【摘要】：背景 顱腦創(chuàng)傷對(duì)于人體健康危害極大,是現(xiàn)代社會(huì)致死率及致殘率極高的疾病之一,尤其是對(duì)于年齡小于45歲的中青年人群。創(chuàng)傷后的一系列復(fù)雜病理生理學(xué)變化導(dǎo)致微循環(huán)障礙,血腦屏障通透性增高,神經(jīng)元死亡,以及神經(jīng)功能障礙。對(duì)于腦創(chuàng)傷的研究注重于傷后腦血流、腦代謝、腦水腫、顱高壓、電解質(zhì)平衡以及腦組織形態(tài)學(xué)改變的研究。盡管對(duì)于顱腦創(chuàng)傷后的病理生理學(xué)機(jī)制的研究有了很大發(fā)展,但是對(duì)于顱腦創(chuàng)傷的治療方法還是較為局限,主要基于傷后的對(duì)癥支持治療。越來越多的學(xué)者意識(shí)到促進(jìn)腦創(chuàng)傷區(qū)域血循環(huán)的恢復(fù),對(duì)于大腦神經(jīng)功能的恢復(fù)起到至關(guān)重要的作用。已有研究表明內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells, EPCs)可以促進(jìn)血管新生,并己在多種體內(nèi)研究中證實(shí)具有血管生成及促進(jìn)損傷恢復(fù)的作用。血培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞又稱為內(nèi)皮集落形成細(xì)胞(Endothelial colony-forming cells, ECFCs)是EPCs的同源亞型,具有更強(qiáng)的細(xì)胞增殖潛能并且表達(dá)更多的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體。ECFCs移植治療是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。 目的： 在顱腦創(chuàng)傷小鼠模型中證實(shí)循環(huán)血中內(nèi)皮祖細(xì)胞在創(chuàng)傷急性期可以歸巢定位于腦創(chuàng)傷區(qū)域,并探索移植血培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)創(chuàng)傷后神經(jīng)功能的影響,為臨床治療顱腦創(chuàng)傷提供新的治療策略。 方法： 應(yīng)用梯度離心法分離新鮮臍靜脈血提取單個(gè)核細(xì)胞(MNCs),將所獲得的MNCs采用貼壁培養(yǎng)的方法獲取血培養(yǎng)EPCs (ECFCs)集落,并在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增,采用細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)所獲ECFCs的細(xì)胞表面標(biāo)記。 應(yīng)用液壓打擊設(shè)備制備顱腦損傷免疫缺陷小鼠模型并將其隨機(jī)分為三組,包括ECFCs移植組,PBS注射組和單純打擊組,將培養(yǎng)ECFCs由尾靜脈注射入小鼠體內(nèi)。應(yīng)用性別錯(cuò)配實(shí)驗(yàn),即將所獲來源于男性胎兒臍帶血的ECFCs由尾靜脈移植入創(chuàng)傷后雌性小鼠體內(nèi),采用人Y染色體特異性探針并利用熒光原位雜交技術(shù)技術(shù)檢測(cè)移植ECFCs的歸巢。 應(yīng)用免疫組化和Western blot的方法檢測(cè)小鼠創(chuàng)傷腦組織區(qū)域的微血管密度以及細(xì)胞因子表達(dá)的變化,分析血管新生與神經(jīng)生物學(xué)功能恢復(fù)的關(guān)系。 應(yīng)用改良神經(jīng)功能評(píng)分(mNSS)和Morris水迷宮分別評(píng)價(jià)移植ECFCs后神經(jīng)行為學(xué)功能恢復(fù)和空間學(xué)習(xí)功能改善。 結(jié)果： 人臍血源的ECFCs移植后24小時(shí)在小鼠損傷腦組織部位被檢測(cè)到,mNSS評(píng)分以及水迷宮實(shí)驗(yàn)證明移植ECFCs組神經(jīng)功能損害較PBS注射組和單純打擊組有明顯減少(P0.05),同時(shí)移植組腦損傷側(cè)的微血管密度(MVD)明顯增加,細(xì)胞因子SDF1和VEGF表達(dá)較其他兩對(duì)照組明顯增高(P0.05)。微血管密度與mNSS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： 臍血源的ECFCs作為標(biāo)志證明了循環(huán)血中EPCs能夠歸巢到腦損傷區(qū)域,移植ECFCs能夠有效促進(jìn)神經(jīng)及血管的修復(fù),并且改善了TBI后長(zhǎng)期的神經(jīng)功能,ECFCs移植未來可能是治療腦外傷潛在的細(xì)胞治療方法。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R651.15

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2548814