yīng)用立體定位側(cè)腦室微量注射技術(shù),對(duì)TBI后小鼠進(jìn)行VEGI干預(yù)。4)通過改良的神經(jīng)功能缺損評(píng)分(modified Neurological Severity Score,mNSS)和錯(cuò)步實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)各組進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。篩選出差異最大時(shí)間點(diǎn),進(jìn)行后續(xù)探究。5)應(yīng)用Western Blot和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)比較TBI第3天對(duì)照組和干預(yù)組血腦屏障通透性的變化。6)應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)VEGFR2和下游eNOS的磷酸化表達(dá)。7)應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)和AnnexinV/PI試劑盒檢測(cè)比較創(chuàng)傷對(duì)照組和VEGI干預(yù)組小鼠創(chuàng)傷側(cè)細(xì)胞凋亡情況。8)應(yīng)用Western Blot、免疫熒光技術(shù)觀察血管新生相關(guān)細(xì)胞的變化。9)體外實(shí)驗(yàn)中比較VEGI對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞成管能力的影響。10)應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)血管新生相關(guān)因子的相對(duì)表達(dá)變化。結(jié)果:1.TBI后小鼠血腦屏障開放在第3天最為顯著。VEGF在TBI后逐漸升高,第3天達(dá)峰值。VEGI在TBI后第3天下降明顯。綜合比較VEGF與VEGI比值發(fā)現(xiàn),VEGF/VEGI值在TBI后逐漸升高,在第3天最為明顯。2.VEGI干預(yù)后對(duì)TBI小鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能改善從第3天開始出現(xiàn)明顯差異。VEGI干預(yù)明顯減少創(chuàng)傷側(cè)的細(xì)胞凋亡數(shù)量,減輕了血腦屏障開放程度。VEGI干預(yù)可以顯著抑制TBI急性期創(chuàng)傷側(cè)VEGFR2和其下游eNOS的磷酸化。3.VEGI干預(yù)顯著抑制了TBI后的血管新生,體現(xiàn)在對(duì)血管新生相關(guān)細(xì)胞的抑制和對(duì)血管新生相關(guān)因子之間平衡的調(diào)節(jié)。結(jié)論:1.TBI急性期后VEGF的單一變化不能完全解釋血腦屏障通透性升高的時(shí)間峰值,綜合VEGF與VEGI相對(duì)變化可能會(huì)更有效的研究TBI后血腦屏障損傷的原因。TBI急性期第3天VEGF相對(duì)于VEGI的高表達(dá)可能為血腦屏障通透性峰值的原因之一,為后續(xù)TBI急性期的治療奠定基礎(chǔ)。2.VEGI局部干預(yù)在TBI急性期對(duì)神經(jīng)功能的改善作用集中于TBI后第3天,我們選用創(chuàng)傷后第3天為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的重要觀察點(diǎn)。3.VEGI通過減少緊密連接蛋白的損傷,降低基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá),抑制VEGF-VEGFR-2下游的磷酸化,有效地降低了血腦屏障通透性。VEGI局部干預(yù)在TBI后第3天有效抑制創(chuàng)傷側(cè)的細(xì)胞凋亡。4.VEGI干預(yù)一定程度上恢復(fù)了TBI后促血管新生相關(guān)因子和抑制血管新生因子表達(dá)的失衡,減少了未成熟的新生血管的形成,以阻止血腦屏障通透性進(jìn)一步的升高,從而緩解TBI后的繼發(fā)性損傷。
【圖文】：

正常腦組織的纖維蛋白原含量很低（如圖1.1 中的 sham 假手術(shù)組），僅為血管中的少許殘留，而由于創(chuàng)傷導(dǎo)致血管的直接損傷或組織缺氧造成的繼發(fā)性血腦屏障通透性升高，使原本在血管中的纖維蛋白原會(huì)滲出至腦組織中[6]。在損傷程度一定的情況下，局部組織中的纖維蛋白原表達(dá)量越高，提示血管通透性越高，可能引起的繼發(fā)性血管源性水腫越嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 Western Blot 技術(shù)分別觀察 TBI 后第 1、3、7 天創(chuàng)傷半球纖維蛋白原表達(dá)，結(jié)果顯示（圖 1.1）創(chuàng)傷后纖維蛋白原表達(dá)逐漸升高，于第 3 天達(dá)峰值(p***<0.001)，后下降，第 7 天時(shí)接近假手術(shù)組水平，并于第 3 天的含量由顯著性差異（p#<0.05）。提示，TBI 急性期以第 3 天為血腦屏障開放峰值

