本文關(guān)鍵詞：外源性硫化氫通過抑制炎癥和凋亡途徑保護(hù)創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌組織的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：創(chuàng)傷失血性休克（hemorrhagic traumatic shock，HTS）是平、戰(zhàn)時創(chuàng)傷導(dǎo)致死亡的主要原因之一，其主要損傷機(jī)理是，當(dāng)機(jī)體遭受嚴(yán)重創(chuàng)傷后，通過“血管—神經(jīng)”反射所引起的以微循環(huán)障礙為標(biāo)志的急性循環(huán)功能障礙，并由此導(dǎo)致組織器官的缺血、缺氧和多器官功能障礙綜合征（multipleorgan dysfunction syndrome，MODS）。如何快速有效地預(yù)防和治療創(chuàng)傷失血性休克過程中的缺血再灌注損傷，平衡組織供氧-耗氧的關(guān)系，抑制由于其損傷造成的各種器官功能障礙及其并發(fā)癥是決定疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵問題。 20世紀(jì)90年代，硫化氫（H2S）已被證實是繼一氧化氮（NO）和一氧化碳（CO）之后的第三種生物氣體信號分子，內(nèi)源性H2S在機(jī)體的生理及病理過程中具有眾多作用，如血管活性調(diào)節(jié)、抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化等，并且具有強(qiáng)烈的抑制代謝效應(yīng)，可迅速降低機(jī)體的氧代謝，調(diào)節(jié)氧供-氧需平衡，有利于細(xì)胞存活并防止不可逆損傷。研究表明，創(chuàng)傷失血性休克導(dǎo)致的心肌損傷與NF-κB的活性密切相關(guān)，而相關(guān)研究報道外源性H2S可以抑制NF-κB的表達(dá)；同時外源性H2S可以明顯改善嚴(yán)重失血性休克導(dǎo)致的心肌梗死，減輕缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的心律失常，降低心跳停止和心肺轉(zhuǎn)流術(shù)后的心肌細(xì)胞凋亡和自噬現(xiàn)象。 本課題組在前期研究中已證實外源性H2S能明顯改善創(chuàng)傷失血性休克導(dǎo)致的繼發(fā)性肺損傷，并初步驗證了外源性H2S對炎癥反應(yīng)有抑制作用。本實驗擬在創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型中，給予外源性H2S供體NaHS（sodium hydrosulfide）28μmol/kg處理，進(jìn)一步觀察H2S對HTS大鼠心肌組織的保護(hù)作用，研究H2S對創(chuàng)傷失血性休克大鼠炎癥反應(yīng)的抑制作用，和對凋亡相關(guān)蛋白的影響，深入探討其心肌保護(hù)作用的機(jī)制。 目的： 建立大鼠創(chuàng)傷失血性休克模型，觀察新型氣體信號分子硫化氫(H2S)對創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌組織的保護(hù)作用，深入探討外源性H2S通過抑制炎癥和凋亡途徑保護(hù)創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌組織的機(jī)理，為外源性H2S在臨床中的應(yīng)用提供理論及實驗依據(jù)。 方法： 1．成年雄性SD大鼠40只，體重250~300g，隨機(jī)分成4組（n=10）；假手術(shù)組（SHAM），假手術(shù)+NaHS組(SHAM+NaHS)，模型組(HTS)，模型+NaHS組(HTS+NaHS)。建立創(chuàng)傷失血性休克模型，SHAM組完成所有手術(shù)操作，但不放血不復(fù)蘇；模型組與NaHS治療組在10分鐘內(nèi)抽出約為60%血容量的血液，此時為最大抽血量（MDO），使血壓迅速降至35-40mmHg，并通過股經(jīng)脈緩慢推注約為40%MDO的Ringer’s液，維持35-40mmHg的血壓1.5小時，HTS+NaHS組在復(fù)蘇前10min腹腔注射NaHS28μmol/kg；SHAM+NaHS組亦不放血不復(fù)蘇，在與HTS+NaHS組相同時刻腹腔注射NaHS28μmol/kg；HTS組完成所有手術(shù)操作后放血并復(fù)蘇。 2．術(shù)中持續(xù)監(jiān)測各組大鼠平均動脈壓（MAP）。 3．在不同時間點收集大鼠血液樣本測定血清CK、LDH濃度及TNF-α和IL-6水平。 4．復(fù)蘇后4小時制備大鼠心肌組織切片，常規(guī)蘇木精-伊紅（hematoxylinand eosin，HE）染色，觀察創(chuàng)傷失血性休克復(fù)蘇后心肌病理形態(tài)學(xué)的變化。 5．復(fù)蘇后4小時制備大鼠心肌組織電鏡切片，觀察創(chuàng)傷失血性休克復(fù)蘇后心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化及線粒體形態(tài)學(xué)改變。 6．采用Western-Blot法測定心肌組織IKK/IκB/NF-κB及HMGB1的表達(dá)。 7．以蛋白印記法觀察大鼠心肌組織Survivin(生存素)以及促凋亡因子Caspase-3與Bax的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1．與SHAM組和SMAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組MAP明顯降低（P0.05）；與HTS組相比，HTS+NaHS組MAP均有明顯改善（P0.05）。 2．與SHAM組和SMAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組血清中CK和LDH濃度明顯升高（P0.05）；與HTS組相比，HTS+NaHS組血清中CK和LDH濃度明顯下降（P0.05）。 3．與SHAM組和SHAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組血清TNF-α和IL-6水平升高(P0.05)；與HTS組相比，HTS+NaHS組血清TNF-α和IL-6水平降低(P0.05)。 4．光鏡下，SHAM組與SHAM+NaHS組心肌結(jié)構(gòu)清晰整齊；HTS組心肌細(xì)胞腫脹明顯，心肌纖維染色不均，心肌空間結(jié)構(gòu)排列紊亂；與HTS組相比，HTS+NaHS組心肌結(jié)構(gòu)較完整，組織間隙較有規(guī)律。 