【摘要】：卵圓細胞（haptic oval cell,HOC）是肝臟的干細胞，具有多項分化潛能。肝臟具有強大的再生修復能力，只有當損傷嚴重，肝細胞增殖受到抑制時，卵圓細胞被激活參與肝臟損傷修復的過程，可增殖分化為肝細胞和膽管細胞，但卵圓細胞的過度增殖又有可能引發(fā)癌變，認識調控卵圓細胞增殖分化的機制并加以干預是臨床上治療肝損傷的基礎。NF-κB是一種重要的核轉錄因子，在肝損傷中可被多種因素激活，參與多種炎癥因子的轉錄調節(jié)，在卵圓細胞激活過程中起重要作用，NF-κB信號傳導通路可能成為藥物治療肝損傷的靶點。 急性肝損傷可由多種原因造成，例如酒精中毒、病毒感染、藥物、毒物等。氧化應激是造成肝損傷的主要機制，損傷過程中有多種因子的參與，，活性氧（Reactive oxygen species，ROS）、內皮素-1（ET-1）等產(chǎn)生增多，作用于NF-κB，使致炎因子的表達和釋放增加，產(chǎn)生炎癥反應。黃芩苷是從傳統(tǒng)中藥黃芩中提取的有效成分，屬于黃酮類化合物，已被證實具有抗炎、抗氧化、抑制細菌、清除氧自由基等生理作用。近年來的研究表明,黃芩苷對肝臟有保護作用。但其具體的機制尚不清楚，是否作用于NF-κB，并對卵圓細胞有調節(jié)作用，本文將對其進行初步研究。 目的：通過建立2-AAF+2/3PH急性肝損傷模型，誘導卵圓細胞增殖，研究在卵圓細胞增殖分化過程中NF-κB的作用，并應用黃芩苷進行干預，同時探討黃芩苷對肝臟保護作用的機制。 方法：將健康成年SD大鼠，雌雄不限，體重200g±20g，隨機分為四組，分別為假手術組（A）、模型組(B)、黃芩苷低劑量組(C)及黃芩苷高劑量組(D)。采用2-乙酰氨基芴+2/3肝切除術(2-acetylaminofluorene+twothirds partial hepatectomy，2-AAF+2/3PH)的方法建立卵圓細胞增殖模型。模型組大鼠先每天給予15mg/kg的2-AAF灌胃4天，第5天行2/3肝切除，然后繼續(xù)以原劑量灌胃5天。假手術組大鼠正常飲食，只在第5天行腹部的切開與縫合，不切除肝臟。黃芩苷干預組大鼠在2-AAF灌胃的同時灌胃黃芩苷溶液，黃芩苷低劑量組應用50mg/kg/d、高劑量組100mg/kg/d，余同模型組，術后繼續(xù)給予黃芩苷灌胃直至處死。各組大鼠于手術后第1、7、14、21天分別處死4只大鼠并取材。 組織處理后行HE染色觀察大鼠肝組織病理學表現(xiàn)；電鏡下觀察辨認卵圓細胞的超微結構；免疫熒光技術檢測肝組織中OV6表達以觀察HOC增殖情況并對其進行定量分析；免疫組化檢測c-kit、AFP、CK19的表達來觀察HOC的分化情況；分別應用RT-PCR法和Western Blotting檢測NF-κB表達；并檢測血清中MDA、H2O2和ET-1的變化。 結果：①肝組織病理形態(tài)學變化：HE染色顯示，假手術組肝組織形態(tài)結構正常，未見卵圓細胞，模型組可見肝細胞水腫，排列紊亂，于匯管區(qū)周圍可見卵圓細胞，黃芩苷處理組炎癥較模型組減輕、卵圓細胞減少，其中黃芩苷高劑量組變化更明顯。②電鏡下可見卵圓細胞體積較小,直徑7-10μm左右,胞漿少，細胞核相對大,核質比高,胞質內主要為游離核糖體及少量粗面內質網(wǎng)和線粒體,張力微絲束明顯可見。③卵圓細胞增殖分化情況：OV6、AFP、CK19、c-kit的表達隨時間變化在假手術組無明顯變化，在模型組大鼠肝切除術后第7-14天增加明顯，第14天達到峰值，之后下降，各組間的表達有差別（P0.05）。較模型組，黃芩苷干預組OV6表達偏低（P0.05），且高劑量組較低劑量組降低更明顯（P0.05），表明黃芩苷抑制肝卵圓細胞增殖；c-kit、AFP表達略偏低（P0.05），CK19表達偏高（P0.05），表明黃芩苷影響卵圓細胞分化。④NF-κB的檢測：RT-PCR和Western Blotting均顯示，NF-κB的表達隨時間而變化，在第14天時達高峰，之后下降，趨勢與卵圓細胞增殖一致。黃芩苷干預組NF-κB的表達降低，并且黃芩苷高劑量組降低更明顯，各組間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。⑤血清學指標：與對照組相比，模型組的MDA、H2O2和ET-1均升高（P0.05），黃芩苷干預組較模型組減低，高劑量組降低更明顯（P0.05）。 結論：卵圓細胞的增殖和分化與NF-κB的激活有關。黃芩苷可通過抑制NF-κB信號傳導通路，從而抑制卵圓細胞的增殖，并誘導增殖的卵圓細胞向成熟的肝細胞及膽管細胞分化，這可能是黃芩苷對肝臟保護作用及促進肝再生的機制。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R657.3

【引證文獻】

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1 蔣懷周;吳生兵;沈斌;;肝豆靈片對銅負荷大鼠肝細胞凋亡的影響[J];甘肅中醫(yī)藥大學學報;2016年04期

本文編號：2564315