1.2.2 TBI 急性期中不同時(shí)間點(diǎn) VEGF 與 VEGI 的相對(duì)表達(dá)檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)分別觀察 TBI 后第 1、3、7 天 TBI 半球 VEGF 和 VEGI 的蛋白表達(dá)含量。圖 1.2 結(jié)果顯示，相較假手術(shù)組中 VEGF 的蛋白含量，TBI 后 VEGF 表達(dá)逐漸升高，于第 3 天時(shí)達(dá)峰值（p***<0.01）并持續(xù)至第 7 天（p**<0.01）；而 VEGI的蛋白在假手術(shù)組中（相較 VEGF）具有較高的表達(dá)，TBI 后第一天有下降趨勢(shì)，但并未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。于 TBI 后第 3 天達(dá)谷值（p*<0.05），后呈現(xiàn)逐漸恢復(fù)趨勢(shì)，即在 TBI 后第 7 天時(shí)蛋白含量與假手術(shù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。我們由此將二者綜合計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的 VEGF 與 VEGI 相對(duì)比值（VEGF/VEGI 比）， 并對(duì)此進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示 VEGF/VEGI 比在 TBI 后第 3 天顯著升高（p***<0.001），在TBI 后第 7 天有所下降，仍然高于假手術(shù)組(p*<0.05), 但是與第 3 天比較有顯著降低（p##<0.01）。提示：TBI 后急性期 VEGF 與 VEGI 的相對(duì)變化可能比單一因素的變化更為顯著，并可能與 TBI 急性期并發(fā)癥相關(guān)。 同時(shí)，由于 TBI 后第3 天的多種因素變化最為明顯，所以該時(shí)間點(diǎn)被選作為后續(xù)進(jìn)一步研究觀察時(shí)間點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R651.15

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張楠;王思迪;涂盼春;岳英芳;楊智航;;緊密連接相關(guān)蛋白對(duì)血腦屏障通透性影響的研究進(jìn)展[J];沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2017年01期

2 關(guān)景霞,孫圣剛,曹學(xué)兵,陳志斌,童萼塘;凝血酶對(duì)血腦屏障通透性影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;2003年10期

3 謝云德;精神緊張能改變血腦屏障通透性[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);1997年03期

4 吳超;李新民;張喜蓮;路巖莉;房艷艷;聶坤;劉菁;;開竅類中藥增加血腦屏障通透性機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國中醫(yī)急癥;2017年07期

5 彭慧婷;高福平;張勤麗;牛僑;;納米氧化鋁對(duì)血腦屏障通透性影響的體外研究[J];毒理學(xué)雜志;2013年01期

6 許宏偉,楊期東,劉曉英,肖波,趙真;腦出血后血腦屏障通透性的變化及七葉皂苷鈉的影響[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2004年04期

7 ;腫瘤和藥物對(duì)血腦屏障通透性的影響[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));1996年01期

8 趙康峰;孔建;張少平;張麗霞;陽曉燕;張宏偉;白雪濤;;3種化學(xué)物對(duì)血腦屏障通透性影響的體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)對(duì)比研究[J];毒理學(xué)雜志;2014年06期

9 鞏沅鑫;周其全;;銀杏葉提取物對(duì)血腦屏障通透性保護(hù)作用的分子機(jī)制[J];中國新藥雜志;2008年17期

10 李昭君;馬蘇蘇;李�？�;閆濱;;促進(jìn)血腦屏障通透性方法的研究進(jìn)展[J];食品與藥品;2017年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 高旅;吳麗萍;史正剛;劉麗娜;尚菁;;中藥調(diào)控血腦屏障通透性的作用研究進(jìn)展[A];第二十三次全國兒科中西醫(yī)結(jié)合學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2019年

2 丁桂榮;邱聯(lián)波;王曉武;李康樗;周詠春;張杰;周家興;郭國禎;;電磁輻射對(duì)血腦屏障通透性的影響及其機(jī)制研究進(jìn)展[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)第14屆學(xué)術(shù)交流會(huì)議論文集[C];2009年

3 張勤麗;吉俊偉;高福平;白茹;葛翠翠;王志武;牛僑;;納米氧化鋁對(duì)小鼠血腦屏障通透性的影響[A];中國毒理學(xué)會(huì)第三屆中青年學(xué)者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學(xué)研討會(huì)論文集[C];2011年

4 王玉凱;胡小懷;任麗;;鈣拮抗劑對(duì)大鼠腦缺血后血腦屏障通透性的影響[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

5 吳雪;向大雄;;中藥血腦屏障通透性的評(píng)價(jià)方法[A];2009全國中藥創(chuàng)新與研究論壇學(xué)術(shù)論文集[C];2009年

6 王衛(wèi)東;尹飛;;缺氧缺血對(duì)體外血腦屏障通透性的影響及其機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 黃宇晶;馮加純;鄧方;韓冬;劉心剛;;腦缺血再灌注后血腦屏障通透性變化的機(jī)制[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

8 金信春;樓敏;;血腦屏障通透性參數(shù)可預(yù)測(cè)靜脈溶栓后基底節(jié)出血轉(zhuǎn)化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2014年

9 陳志斌;關(guān)景霞;蔡美華;曹學(xué)兵;蘇慶杰;王W，

本文編號(hào)：2688815