5．電鏡下，SHAM組與SHAM+NaHS組心肌細(xì)胞和線粒體結(jié)構(gòu)完整；HTS組心肌細(xì)胞和線粒體結(jié)構(gòu)破壞，表現(xiàn)為心肌橫紋邊界不清，肌小節(jié)排列紊亂，線粒體腫脹，基質(zhì)出現(xiàn)空泡，嵴減少或斷裂，內(nèi)膜完整性破壞，肌漿網(wǎng)腫脹；與HTS組相比，HTS+NaHS組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變明顯減輕。 6．與SHAM組和SHAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組心肌組織磷酸化IKK β和磷酸化IκBα蛋白表達(dá)升高(P0.05)；與HTS組相比，HTS+NaHS組磷酸化IKK β和磷酸化IκBα蛋白表達(dá)降低(P0.05)。 7．與SHAM組和SHAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組總NF-κB蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義；HTS組和HTS+NaHS組磷酸化NF-κB蛋白含量增加(P0.05)；與HTS組相比，HTS+NaHS組磷酸化NF-κB蛋白含量減少(P0.05)。 8．與SHAM組和SHAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組總HMGB1蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義；HTS組和HTS+NaHS組細(xì)胞質(zhì)HMGB1蛋白含量增加(P0.05)；與HTS組相比，，HTS+NaHS組細(xì)胞質(zhì)HMGB1蛋白含量減少(P0.05)。 9．與SHAM組和SHAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組Survivin蛋白顯著降低（P0.05）；與HTS組相比，HTS+NaHS組Survivin蛋白的表達(dá)增加（P0.05）。 10．與SHAM組和SHAM+NaHS組相比，HTS組和HTS+NaHS組Caspase-3與Bax蛋白表達(dá)明顯增加(P0.05)；與HTS組相比，HTS+NaHS組Caspase-3與Bax蛋白都有明顯降低（P0.05）。 結(jié)論： 1．外源性H2S能改善創(chuàng)傷失血性休克后的平均動脈壓，降低心肌酶，保護(hù)心肌組織。 2．外源性H2S能抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，減輕創(chuàng)傷失血性休克導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)。 3．外源性H2S能上調(diào)Survivin的表達(dá)，下調(diào)凋亡促進(jìn)因子Caspase-3及Bax的表達(dá)，對創(chuàng)傷失血性休克導(dǎo)致的凋亡有改善作用。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷失血性休克 外源性硫化氫 心肌保護(hù) 炎癥 凋亡
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 縮略語表6-9
• 中文摘要9-14
• Abstract14-19
• 前言19-21
• 文獻(xiàn)回顧21-36
• 第一部分 創(chuàng)傷失血性休克及其損傷機(jī)制21-31
• 1 氧化應(yīng)激損傷 (oxidate stress damage)22
• 2 中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）22-23
• 3 NF-κB（nuclear factor-kappa B）信號通路23-25
• 4 炎癥反應(yīng)（inflammatory reaction）25-28
• 5 細(xì)胞凋亡28-31
• 第二部分 硫化氫及其保護(hù)作用31-36
• 1 H2S 的體內(nèi)生理過程31-32
• 2 H2 S 的病理生理作用32-36
• 外源性硫化氫通過抑制炎癥和凋亡保護(hù)創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌組織的研究36-57
• 1 實驗材料36-39
• 1.1 實驗動物36-37
• 1.2 主要試劑37-38
• 1.3 主要儀器38-39
• 1.4 主要藥物及溶劑的配制39
• 2 實驗方法39-45
• 2.1 實驗分組39-40
• 2.2 創(chuàng)傷失血性休克動物模型的建立40-43
• 2.3 檢測指標(biāo)43-45
• 3 統(tǒng)計學(xué)處理45
• 4 實驗結(jié)果45-53
• 4.1 NaHS 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠血流動力學(xué)的影響45-46
• 4.2 NaHS 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌酶學(xué)指標(biāo)的影響46-47
• 4.3 NaHS 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌炎癥反應(yīng)的影響47-48
• 4.4 NaHS 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的影響48-49
• 4.5 NaHS 對大鼠心肌組織磷酸化 IKK β與磷酸化 IκBα蛋白含量的影響49-50
• 4.6 NaHS 對大鼠心肌組織總 NF-κB 和磷酸化 NF-κB 蛋白含量的影響50-51
• 4.7 NaHS 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠心肌炎癥因子 HMGB1 的影響51-52
• 4.8 NaHS 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠凋亡相關(guān)蛋白的影響52-53
• 5 討論53-57
• 小結(jié)57-59
• 參考文獻(xiàn)59-71
• 個人簡歷和研究成果71-72
• 致謝72

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本文編號：253271