【摘要】：目的:糖尿病是一種多病因引起的慢性代謝性疾病,其伴隨的多系統(tǒng)損害極大困擾著人們,其中糖尿病難愈合創(chuàng)面發(fā)病機制極為復(fù)雜,其主要原因在于創(chuàng)面持續(xù)的慢性炎癥狀態(tài),目前研究認(rèn)為這種炎癥狀態(tài)與創(chuàng)面內(nèi)不同極化狀態(tài)的巨噬細胞的平衡有關(guān),同時自噬在創(chuàng)面愈合中多個環(huán)節(jié)參與并發(fā)揮了重要作用,但兩者在糖尿病創(chuàng)面愈合中的關(guān)系還尚未得到研究,本研究旨在通過運用自噬調(diào)節(jié)劑對糖尿病小鼠創(chuàng)面模型進行干預(yù),探究自噬活動是否與糖尿病創(chuàng)面中巨噬細胞的極性狀態(tài)相關(guān),以及對創(chuàng)面愈合效率產(chǎn)生的影響。方法:96只SPF級雄性BALB/C小鼠,通過腹腔注射150mg/kg劑量的鏈脲佐菌素來建立糖尿病小鼠模型,成模后隨機分為4組:高劑量雷帕霉素組(HR組)、低劑量雷帕霉素組(LR組)、3-Methyladenine抑制組(3-MA組)及空白對照組(Control組),每天腹腔注射對應(yīng)藥物,觀察創(chuàng)面愈合情況,并分別于傷后1、3、5、7、10及14天取材,留取糖尿病小鼠創(chuàng)面新鮮皮膚組織液氮保存以及完整創(chuàng)面組織4%多聚甲醛固定石蠟包埋保存。后期通過研磨勻漿提取蛋白,用于檢測創(chuàng)面皮膚組織中LC3、CD16及CD163蛋白表達情況,另一部分液氮儲存的創(chuàng)面皮膚組織通過研磨勻漿提取RNA,采用qPCR技術(shù)檢測創(chuàng)面組織中TNF-α與VEGF mRNA表達水平;石蠟切片通過免疫熒光染色技術(shù)檢測CD16及CD163分別標(biāo)記的創(chuàng)面組織中M1型與M2型巨噬細胞。結(jié)果:1.同對照組糖尿病小鼠創(chuàng)面對比,低劑量雷帕霉素組在創(chuàng)面愈合的整個過程中都呈現(xiàn)更高的創(chuàng)面愈合效率,高劑量雷帕霉素在創(chuàng)面愈合早期愈合速率高于對照組,逐漸降低,總體愈合效率低于對照組(P0.05);3-MA組早期愈合效率低于對照組,愈合中晚期愈合效率逐漸升高,總體愈合效率低于低劑量雷帕霉素組(P0.05);2.在糖尿病小鼠創(chuàng)面愈合整個過程中的各個時間點,應(yīng)用雷帕霉素誘導(dǎo)自噬活性提高,M1型巨噬細胞相關(guān)蛋白CD16表達增加、M2型巨噬細胞相關(guān)蛋白CD163表達減少;應(yīng)用3-MA抑制自噬活性,M2型巨噬細胞相關(guān)蛋白CD163表達增加,M1型巨噬細胞相關(guān)蛋白CD16表達減少(P0.05);3.免疫熒光染色技術(shù)檢測結(jié)果顯示,糖尿病小鼠創(chuàng)面愈合過程中各個時間點,HR組中M1型巨噬細胞標(biāo)記CD16 陽性表達更高,M2型巨噬細胞標(biāo)記CD163陽性表達較對照組低(P0.05);3-MA組中CD16陽性表達顯著低于對照組及雷帕霉素誘導(dǎo)組,CD163 陽性表達顯著高于其他組別(P0.05);4.對照組糖尿病小鼠創(chuàng)面愈合過程中,TNF-α mRNA表達的高峰在傷后第7天;同正�？瞻讓φ战M糖尿病小鼠創(chuàng)面對比,雷帕霉素組小鼠創(chuàng)面中TNF-α mRNA表達高峰提前,炎癥水平得到增強;3-MA組創(chuàng)面愈合過程中TNF-α mRNA表達水平受到抑制;雷帕霉素組小鼠創(chuàng)面中VEGF mRNA表達水平顯著低于對照組,表明誘導(dǎo)自噬活性增強能夠促使創(chuàng)面炎癥水平升高(P0.05)。結(jié)論:雷帕霉素能夠誘導(dǎo)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的自噬活性升高,并促使創(chuàng)面中巨噬細胞向M1型極性狀態(tài)轉(zhuǎn)化,提高創(chuàng)面炎性水平;抑制自噬能夠促使M2型巨噬細胞極性轉(zhuǎn)化;低劑量雷帕霉素對糖尿病小鼠創(chuàng)面愈合具有促進的作用。
【圖文】：

由此可以觀察到，在糖尿病小鼠創(chuàng)面?zhèn)蟮冢碧欤褂美着撩顾卣T導(dǎo)自噻，自噬相逡逑關(guān)蛋白ＬＣ３表達增加，ＨＲ組Ｍｌ型巨噬細胞的極化狀態(tài)較對照組更明顯，而自噬活逡逑動受到抑制的３－ＭＡ組中Ｍ２型巨噬細胞的極化狀態(tài)較誘導(dǎo)組及對照組高。見圖２。逡逑ｓ邐—邐—邋ＬＵ邋0邋＇１邋Ｍ邋Ａ邐丁逡逑Ｉ邋…：葉，■：逡逑ｒｎｍｍｍ邋ｍｒｎｍ邋丨丨丨丨丨丨｜邋0．ｓ－邋Ｉ邋；；逡逑0．0Ｊ＾—ｒ—￣￣邐．邐逡逑１力１邐１＊５－逡逑ｇ0＇８＇邋Ａ邋＾邐｜ｌ．0．邐Ａ逡逑ｏ０＇４＇邋Ｈ邋ＩＩ邋Ｈ邋５0＊－邐＿逡逑０．０－１—－－ｒ－￣ｗｗｙｆｆｆｆ邐邐邐邋０．０邐ｉ邋■？＾Ｂ邐邐邐逡逑旁方＾邐＾邐＾邋＾邋／逡逑圖２各組糖尿病小鼠創(chuàng)面皮膚組織在傷后第１天目的蛋白表達情況逡逑２．邋４．邋２．２將各組糖尿病小鼠在傷后第３天的創(chuàng)面邊緣皮膚提取的蛋白進行逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ邋檢測

顯著性差異。由此可以發(fā)現(xiàn)，在糖尿病小鼠創(chuàng)面?zhèn)蟮冢程�，ＬＲ組在低劑量誘導(dǎo)自逡逑噬的同時，Ｍｌ型巨噬細胞的極化狀態(tài)較對照組更明顯，而自噬活動受到抑制的３－ＭＡ逡逑組中Ｍ２型巨噬細胞的極化狀態(tài)較誘導(dǎo)組及對照組高。見圖３。逡逑…，邋ＣＤ１６邋２邐，ｒ＊￣邋．逡逑（ＨｈＨＩ邋ｆｌＨＮｉ邐ｃｔ＞ｉ６３邋５１＇°逡逑ａ邋0５邋Ｉ逡逑？ｐｄｈ邋０．０ＬＪｐ＿，＿＿Ｕ：＿，＿逡逑參邋／邐，》邐＾邐＾邋－ｆ邋／逡逑２．５－ｊ邐０．８－逡逑ｊｍ￡ｓＥｌ邋■尙逡逑圖３各組糖尿病小鼠創(chuàng)面皮膚組織在傷后第３天目的蛋白表達情況逡逑２．邋４．２．３將各組糖尿病小鼠在傷后第５天的創(chuàng)面邊緣皮膚提取的蛋白進行逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ檢測，自嗤相關(guān)蛋白ＬＣ３－ＩＩ／ＬＣ３－Ｉ比值：ＨＲ組〉ＬＲ組及Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑組＞３－ＭＡ組；巨噬細胞Ｍｌ型相關(guān)蛋白ＣＤ１６／ＧＡＰＤＨ比值：ＬＲ組＞３ＭＡ組〉ＨＲ組〉Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R641

【共引文獻】

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10 冀淑英;;子宮頸癌根治術(shù)后高�；颊咄椒呕熍c單純放療的療效比較[J];中國實用醫(yī)刊;2015年24期

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本文編號：2652103